373 matches
-
fracțiunii alcoolilor elimină necesitatea tratamentului nesaponificabilului cu alumină. În acest mod, toți compușii de natură acidă (acizi grași și alții) sunt reținuți pe linia de depunere. Se obține astfel banda de alcooli alifatici și terpenici, separați net de banda de steroli. 5.2.2. Se introduce în cuva de developare un amestec de benzen-acetonă 95/5 (V/V) până la o înălțime de aproximativ 1 cm. Se poate utiliza în loc un amestec hexan-eter etilic 65/35 (V/V). Se închide cuva folosind
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
cm și tM timpul cronometrat în secunde. Figura 1: Cromatograma fracțiunii alcoolice a unui ulei virgin 1 = Eicosanol 2 = Docosanol 3 = Tricosanol 4 = Tetracosanol 5 = Pentacosanol 6 = Hexacosanol 7 = Heptacosanol 8 = Octacosanol ANEXA V DETERMINAREA COMPOZIȚIEI ȘI A CONȚINUTULUI DE STEROLI CU AJUTORUL CROMATOGRAFIEI ÎN FAZĂ GAZOASĂ CU COLOANĂ CAPILARĂ 1. OBIECT Metoda descrie procedeul de determinare a conținutului de steroli, simpli și totali, al materiilor grase. 2. PRINCIPIUL METODEI Materia grasă, la care s-a adăugat α-colestanol ca etalon intern, este
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
Docosanol 3 = Tricosanol 4 = Tetracosanol 5 = Pentacosanol 6 = Hexacosanol 7 = Heptacosanol 8 = Octacosanol ANEXA V DETERMINAREA COMPOZIȚIEI ȘI A CONȚINUTULUI DE STEROLI CU AJUTORUL CROMATOGRAFIEI ÎN FAZĂ GAZOASĂ CU COLOANĂ CAPILARĂ 1. OBIECT Metoda descrie procedeul de determinare a conținutului de steroli, simpli și totali, al materiilor grase. 2. PRINCIPIUL METODEI Materia grasă, la care s-a adăugat α-colestanol ca etalon intern, este saponificată cu hidroxid de potasiu soluție în etanol, apoi nesaponificabilul este extras cu eter etilic. Fracțiunea sterolică este separată
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
grasă, la care s-a adăugat α-colestanol ca etalon intern, este saponificată cu hidroxid de potasiu soluție în etanol, apoi nesaponificabilul este extras cu eter etilic. Fracțiunea sterolică este separată de extractul nesaponificabil prin cromatografie pe placă de silicagel bazic; sterolii recuperați din silicagel sunt transformați în trimetilsilileteri și analizați prin cromatografie în fază gazoasă în coloană capilară. 3. APARATURĂ 3.1. Balon de 250 ml echipat cu un condensator cu reflux cu racordurile din sticlă rodată. 3.2. Pâlnie de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
0,2 %. Aceasta este făcută ușor bazică prin adăugarea de câteva picături dintr-o soluție alcoolică 2N de hidroxid de potasiu. 4.13. Piridină anhidră, pentru cromatografie. 4.14. Hexametildisilazan. 4.15. Trimetilclorosilan. 4.16. Soluție etalon de trimetilsilileter de steroli: se prepară în momentul folosirii din sterolii extrași din uleiurile care le conțin. 4.17. α-colestanol soluție de 0,2 % (m/V) în cloroform (etalon intern). 4.18. Gaz vector: hidrogen sau heliu pur, pentru cromatografie în fază gazoasă. 4
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
prin adăugarea de câteva picături dintr-o soluție alcoolică 2N de hidroxid de potasiu. 4.13. Piridină anhidră, pentru cromatografie. 4.14. Hexametildisilazan. 4.15. Trimetilclorosilan. 4.16. Soluție etalon de trimetilsilileter de steroli: se prepară în momentul folosirii din sterolii extrași din uleiurile care le conțin. 4.17. α-colestanol soluție de 0,2 % (m/V) în cloroform (etalon intern). 4.18. Gaz vector: hidrogen sau heliu pur, pentru cromatografie în fază gazoasă. 4.19. Gaz auxiliar: hidrogen sau heliu pur
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
