1,492 matches
-
Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 5,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru diluată într-o serie de baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,8, 5,6, 14,0 și respectiv 28,0 UI de vitamina A per ml. Se injectează de mai multe ori câte 20 μl din fiecare soluție
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
determinare este de 2 mg de vitamina E/kg. 2. Principiul Eșantionul se hidrolizează cu o soluție de hidroxid de potasiu etanolic, iar vitamina E se extrage în eterul de petrol. Solventul se îndepărtează prin evaporare; reziduul se dizolvă în metanol și, dacă este cazul, se diluează până la concentrația necesară. Conținutul de vitamina E se determină prin cromatografie lichidă de înaltă performanță în fază inversă (CLHP-PI) cu ajutorul unui detector UV sau fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Etanol, σ = 96% 3.2
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
E se determină prin cromatografie lichidă de înaltă performanță în fază inversă (CLHP-PI) cu ajutorul unui detector UV sau fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Etanol, σ = 96% 3.2. Eter de petrol, interval de fierbere 40°C - 60°C 3.3. Metanol 3.4. Soluție de hidroxid de potasiu, β = 50 g/100 ml 3.5. Soluție de ascorbat de sodiu, β = 10 g/100 ml (vezi observația de la pct. 7.7) 3.6. Sulfură de sodiu, Na2S · x H2O (x = 7-9
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
5 moli/l în glicerol, β = 120 g/l (pentru x = 9) (vezi observația de la pct. 7.8) 3.7. Soluție de fenolftaleină, β = 2 g/100 ml în etanol (3.1) 3.8. Fază mobilă pentru CLHP: amestec de metanol (3.3) și apă, de exemplu 980 + 20 (v + v). Proporțiile exacte sunt determinate de caracteristicile coloanei folosite. 3.9. Azot, liber de oxigen 3.10. Acetat de DL--tocoferol, extra pur, cu activitate garantată 3.10.1. Soluție mamă
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
Se restabilește presiunea atmosferică prin admisie de azot (3.9) și se separă balonul de evaporator. Se elimină restul de solvent într-un curent de azot (3.9) și se dizolvă imediat reziduul într-un volum cunoscut (10-100 ml) de metanol (3.3) (concentrația de DL-α-tocoferol trebuie să fie de ordinul a 5-30 μg/ml). 5.5. Dozarea prin CLHP Vitamina E se separă pe o coloană C18 cu fază inversă (4.5.1), iar concentrația se măsoară cu un detector
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
sunt propuse orientativ; pot fi aplicate alte condiții dacă se obțin rezultate echivalente: Coloana pentru cromatografie lichidă (4.5.1): 250 mm x 4 mm, C18, particule de 5 sau 10 μm, sau echivalent Faza mobilă (3.8): amestec de metanol (3.3) și apă, de exemplu: 980 + 20 (v + v) Debit: 1 - 2 ml/min Detector (4.5.2): detector fluorimetric (excitație: 295 nm/emisie 330 nm) sau detector UV (292 nm) 5.6. Calibrare (acetat de DL-α-tocoferol sau DL-
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
să se evapore 25 ml din acest extract aproape în totalitate pe evaporatorul rotativ (vezi pct. 5.4), se îndepărtează solventul rezidual într-un curent de azot (3.9) și se dizolvă din nou reziduul în 25,0 ml de metanol (3.3). Concentrația nominală a acestei soluții este de 45,5 g de DL--tocoferol per ml, echivalent cu 50 g de acetat de DL--tocoferol per ml. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare folosire. 5.6.1
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
2. Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru într-o serie de baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,5, 5,0, 10,0 și respectiv 25,0 g de acetat de DL --tocoferol per ml, adică 2,28, 4,55, 9,10 g/ml și
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
