1,062 matches
-
cataliza reacțiilor biologice, situându-se printre cele mai remarcabile biomolecule cunoscute, datorită specificității și puterii lor catalitice extraordinare, mult mai mare decât celei a catalizatorilor chimici (A.L. Lehninger, 1970). Cele mai performante metode de separare a enzimelor sunt: disc - electroforeza, focusarea izoelectrică, cromatografia pe schimbători de ioni. Multă vreme s-a crezut că o anumită activitate catalitică, dintr-un extras biologic, trebuie atribuită unei singure enzime, definită ca structură chimică, adică unui singur fel de molecule. Ulterior, prin analize electroforetice
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
Ulterior, prin analize electroforetice, s-a ajuns la concluzia că aceiași activitate catalitică poate fi rezultatul activității mai multor proteine, apărând astfel noțiunea de izoenzime. Izoenzimele sunt forme moleculare multiple ale unei enzime, care pot fi detectate și separate prin electroforeză în gel a extractelor celulare. Sunt considerate izoenzime, numai enzimele izodinamice înrudite structural și care fac parte din același organism. Izoenzimele pot fi distinse între ele prin diferențele lor de activitate (pH optim, sensibilitate la temperatură, sensibilitate față de inhibitori, diferențe
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
oxidoreductaza (E.C.1.11.1.8.) + glutation: peroxid de hidrogen oxidoreductaza (E.C.11.1.9.) + clorură: peroxid de hidrogen oxidoreductaza (E.C.11.1.10.) 3.1.2.1. Metodologia de lucru pentru analiza izoenzimelor peroxidazice Pentru evidențierea și separarea prin electroforeză a izoenzimelor cea mai cunoscută și practicată metodă este analiza disc-electroforeza, care se poate realiza în tuburi verticale ce conțin gel de poliacrilamidă și în plăci conținând același gel. Ultimul tip de separare electroforetică este util în experimentele în care
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
principali la începutul lunii iulie; mojararea și omogenizarea acestora cu Tris-glicină pH 8,3 în raport de ½, în funcție de turgescența probei; centrifugarea la 3000 rotații/minut, timp de 20 minute la temperatura de 4°C; obținerea supernatantelor, decantarea și păstrarea până la electroforeza efectivă la 4°C; separarea în câmp electroforetic a izoenzimelor prin disc-electroforeză în tuburi verticale sau plăci conținând gel de poliacrilamidă 5% și tampon de electrod 5 mM Tris - 38mMglicină, pH 8,3; prepararea gelurile înaintea electroforezei efective; durata procesului
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
și păstrarea până la electroforeza efectivă la 4°C; separarea în câmp electroforetic a izoenzimelor prin disc-electroforeză în tuburi verticale sau plăci conținând gel de poliacrilamidă 5% și tampon de electrod 5 mM Tris - 38mMglicină, pH 8,3; prepararea gelurile înaintea electroforezei efective; durata procesului de electroforeză este de 90 minute, la 4 grade C și 250 V, până când indicatorul de migrare, albastru de bromfenol a migrat 8 cm; developarea benzilor proteice cu activitate peroxidazică în benzidină; toate determinările pentru fiecare soi
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
la 4°C; separarea în câmp electroforetic a izoenzimelor prin disc-electroforeză în tuburi verticale sau plăci conținând gel de poliacrilamidă 5% și tampon de electrod 5 mM Tris - 38mMglicină, pH 8,3; prepararea gelurile înaintea electroforezei efective; durata procesului de electroforeză este de 90 minute, la 4 grade C și 250 V, până când indicatorul de migrare, albastru de bromfenol a migrat 8 cm; developarea benzilor proteice cu activitate peroxidazică în benzidină; toate determinările pentru fiecare soi se repetă de 4 ori
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
Cotnari; Tămâioasă românească - Busuioacă de Bohotin și Galbenă de Odobești - Zghihară de Huși - Bătută neagră. Afost infirmată înrudirea dintre soiurile Coarnă albă și Coarnă neagră, ca făcând parte din același sortogrup (Liliana Rotaru, 1999). În cel de al doilea caz (electroforeză prin plăci) analiza izoenzimelor s-a realizat în cadrul unor soiuri ce au fost grupate după sinonimii sau apartenența la același sortogrup. Zimogramele rezultate confirmă faptul că soiul Alb românesc este sinonim al soiului Alb de Belgorod, soiul Coarnă roșie poate
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
individ la altul și transmitere mendeliană. Principul tehnicii moleculare RFLP de realizare a amprentei genetice are la bază următoarele etape de lucru: izolarea ADN genomic de la organismele de interes; digestia ADN folosind enzime de restricție; separarea fragmentelor de restricție prin electroforeză în gel de agaroză; denaturarea, neutralizarea și fixarea gelurilor obținute pe o membrană unde are loc hibridarea fragmentelor de ADN cu sonde speciale, marcate radioactiv, iar fragmentele complementare sunt vizualizate fie prin autoradiografie, fie prin tehnici neradioactive. Enzimele de restricție
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
organism și celulă; analiza nondisjuncțiilor cromozomiale (aneuploidie). 4. Polimorfisme de lungime ale fragmentelor amplificate (Amplified Fragment Length Polimorphism - markerii AFLP) Reprezintă o combinație între metoda RFLP și tehnica PCR (Vos și colab., 1995). Separarea produșilor de amplificare se realizează prin electroforeză în geluri de poliacrilamidă și evidențiere prin autoradiografiere. În ultimul timp se utilizează secvențiatoarele automate. Prin metoda AFLP, se realizează amplificarea predominantă a acelor fragmente de restricție care au la unul din capete o secvență rezultată în urma fragmentării cu o
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
lor sunt rezultatul unei repetiții de până la 20-30 ori a unităților de 2-3 baze. Principiul metodei constă în amplificarea specifică prin PCR a unui microsatelit pentru un fragment dat din genom, iar evidențierea polimorfismului dintre genotipuri se poate realiza prin electroforeză după mărimea acestor fragmente. Deși foarte complicată metoda ISSR-PCR, este foarte promițătoare în analiza și identificarea genotipurilor, deoarece marcarea este de tip codominant. Pentru prima dată a fost aplicată la vița de vie, în Australia (Thomas și colab., 1993 și