nesaponificabilului 5.1.1. În balonul de 250 ml se introduce, cu ajutorul microseringii de 500 μl, un volum de soluție de α-colestanol de 0,2 % în cloroform (4.17) care conține o cantitate de α-colestanol ce corespunde la aproximativ 10 % steroli conținuți în partea alicotă din proba de prelevat pentru determinare. De exemplu, pentru 5 g de probă trebuie să se adauge 500 μg de soluție de α-colestan de 0,2 %, dacă este vorba de o probă de ulei de măsline
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
Nota 2: Folosirea plăcilor bazice de silicagel pentru separarea fracțiunii sterolice elimină necesitatea tratamentului nesaponificabilului cu alumină. În acest mod, toți compușii de natură acidă (acizi grași și alții) sunt reținuți pe linia de depunere. Se obține astfel banda de steroli separată net de banda de alcooli alifatici și terpenici. 5.2.2. Se introduce în cuva de developare un amestec benzen-acetonă 95/5 (V/V) până la o înălțime de aproximativ 1 cm. Se poate utiliza în loc un amestec hexan-eter etilic
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
o margine, 0,3 ml din soluția menționată anterior într-o linie continuă, cât mai fină și mai uniformă posibil. În paralel cu linia de depozit, se depun, la una dintre extremitățile plăcii, 2-3 μl de soluție de referință de steroli (4.11), în scopul identificării benzii de steroli în timpul ultimei developări. 5.2.4. Se pune placa în cuva de developare, preparată conform descrierii de la pct. (5.2.2.) Temperatura ambiantă trebuie să fie menținută între 15 și 20°C.
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
anterior într-o linie continuă, cât mai fină și mai uniformă posibil. În paralel cu linia de depozit, se depun, la una dintre extremitățile plăcii, 2-3 μl de soluție de referință de steroli (4.11), în scopul identificării benzii de steroli în timpul ultimei developări. 5.2.4. Se pune placa în cuva de developare, preparată conform descrierii de la pct. (5.2.2.) Temperatura ambiantă trebuie să fie menținută între 15 și 20°C. Se închide imediat camera cu capacul și se
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
de developare și se trece la evaporarea solventului într-un curent de aer cald sau prin menținerea plăcii scurt timp sub hotă. 5.2.5. Se vaporizează placa ușor și uniform cu soluție de dicloro-22-72 fluoresceină. Se identifică banda de steroli prin alinierea cu pata obținută cu soluția de referință; se delimitează banda cu un creion negru de-a lungul marginilor de fluorescență. 5.2.6. Se răzuiește silicagelul cu o spatulă metalică în zona delimitată. Materialul extras, sfărâmat fin, este
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
3. Prepararea trimetilsilileterilor 5.3.1. Se adaugă, în tubul care conține fracțiunea sterolică, reactivul de sililare, constituit dintr-un amestec de piridină-hexametildisilazan-trimetilclorosilan 9/3/1 (V/V/V) (nota 4) într-o proporție de 50 μl pe miligram de steroli, evitând toate absorbțiile de umiditate (nota 5). Nota 4: În comerț există soluții gata pentru folosire: în plus, alți reactivi silanizanți, precum, de exemplu, bi-trimetilsililtrifluoracentamida + 1 % trimetilclorosilan care se diluează cu un volum egal de piridină anhidră. 5.3.2
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
folosire: în plus, alți reactivi silanizanți, precum, de exemplu, bi-trimetilsililtrifluoracentamida + 1 % trimetilclorosilan care se diluează cu un volum egal de piridină anhidră. 5.3.2. Se închide eprubeta, se agită cu grijă (fără a o răsturna) până la solubilizarea completă a sterolilor. Se lasă în repaus minimum 15 minute la temperatura ambiantă, apoi se centrifughează timp de câteva minute: soluția limpede este gata pentru analiza prin cromatografie în faza gazoasă. Nota 5: Eventuala formare a unei opalescențe ușoare este normală și nu