Soluția etalon de DL --tocoferol 5.6.2.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția etalon de DL--tocoferol (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml, se dizolvă în metanol (3.3) și se completează până la gradație cu metanol. Concentrația nominală a acestei soluții este de 40 g de DL--tocoferol per ml, echivalent cu 44,0 g de acetat de DL--tocoferol. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția etalon de DL--tocoferol (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml, se dizolvă în metanol (3.3) și se completează până la gradație cu metanol. Concentrația nominală a acestei soluții este de 40 g de DL--tocoferol per ml, echivalent cu 44,0 g de acetat de DL--tocoferol. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare utilizare. 5.6.2.2. Prepararea soluției de
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
5.6.2.2. Prepararea soluției de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru în baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,0, 4,0, 8,0 și 20,0 g/ml de DL--tocoferol, adică 2,20, 4,40, 8,79 g/ml și 22,0 g/ml
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
pentru a se evita formarea de BaCO3 care ar putea perturba dozarea) (vezi observația de la pct. 9.3). 3.5. Hidroxid de sodiu 3.6. Acid ortofosforic, w = 85% 3.7. Acid clorhidric, ρ20 = 1,19 g/ml 3.8. Metanol, de calitate CLHP 3.9. Eter de petrol, interval de fierbere: 40 - 60oC 3.10. Soluție de hidroxid de sodiu, c = 1 mol/l: se dizolvă 40,0 g de NaOH (3.5) în apă și se completează până la un
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
etalon de calibrare a triptofanului și etalonului intern Se iau 2,00 ml din soluția mamă de triptofan (3.15) și 2,00 ml din soluția mamă etalon intern (de α-metil-triptofan) (3.16). Se diluează cu apă (3.1) și metanol (3.8), la un volum aproximativ egal și cu aproximativ aceeași concentrație de metanol (10-30%) ca și hidrolizatul final. Această soluție trebuie preparată pentru fiecare utilizare. A se proteja de lumina solară directă în timpul preparării. 3.18. Acid acetic 3
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
soluția mamă de triptofan (3.15) și 2,00 ml din soluția mamă etalon intern (de α-metil-triptofan) (3.16). Se diluează cu apă (3.1) și metanol (3.8), la un volum aproximativ egal și cu aproximativ aceeași concentrație de metanol (10-30%) ca și hidrolizatul final. Această soluție trebuie preparată pentru fiecare utilizare. A se proteja de lumina solară directă în timpul preparării. 3.18. Acid acetic 3.19. Tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 3.20. Etanolamină > 98% 3.21. Soluție de 1 g
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
fiecare utilizare. A se proteja de lumina solară directă în timpul preparării. 3.18. Acid acetic 3.19. Tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 3.20. Etanolamină > 98% 3.21. Soluție de 1 g de tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 (3.19) în 100 ml de metanol (3.8) 3.22. Fază mobilă pentru CLHP: 3,00 g de acid acetic (3.18) + 900 ml apă (3.1) + 50,0 ml soluție (3.21) de tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 (3.19) în metanol (3.8) (1 g/ 100
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
19) în 100 ml de metanol (3.8) 3.22. Fază mobilă pentru CLHP: 3,00 g de acid acetic (3.18) + 900 ml apă (3.1) + 50,0 ml soluție (3.21) de tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 (3.19) în metanol (3.8) (1 g/ 100 ml). Se aduce pH-ul la 5,00 cu etanolamină (3.20). Se completează până la 1 000 ml cu apă (3.1). 4. Aparatură 4.1. Echipament pentru CLHP cu detectare spectrofluorimetrică 4.2. Coloană
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
soluția supranatantă într-un pahar de laborator. Se adaugă 5 ml de acid ortofosforic, c = 0,5 mol/l (3.14). Se aduce pH-ul la 3 cu hidroxid de sodiu, c = 1,0 mol/l (3.10). Se adaugă metanol (3.8) în cantitate suficientă pentru a obține o concentrație de 10-30% metanol în volumul final. Se transferă într-un balon gradat cu capacitate corespunzătoare și se diluează cu apă la volumul necesar pentru cromatografie [aproximativ același volum ca și
