942 matches
-
C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea serului de testare, se diluează AcM la 1:100 într-un tampon de blocare și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii, cu excepția blank-ului. 5. Se incubează pentru
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea serului de testare, se diluează AcM la 1:100 într-un tampon de blocare și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii, cu excepția blank-ului. 5. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C. Se spală de trei ori cu PBS și se usucă cu hârtie sugativă. 6. Se diluează concentratul de iepure antișoarece la 1/5 000 într-un tampon
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
minute la 37 °C. Se spală de trei ori cu PBS și se usucă cu hârtie sugativă. 6. Se diluează concentratul de iepure antișoarece la 1/5 000 într-un tampon de blocare și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii. 7. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C. Se spală de trei ori cu PBS și se usucă cu hârtie sugativă. 8. Se decongelează OPD și, imediat înainte de utilizare, se adaugă 5 µl de peroxid de hidrogen
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de trei ori cu PBS și se usucă cu hârtie sugativă. 8. Se decongelează OPD și, imediat înainte de utilizare, se adaugă 5 µl de peroxid de hidrogen 30 % la fiecare 10 ml de OPD. Se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii. Se așteaptă dezvoltarea culorii pentru aproximativ 10 minute și se întrerupe reacția cu acid sulfuric 1M (50 µl pe godeu). Culoarea ar trebui să se dezvolte în godeurile de control AcM și în godeurile ce conțin ser fără anticorpi
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
5 µl de peroxid de hidrogen 30 % la fiecare 10 ml de OPD. Se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii. Se așteaptă dezvoltarea culorii pentru aproximativ 10 minute și se întrerupe reacția cu acid sulfuric 1M (50 µl pe godeu). Culoarea ar trebui să se dezvolte în godeurile de control AcM și în godeurile ce conțin ser fără anticorpi de BTV. 9. Se examinează și se înregistrează plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
fiecare 10 ml de OPD. Se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii. Se așteaptă dezvoltarea culorii pentru aproximativ 10 minute și se întrerupe reacția cu acid sulfuric 1M (50 µl pe godeu). Culoarea ar trebui să se dezvolte în godeurile de control AcM și în godeurile ce conțin ser fără anticorpi de BTV. 9. Se examinează și se înregistrează plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul unui program, pe calculator se editează valorile densității
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii. Se așteaptă dezvoltarea culorii pentru aproximativ 10 minute și se întrerupe reacția cu acid sulfuric 1M (50 µl pe godeu). Culoarea ar trebui să se dezvolte în godeurile de control AcM și în godeurile ce conțin ser fără anticorpi de BTV. 9. Se examinează și se înregistrează plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul unui program, pe calculator se editează valorile densității optice (DO) și procentul de inhibiție
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul unui program, pe calculator se editează valorile densității optice (DO) și procentul de inhibiție (PI) ale serurilor de testare și blank pe baza valorii medii înregistrate în godeurile de control antigen. Aceste valori ale DO și PI se utilizează pentru a determina dacă testul a fost efectuat în limitele acceptabile. Limitele superioare (UCL) și cele inferioare (LCL) ale controlului AcM (antigen plus AcM în absența serului de testare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
valorile 0,4 și 1,4 ale DO. Plăcile care nu sunt conforme criteriilor menționate anterior trebuie respinse. În absența unui program pe calculator, se editează valorile DO cu ajutorul unei imprimante ELISA. Se calculează valoarea medie a densității optice pentru godeurile de control antigen, care este echivalentă cu 100 %. Se determină valoarea DO la 50 % și se calculează manual pozitivitatea și negativitatea fiecărui eșantion. Procentul valorii de inhibiție (PI) = 100 - (DO a fiecărui control/media DO a Cm) × 100. Godeurile ce
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
pentru godeurile de control antigen, care este echivalentă cu 100 %. Se determină valoarea DO la 50 % și se calculează manual pozitivitatea și negativitatea fiecărui eșantion. Procentul valorii de inhibiție (PI) = 100 - (DO a fiecărui control/media DO a Cm) × 100. Godeurile ce contin serul de control negativ in duplicat, godeurile de blank in duplicat, ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 25 % și -25 % și, respectiv, între + 95 % și + 105 %. Neconformitatea cu aceste limite nu invalidează placa, însă avertizează cu privire la
