186 matches
-
clorhidric, pentru determinarea CTC, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și a TC. Extrasele sunt apoi diluate și activitatea antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteria din tubul de geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteria din tubul de geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1), fără metilen albastru și acid boric, cu 3 - 4 % concentrație de geloză
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1), fără metilen albastru și acid boric, cu 3 - 4 % concentrație de geloză. Se incubează 3 - 5 zile la 28 - 30ș C, apoi se colectează sporii în 15 ml de etanol (4.6) după verificarea sporulației la microscop si se omogenizează. Această suspensie se păstrează în frigider timp de cel puțin 5 luni
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
cultură este inoculat între 50 și 60ș C. 4. Mediul de cultură și reactivii 4.1 Mediul de bază pentru determinare 1 Glucoză 1 g Peptonă triptică 10 g Extract din carne 1,5 g Extract din drojdie 3 g Geloză, conform cantității 10 - 20 g "Tween 80" 1 ml Soluție tampon de fosfat, pH 5,5 (4.2) 10 ml soluție 5 % (g / v) de acid boric 15 ml soluție 0,5 % de albastru de metil etanol 4 ml Apă
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
10) în loc de amestecul (4.9). 7. Metoda de determinare 7.1 Inocularea mediului de cultură Se inoculează la 50 - 60ș C mediul de bază pentru determinarea (4.1) cu suspensia de spori (3.2). 7.2 Prepararea tăvilor Difuzia în geloză se realizează în tăvi folosind 4 concentrații ale soluției standard (S3, S4, S2 și S1) și 4 concentrații ale extractului (U3, U4, U2 și U1). Cele 4 concentrații ale extractului și ale soluției standard trebuie să fie plasate pe fiecare
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
ale extractului și ale soluției standard trebuie să fie plasate pe fiecare tavă. Se aleg tăvile, care sunt destul de încăpătoare pentru a permite să fie făcute cel puțin 8 găuri cu un diametru de 10 - 13 mm în mediul de geloză. Se calculează cantitatea de mediu de cultură inoculat (7.1) necesară pentru a furniza o acoperire uniformă de aproximativ 2 mm grosime. Testul ar trebui să fie efectuat de preferință pe tăvi care au talere de sticlă netede prevăzute cu
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
de Clorotetraciclină (CTC), oxitetraciclină (OTC) și tetraciclină (TC) în care concentrațiile sunt mai mari de 1 g per kg, presupunând că nu sunt interferențe de alte substanțe care să facă neclar extractul. Această metodă este mai rapidă decât difuzia în geloză. 2. Principiu Pentru determinarea CTC, proba este extrasă cu un amestec de acetonă, apă și acid clorhidric, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și TC. Extractele sunt apoi diluate și efectele antibioticelor sunt determinate
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
a fost însămânțat cu Staphylococus aureus și la care s-a adăugat antibioticul. Transmisia luminii depinde de concentrația de antibiotic. 3. Microorganisme: Staphylococus aureus K 1411 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu S. aureus într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat 1,5 - 3 % de geloză (în funcție de calitate). Se incubează peste noapte la 37ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează geloza la fiecare 4 săptămâni
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
concentrația de antibiotic. 3. Microorganisme: Staphylococus aureus K 1411 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu S. aureus într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat 1,5 - 3 % de geloză (în funcție de calitate). Se incubează peste noapte la 37ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează geloza la fiecare 4 săptămâni. În același timp se prepară sub-culturi pentru uzul de laborator. 3.2 Prepararea inoculum-ului Cu 24 de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat 1,5 - 3 % de geloză (în funcție de calitate). Se incubează peste noapte la 37ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează geloza la fiecare 4 săptămâni. În același timp se prepară sub-culturi pentru uzul de laborator. 3.2 Prepararea inoculum-ului Cu 24 de ore înaintea folosirii, se re-inoculează geloza cu o sub-cultură și se incubează peste noapte la 37ș C. Se suspendă
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
noapte la 37ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează geloza la fiecare 4 săptămâni. În același timp se prepară sub-culturi pentru uzul de laborator. 3.2 Prepararea inoculum-ului Cu 24 de ore înaintea folosirii, se re-inoculează geloza cu o sub-cultură și se incubează peste noapte la 37ș C. Se suspendă toate culturile conținute într-un tub de geloză în aproximativ 2 ml din mediul de bază (4.1), apoi se transferă suspensia în condiții sterile în aproximativ
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
se prepară sub-culturi pentru uzul de laborator. 3.2 Prepararea inoculum-ului Cu 24 de ore înaintea folosirii, se re-inoculează geloza cu o sub-cultură și se incubează peste noapte la 37ș C. Se suspendă toate culturile conținute într-un tub de geloză în aproximativ 2 ml din mediul de bază (4.1), apoi se transferă suspensia în condiții sterile în aproximativ 100 ml din același mediu de bază (4.1). Se incubează într-o baie de apă la 37ș C până când creșterea
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