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
ortofosforic, c = 0,5 mol/l (3.14). Se aduce pH-ul la 3 cu hidroxid de sodiu, c = 1,0 mol/l (3.10). Se adaugă metanol (3.8) în cantitate suficientă pentru a obține o concentrație de 10-30% metanol în volumul final. Se transferă într-un balon gradat cu capacitate corespunzătoare și se diluează cu apă la volumul necesar pentru cromatografie [aproximativ același volum ca și soluția etalon de calibrare (3.17)]. Se filtrează câțiva mililitri din soluție printr-
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
14). Se menține recipientul în baia de răcire și se neutralizează cu acid clorhidric, c = 6 mol/l (3.11 ) amestecând continuu, apoi se aduce pH-ul la 3,0 cu HCl, c = 1 mol/l (3.12). Adăugați suficient metanol pentru a obține o concentrație cuprinsă între 10 și 30% metanol în volumul final. Se transferă într-un balon gradat cu capacitate corespunzătoare și se diluează cu apă la volumul necesar pentru cromatografie (de exemplu 100 ml). Adaosul de metanol
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
cu acid clorhidric, c = 6 mol/l (3.11 ) amestecând continuu, apoi se aduce pH-ul la 3,0 cu HCl, c = 1 mol/l (3.12). Adăugați suficient metanol pentru a obține o concentrație cuprinsă între 10 și 30% metanol în volumul final. Se transferă într-un balon gradat cu capacitate corespunzătoare și se diluează cu apă la volumul necesar pentru cromatografie (de exemplu 100 ml). Adaosul de metanol nu trebuie să provoace precipitarea. Se filtrează câțiva mililitri din soluție
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
metanol pentru a obține o concentrație cuprinsă între 10 și 30% metanol în volumul final. Se transferă într-un balon gradat cu capacitate corespunzătoare și se diluează cu apă la volumul necesar pentru cromatografie (de exemplu 100 ml). Adaosul de metanol nu trebuie să provoace precipitarea. Se filtrează câțiva mililitri din soluție printr-un filtru membrană de 0,45 μm (4.5) înainte de se injecta pe o coloană CLHP. Se trece la etapa de cromatografie conform pct. 5.4. A se
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
3 μm, sau echivalent Temperatura coloanei: temperatura camerei Faza mobilă (3.22): 3,00 g de acid acetic (3.18) + 900 ml de apă (3.1) + 50,0 ml de soluție (3.21) de tricloro-1,1,1-metil-2-propanol-2 (3.19) în metanol (3.8) (1 g/100 ml). Se aduce pH-ul la 5,00 cu etanolamină (3.20). se completează cu până la 1 000 ml cu apă (3.1). Debit: 1 ml/min Timp total de emulsie: cca. 34 min Lungimea
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
urmată de o curățare a coloanei pe gradient: Coloana pentru cromatografie lichidă: 125 mm x 4 mm, C18, particule de 5 μm, sau echivalent Temperatura coloanei: 32oC Faza mobilă: A: amestec 95/5 de KH2PO4, la 0,01 mol/l/metanol (V + V) B: metanol Programul gradientului: 0 min 100% A 0% B 15 min 100% A 0% B 17 min 60% A 40% B 19 min 60% A 40% B 21 min 100% A 0% B 33 min 100% A
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
a coloanei pe gradient: Coloana pentru cromatografie lichidă: 125 mm x 4 mm, C18, particule de 5 μm, sau echivalent Temperatura coloanei: 32oC Faza mobilă: A: amestec 95/5 de KH2PO4, la 0,01 mol/l/metanol (V + V) B: metanol Programul gradientului: 0 min 100% A 0% B 15 min 100% A 0% B 17 min 60% A 40% B 19 min 60% A 40% B 21 min 100% A 0% B 33 min 100% A 0% B Debit: 1
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
sedimentează ca o masă fibroasă albastră B. Se agită 1 g cu 50 ml de apă. Se transferă 1 ml din amestec într-o eprubetă, se adaugă 1 ml de apă și 0,05 ml de soluție de alfa-naftol în metanol, proaspăt preparată. Se înclină eprubeta și se adaugă cu atenție 2 ml de acid sulfuric pe peretele eprubetei, în așa fel încât să formeze un strat inferior. La interfață apare o culoare roșiatică-violetă C. Dă reacția de sodiu Puritate Pierdere
jrc4608as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89774_a_90561]