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
minute, - valoarea de vârf pentru campesterol trebuie să fie: pentru uleiul de măsline (conținut mediu 3 %) 15 ± 5 % din limita scării, iar pentru uleiul de soia (conținut mediu 20 %) 80 ± 10 % din limita scării, - trebuie să se efectueze separarea tuturor sterolilor prezenți; celelalte valori de vârf separate să fie, de asemenea, complet rezolvate, ceea ce înseamnă că traseul valorii de vârf trebuie să se unească cu linia de bază înaintea de ieșirea din valoarea de vârf următoare. Totuși, o rezolvare incompletă este
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
gol. Se introduce acul prin membrana complexului de injecție și după 1-2 secunde se injectează rapid și apoi se extrage lent acul, după aproximativ 5 secunde. 5.4.3.2. Se procedează la înregistrare până la eluarea completă a TMSE a sterolilor prezenți. Linia de bază trebuie să corespundă întotdeauna cu calitățile impuse (5.4.1.2). 5.4.4. Identificarea valorilor de vârf Identificarea valorilor de vârf unice este efectuată pe baza timpilor de retenție și prin comparație cu amestecul de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
de bază trebuie să corespundă întotdeauna cu calitățile impuse (5.4.1.2). 5.4.4. Identificarea valorilor de vârf Identificarea valorilor de vârf unice este efectuată pe baza timpilor de retenție și prin comparație cu amestecul de TMSE de steroli analizați în aceleași condiții. Sterolii sunt eluați în ordinea următoare: colesterol, brassicasterol, 24-metilen-colesterol, campesterol, campestanol, stigmasterol, Δ 7-campesterol, Δ 5,23 stigmastadienol, clerosterol, β-sitosterol, sitostanol, Δ 5-avenasterol, 5,24 stigmastadienol, Δ 7-stigmastenol, Δ 7-avenasterol. În tabelul 1 sunt prezentați timpii
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
întotdeauna cu calitățile impuse (5.4.1.2). 5.4.4. Identificarea valorilor de vârf Identificarea valorilor de vârf unice este efectuată pe baza timpilor de retenție și prin comparație cu amestecul de TMSE de steroli analizați în aceleași condiții. Sterolii sunt eluați în ordinea următoare: colesterol, brassicasterol, 24-metilen-colesterol, campesterol, campestanol, stigmasterol, Δ 7-campesterol, Δ 5,23 stigmastadienol, clerosterol, β-sitosterol, sitostanol, Δ 5-avenasterol, 5,24 stigmastadienol, Δ 7-stigmastenol, Δ 7-avenasterol. În tabelul 1 sunt prezentați timpii de retenție pentru sitosterol, pentru
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
sitosterol, pentru coloanele SE 52 și SE 54. Figurile 1și 2 ilustrează cromatogramele tipice ale unor uleiuri. 5.4.5. Evaluarea cantitativă 5.4.5.1. Se trece, cu ajutorul integratorului, la calculul ariei valorilor de vârf ale α-colestanol și ale sterolilor. Nu se iau în considerare valorile de vârf eventuale de componentelor care nu sunt cuprinse în cele enumerate în tabelul 1. Coeficientul de răspuns GLC al α-colestanolului se consideră a fi egal cu 1. 5.4.5.2. Se calculează
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
în considerare valorile de vârf eventuale de componentelor care nu sunt cuprinse în cele enumerate în tabelul 1. Coeficientul de răspuns GLC al α-colestanolului se consideră a fi egal cu 1. 5.4.5.2. Se calculează conținutul în fiecare sterol simplu, în mg/100 g de materie grasă, după cum urmează: sterol x = în care: Ax = aria valorii de vârf a sterolului x, în milimetri pătrați; As = aria valorii de vârf a α-colestanolului, în milimetri pătrați; ms = masa α-colestanolului adăugat, în