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
100 %. Se determină valoarea DO la 50 % și se calculează manual pozitivitatea și negativitatea fiecărui eșantion. Procentul valorii de inhibiție (PI) = 100 - (DO a fiecărui control/media DO a Cm) × 100. Godeurile ce contin serul de control negativ in duplicat, godeurile de blank in duplicat, ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 25 % și -25 % și, respectiv, între + 95 % și + 105 %. Neconformitatea cu aceste limite nu invalidează placa, însă avertizează cu privire la formarea unei culori de fond. Serurile de control puternic
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de diagnostic pentru serurile de testare este 50 % (PI de 50 % sau DO de 50 %). Eșantioanele ce prezintă valori ale PI > 50 % se consideră negative. Eșantioanele ce prezintă valori ale PI mai mari si mai mici decât pragul pentru godeurile in duplicat se consideră suspecte; aceste eșantioane se pot retesta prin metoda testului unic și/sau prin metoda titrării. Eșantioanele pozitive se pot de asemenea titra pentru a indica gradul de pozitivitate. Citirea cu ochiul liber: Eșantioanele pozitive și negative
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează antigenul BTV în PBS la o diluție de 1:20 pe o placă de microtitrare într-o serie de diluții în progresie geometrică (50 µl/godeu) utilizând o pipetă multicanal. 2. Se incubează o oră la 37 °C într-un agitator orbital. 3. Se spală plăcile de trei ori cu PBS. 4. Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat la 1/100) în fiecare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
utilizând o pipetă multicanal. 2. Se incubează o oră la 37 °C într-un agitator orbital. 3. Se spală plăcile de trei ori cu PBS. 4. Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat la 1/100) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Se incubează o oră la 37 °C într-un incubator-agitator. 6. Se spală plăcile de trei ori cu PBS. 7. Se adaugă 50 µl de globulină de iepure antișoarece conjugată cu peroxidază din hrean, diluată
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
o oră la 37 °C într-un incubator-agitator. 6. Se spală plăcile de trei ori cu PBS. 7. Se adaugă 50 µl de globulină de iepure antișoarece conjugată cu peroxidază din hrean, diluată la o concentrație pretitrată optimă, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Se incubează o oră la 37 °C. 9. Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare. Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu). În testul de concurență
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
pretitrată optimă, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Se incubează o oră la 37 °C. 9. Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare. Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu). În testul de concurență, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, astfel, se alege o diluție a antigenului ce se găsește pe curba de titrare (nu în zona de platou) care dă aproximativ o DO de 0,8 după 10
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Procedura: Se toarnă agaroză 1 % preparată în tampon de borat sau de barbitol de sodiu, pH de la 8,5 la 9,0, într-o placă Petri de o adâncime minimă de 3,0 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
9,0, într-o placă Petri de o adâncime minimă de 3,0 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
placă Petri de o adâncime minimă de 3,0 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și 5 sunt umplute cu
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și 5 sunt umplute cu seruri de testare. Sistemul este incubat o perioadă de până la 72 de ore
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și 5 sunt umplute cu seruri de testare. Sistemul este incubat o perioadă de până la 72 de ore la temperatura ambiantă, într-o etuvă umedă
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și 5 sunt umplute cu seruri de testare. Sistemul este incubat o perioadă de până la 72 de ore la temperatura ambiantă, într-o etuvă umedă închisă. Interpretarea: Un ser de testare este pozitiv în cazul în care formează
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Procedura: Se toarnă agaroză 1 % preparată în tampon de borat sau de barbitol de sodiu, pH de la 8,5 la 9,0, într-o placă Petri de o adâncime minimă de 3,0 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
9,0, într-o placă Petri de o adâncime minimă de 3,0 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiată în agar. Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 mm. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]