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
un circuit electric nul. 4. COULOMETRIA Electroliza în soluție, legea lui Faraday redă cantitativ raportul dintre sarcina electrică și sarcina chimică atinsă. 9.65 x 104 coulombi este sarcina electrică cauzată de 1 mol al unei specii de electrolit. 5. ELECTROFOREZA Electroforeza este o metodă care are la bază migrarea particulelor încărcate electric într-o soluție sau printr-un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) solubilizate sau dispersate într-o soluție de electrolit și supuse acțiunii unui câmp electric. În metodele
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
circuit electric nul. 4. COULOMETRIA Electroliza în soluție, legea lui Faraday redă cantitativ raportul dintre sarcina electrică și sarcina chimică atinsă. 9.65 x 104 coulombi este sarcina electrică cauzată de 1 mol al unei specii de electrolit. 5. ELECTROFOREZA Electroforeza este o metodă care are la bază migrarea particulelor încărcate electric într-o soluție sau printr-un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) solubilizate sau dispersate într-o soluție de electrolit și supuse acțiunii unui câmp electric. În metodele 1
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
anorganică. Se determină dioxidul de carbon, rezultat în urma combustiei. În prezența indicatorului 2- aminoetanol soluția se colorează în albastru. La electrodul de platină (catod) se formează ionul titrant OH- care va reacționa cu acidul 2-hidroxietilcarbamic, soluția devenind incoloră. I. 5. ELECTROFOREZA Principii generale Electroforeza este o metodă care are la bază migrarea particulelor încărcate electric, solubilizate sau dispersate într-o soluție de electrolit sau printr- un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) sub acțiunea unui câmp electric. Electroforeza aplicată ionilor relativ
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
dioxidul de carbon, rezultat în urma combustiei. În prezența indicatorului 2- aminoetanol soluția se colorează în albastru. La electrodul de platină (catod) se formează ionul titrant OH- care va reacționa cu acidul 2-hidroxietilcarbamic, soluția devenind incoloră. I. 5. ELECTROFOREZA Principii generale Electroforeza este o metodă care are la bază migrarea particulelor încărcate electric, solubilizate sau dispersate într-o soluție de electrolit sau printr- un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) sub acțiunea unui câmp electric. Electroforeza aplicată ionilor relativ mici se numește
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
incoloră. I. 5. ELECTROFOREZA Principii generale Electroforeza este o metodă care are la bază migrarea particulelor încărcate electric, solubilizate sau dispersate într-o soluție de electrolit sau printr- un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) sub acțiunea unui câmp electric. Electroforeza aplicată ionilor relativ mici se numește ionoforeză, iar cea pentru particule coloidale, micele și unele macromolecule poartă termenul de electroforeză. Pot separa compuși ionici, complecși cationici și anionici, ionii proveniți din electroliți slabi (acizi carboxilici, baze organice, molecule organice amfotere
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
dispersate într-o soluție de electrolit sau printr- un suport solid poros (hârtie cromatografică, gel) sub acțiunea unui câmp electric. Electroforeza aplicată ionilor relativ mici se numește ionoforeză, iar cea pentru particule coloidale, micele și unele macromolecule poartă termenul de electroforeză. Pot separa compuși ionici, complecși cationici și anionici, ionii proveniți din electroliți slabi (acizi carboxilici, baze organice, molecule organice amfotere). Aminoacizii în funcție de pH pot avea sarcină pozitivă sau negativă. La punctul izoelectric sau izoionic nu migrează, activitatea electroforetică fiind nulă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
1.s-1). Gradientul de potențial este determinat de intensitatea i a curentului (în amperi) raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
intensitatea i a curentului (în amperi) raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
în amperi) raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de electrolit, cu
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de electrolit, cu o secțiune pătrată
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de electrolit, cu o secțiune pătrată, construit din sticlă transparentă pentru
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de electrolit, cu o secțiune pătrată, construit din sticlă transparentă pentru adaptarea unui spectrometru
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
doi electrozi se leagă la o sursă de curent continuu și se aplică o diferență de potențial de 100-150 volți. Cei trei componenți proteici vor migra spre catod cu viteze diferite ce depind de mărimea, forma și sarcina lor. 2. Electroforeza pe medii stabilizante Se desfășoară pe suporturi solide care evită labilitatea fronturilor și elimină suprafețele de separare false datorate concentrației soluțiilor. Lichidul se găsește într-un suport sau mediu poros: - hârtie de filtru specială pentru electroforeză; - acetat de celuloză sub
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
și sarcina lor. 2. Electroforeza pe medii stabilizante Se desfășoară pe suporturi solide care evită labilitatea fronturilor și elimină suprafețele de separare false datorate concentrației soluțiilor. Lichidul se găsește într-un suport sau mediu poros: - hârtie de filtru specială pentru electroforeză; - acetat de celuloză sub formă de folii pentru separarea de insulină, fibrinogen, proteine, lipoproteine, glicoproteine, hemoglobine ; - geluri de agaroză (proteine), agar (proteine, vitamine, carbohidrați), poliacrilamidă, silice, rășini schimbătoare de ioni, amidon (enzime) etc. Acestea din urmă se caracterizează printr-o
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]