pe curbă valorile de transmisie ale extractelor. Se calculează conținutul de antibiotice al probei. 9. Repetabilitatea Diferența dintre rezultatele celor două determinări paralele efectuate asupra probei nu trebuie să depășească 10 % în valoarea relativă. 3. DETERMINAREA OLEANDOMICINEI - prin difuzia pe geloză - 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă, chiar în prezența tetraciclinelor, determinarea conținutul de oleandomicină în furaje, concentrate și preamestecuri, unde sunt prezenți mai mult de 0,5 ppm. 2. Principiu Proba este extrasă cu soluție de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
unde sunt prezenți mai mult de 0,5 ppm. 2. Principiu Proba este extrasă cu soluție de metanol diluată de tri(hidroximetilamino)metan. După centrifugare, extractul este diluat și este determinată activitatea antibioticului său prin măsurarea difuziei oleandomicinei în mediul geloză însămânțat cu B. cereus. Difuzia este făcută vizibilă de formarea unor zone de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganisme: B. cereus K 230 TR1 ( rezistent la tetraciclină) 3.1 Menținerea
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
unor zone de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganisme: B. cereus K 230 TR1 ( rezistent la tetraciclină) 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu B. cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) la care se adaugă 100 μg pe 5 ml de Oxitetraciclină. Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura în frigider și se re-inoculează mediul de geloză cu el
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) la care se adaugă 100 μg pe 5 ml de Oxitetraciclină. Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura în frigider și se re-inoculează mediul de geloză cu el la fiecare 4 săptămâni. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteriile din tubul de geloză (3.1) folosind aproximativ 3 ml de salină fiziologică (4.3). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
ml de Oxitetraciclină. Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura în frigider și se re-inoculează mediul de geloză cu el la fiecare 4 săptămâni. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteriile din tubul de geloză (3.1) folosind aproximativ 3 ml de salină fiziologică (4.3). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1) care are 3-4 % concentrația de geloză. Se incubează 3 - 5 zile la
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
Se colectează bacteriile din tubul de geloză (3.1) folosind aproximativ 3 ml de salină fiziologică (4.3). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1) care are 3-4 % concentrația de geloză. Se incubează 3 - 5 zile la 28 - 30ș C, apoi se colectează sporii în 15 ml de etanol (4.4) după verificarea sporulației la microscop, și se omogenizează. Această suspensie se păstrează într-un frigider 5 luni sau mai mult
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
Mediul de cultură este inoculat la 60ș C. 4. Mediul de cultură și reactivii 4.1 Mediul pentru menținerea sușei parentale 2 Glucoză 1 g Peptonă triptică 10 g Extract de carne 1,5 g Extract de drojdie 3 g Geloză, în funcție de calitate de la 10 la 20 g Apă distilată la 1 000 ml Se ajustează pH-ul la 5,6 imediat înainte de folosire. 4.2 Mediu de bază pentru determinare 2) Mediul (4.1) ajustat la pH 8,8. 4
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
1 + 1) folosind soluția (4.6). 7. Metoda de determinare 7.1 Inocularea mediului de cultură Se inoculează la 60ș C mediul de bază pentru determinarea (4.2) cu suspensia de spori (3.2). 7.2 Prepararea talerelor Difuzia în geloză este realizată în tăvi folosind 4 concentrații ale soluțiile standard (S3, S4, S2 și S1) și 4 concentrații ale extrasului (U3, U4, U2 și U1). Cele 4 concentrații ale extrasului și ale soluției standard trebuie să fie plasate pe fiecare
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
ale extrasului și ale soluției standard trebuie să fie plasate pe fiecare tavă. Se aleg tăvile, care sunt destul de încăpătoare pentru a permite să fie făcute cel puțin 8 găuri cu un diametru de 10 - 13 mm în mediul de geloză. Se calculează cantitatea de mediu de cultură inoculat (7.1) necesară pentru a furniza o acoperire uniformă de aproximativ 2 mm grosime. Testul ar trebui să fie efectuat de preferință pe tăvi care au talere de sticlă netede prevăzute cu
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
activității relative se calculează folosind următoarea formulă: Activitatea reală = activitatea presupusă x activitatea relativă 9. Repetabilitatea Diferența dintre rezultatele celor două determinări paralele efectuate asupra probei nu trebuie să depășească 10 % în valoare relativă. 4. DETERMINAREA TILOZINEI - prin difuzia la geloză - 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă determinarea conținutul de tilozină din furaje, concentrate și preamestecuri unde se află mai mult de 2 ppm. 2. Principiu Proba este testată cu o soluție tampon de fosfat pH 8
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
evidențiată de formarea zonelor de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganisme: Sarcina lutea ATCC nr. 9341 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu Sarcina lutea într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), se ajustează la pH 7,0. Se incubează peste noapte la aproximativ 35ș C. Se păstrează cultura în frigider și se re-inoculează cu geloză în fiecare lună. 3.2 Prepararea suspensiei bacteriale Se
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]