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
cuprinse în cele enumerate în tabelul 1. Coeficientul de răspuns GLC al α-colestanolului se consideră a fi egal cu 1. 5.4.5.2. Se calculează conținutul în fiecare sterol simplu, în mg/100 g de materie grasă, după cum urmează: sterol x = în care: Ax = aria valorii de vârf a sterolului x, în milimetri pătrați; As = aria valorii de vârf a α-colestanolului, în milimetri pătrați; ms = masa α-colestanolului adăugat, în miligrame; m = masa probei prelevate pentru determinare, în grame. 6. EXPRIMAREA
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
GLC al α-colestanolului se consideră a fi egal cu 1. 5.4.5.2. Se calculează conținutul în fiecare sterol simplu, în mg/100 g de materie grasă, după cum urmează: sterol x = în care: Ax = aria valorii de vârf a sterolului x, în milimetri pătrați; As = aria valorii de vârf a α-colestanolului, în milimetri pătrați; ms = masa α-colestanolului adăugat, în miligrame; m = masa probei prelevate pentru determinare, în grame. 6. EXPRIMAREA REZULTATELOR 6.1. Se raportează conținutul fiecărui sterol în miligrame
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
vârf a sterolului x, în milimetri pătrați; As = aria valorii de vârf a α-colestanolului, în milimetri pătrați; ms = masa α-colestanolului adăugat, în miligrame; m = masa probei prelevate pentru determinare, în grame. 6. EXPRIMAREA REZULTATELOR 6.1. Se raportează conținutul fiecărui sterol în miligrame la 100 g de substanță grasă și suma lor ca "steroli totali". 6.2. Se calculează procentul fiecărui sterol pornind de la raportul dintre aria valorii de vârf corespondente și suma ariilor valorilor de vârf ale sterolilor. % de sterol
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
α-colestanolului, în milimetri pătrați; ms = masa α-colestanolului adăugat, în miligrame; m = masa probei prelevate pentru determinare, în grame. 6. EXPRIMAREA REZULTATELOR 6.1. Se raportează conținutul fiecărui sterol în miligrame la 100 g de substanță grasă și suma lor ca "steroli totali". 6.2. Se calculează procentul fiecărui sterol pornind de la raportul dintre aria valorii de vârf corespondente și suma ariilor valorilor de vârf ale sterolilor. % de sterol x = x 100 Ax = aria valorii de vârf x, ΣA = suma ariilor tuturor
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
în miligrame; m = masa probei prelevate pentru determinare, în grame. 6. EXPRIMAREA REZULTATELOR 6.1. Se raportează conținutul fiecărui sterol în miligrame la 100 g de substanță grasă și suma lor ca "steroli totali". 6.2. Se calculează procentul fiecărui sterol pornind de la raportul dintre aria valorii de vârf corespondente și suma ariilor valorilor de vârf ale sterolilor. % de sterol x = x 100 Ax = aria valorii de vârf x, ΣA = suma ariilor tuturor valorilor de vârf. APENDICE Determinarea vitezei liniare a
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
conținutul fiecărui sterol în miligrame la 100 g de substanță grasă și suma lor ca "steroli totali". 6.2. Se calculează procentul fiecărui sterol pornind de la raportul dintre aria valorii de vârf corespondente și suma ariilor valorilor de vârf ale sterolilor. % de sterol x = x 100 Ax = aria valorii de vârf x, ΣA = suma ariilor tuturor valorilor de vârf. APENDICE Determinarea vitezei liniare a gazului În cromatograful în fază gazoasă, reglat în condiții de operare normale, se injectează 1-3 μl de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]