13,001 matches
-
testată cu mai mult sau mai puțin succes în melanom, cancer renal, cancer colo-rectal sau de prostată (Copier J., și colab., 2007). În cancerul de col uterin această strategie a fost testată cu celule manipulate ex vivo în sensul modificării genelor pentru citokine. Este recunoscută capacitatea celulelor transformate ale epiteliului cevical de-a produce cantități exagerate și profiluri modificate de citokine. Ca și în alte tentative de imunoterapie în cancer este important ca studiile să producă rezultate credibile (Hoos A., și
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
serice de IgG inferioare cu un logaritm celor obținute după injecția intramusculară dar acest lucru este compensat de sinteza locală a anticorpilor secretori. Cantitatea mare de imunogen necesară administrării enterale poate fi obținută prin utilizarea unor antigene enterobacteriene recombinate cu gene virale sau prin folosirea plantelor sau levurilor genetic modificate. În plus, administrarea enterică nu necesită procedee neeconomice de purificare a VLP. Varsard A. și colab., 2003 au demonstrat expresia proteinei L1 HPV 16 în Nicotiana tabacum, iar Warzecha H. și
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
cele pozitive pentru grupul HPV 18 (tabelul 35). TEHNICI PCR Mai multe metode PCR au fost propuse pentru detecția unui spectru larg de genotipuri HPV cu mucotropism utilizând primeri consens sau degenerați (tabelul 36). Trusele PCR amplifică regiunea conservată a genei pentru proteina L1, iar tipizarea se face ulterior prin hibridizare specifică de tip sau prin digestie cu enzime de restricție sau prin secvențiere. În unele trialuri clinice post-vaccinare au fost utilizate și truse PCR multiplex capabile să detecteze genele L1
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
a genei pentru proteina L1, iar tipizarea se face ulterior prin hibridizare specifică de tip sau prin digestie cu enzime de restricție sau prin secvențiere. În unele trialuri clinice post-vaccinare au fost utilizate și truse PCR multiplex capabile să detecteze genele L1, E6, și E7 gene pentru fiecare genotip din vaccin. Primerii au fost obținuți după consultarea bazei de date de la Los Alamos care deține secvențele tuturor genotipurilor HPV. Primerii GP5+/GP6+ (de Roda Husman și colab., 1995) au fost îmbunătățiți
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
iar tipizarea se face ulterior prin hibridizare specifică de tip sau prin digestie cu enzime de restricție sau prin secvențiere. În unele trialuri clinice post-vaccinare au fost utilizate și truse PCR multiplex capabile să detecteze genele L1, E6, și E7 gene pentru fiecare genotip din vaccin. Primerii au fost obținuți după consultarea bazei de date de la Los Alamos care deține secvențele tuturor genotipurilor HPV. Primerii GP5+/GP6+ (de Roda Husman și colab., 1995) au fost îmbunătățiți încât, în prezent, sunt mai
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
problemă care vizează siguranța vaccinului pe termen lung este posibilitatea suplinirii funcționale a E7 și E6 de la genotipurile din vaccin de aceleași proteine ale altor genotipuri oncogene sau chiar neoncogene. Proteina virală timpurie E6 este activă în oncogeneză prin blocarea genei celulare pentru antioncoproteina p53 (tumour-suppressor protein). P53 este paznicul integrității genomului celular. În multe cancere p53 este anihilat funcțional dar căile sale de acțiune rămân intacte și pot fi resuscitate (fig. 1). Funcția nealterată a p53 face celula capabilă să
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
sensibil dar mai puțin specific, va progresa odată cu dezvoltarea laboratoarelor și ieftinirea reagenților. 2. BIOLOGIA PAPILOMAVIRUSURILOR UMANE Papilomavirusurile (HPV) sunt implicate în etiologia unor cancere genitale (mai ales de col uterin) și oro-laringiene. Infecții neproductive asociate numai cu expresia unor gene virale timpurii caracterizează celulele transformate cu aceste virusuri. Virionii HPV, icosaedrici, neanvelopați au dimensii mici (55 nm) și sunt termorezistenți. Genomul este ADN ds, circular și conține 8 cadre de citire. Receptorul HPV este integrina alfa 6. Situl de transcriere
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
există totuși un subgrup de virusuri care determină leziuni premaligne sau maligne (fig. 3). Tabelul 3 sintetizează cele mai comune forme clinice și genotipurile frecvent implicate. Tipurile de papilomavirusuri umane au fost definite după diferențele în secvența de nucleotide ale genelor L1, L2 și din regiunea LCR (vezi mai jos), astfel că diferențele de homologie între secvențele de nucleotide ale fiecărui tip de papilomavirus uman sunt de cel puțin 10%. Izolatele independente ale aceluiași tip de papilomavirus sunt raportate ca variante
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
IARC Working Group, 1995) (fig. 5): 1 - regiunea noncodantă -LCR- Long Control Region numită și URR- Upstream Regulatory Region sau NCR - Non Coding Region reprezintă 10% din genom. Această regiune conține secvențe reglatorii (promoter, enhancer, silencer etc.) pentru controlul expresiei genelor virale și are cea mai mare variabilitate. LCR conține elemente de „stimulare” (enhancer) care pot fi activate de factori celulari sau virali cu o anumită specificitate. Cu alte cuvinte, controlul unor cofactori genetici sau comportamentali poate augmenta măsura în care
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
sau comportamentali poate augmenta măsura în care sunt eficiente măsurile profilactice. 2 - regiunea responsabilă de sinteza proteinelor timpurii E (early) reprezentând aproximativ 50% din genom. Aceste proteine sunt implicate în oncogeneză; 3 - regiunea responsabilă de sinteza proteinelor târzii (late) capsidare. Genele târzii L1 și L2 reprezintă aproximativ 40% din genom. Genomul HPV 16 are aproximativ 8000 perechi baze (bp) și codifică 8 proteine a căror funcție este fie în replicarea virală, fie în transformarea celulară: E1 - inițiază replicarea genomului HPV; E2
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
reprezintă aproximativ 40% din genom. Genomul HPV 16 are aproximativ 8000 perechi baze (bp) și codifică 8 proteine a căror funcție este fie în replicarea virală, fie în transformarea celulară: E1 - inițiază replicarea genomului HPV; E2 - reglează transcrierea și replicarea genelor HPV; E4 - pare a fi implicată în maturarea și eliberarea particulelor virale; E5 - este implicată în obstrucția mecanismelor de supresie a diviziunii celulare; E6 - contribuie la transformarea celulelor gazdă prin legarea supresorului tumoral p53; E7 - induce proliferarea celulară, imortalizarea și
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
biologice și de patogenitate. Bazat pe variațiile în secvențele regiunilor L1, L2 și LCR au fost identificate 5 variante naturale al HPV16: Europeană (E), Asiatică (As), Asian-Americană (AA), Africană-1 (Af1), și Africană-2 (Af2). Variații intratipice au fost observate și în genele E2, E4, E5, E6 și E7 ale HPV16. Infecțiile simultane cu mai multe genotipuri HPV depășesc rata de 40%, prezentând tendința de a crește cu severitatea bolii (Burd E.M., 2003). Genotipuri multiple, clasificate ca fiind de risc crescut, au fost
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
98% în HSIL. Testul este relativ ușor de executat, ieftin și robust însă necesită un ochi antrenat pentru interpretare. Trusa comercială germană produsă de Cervatec™ are o sensibilitate similară HC 2 dar o specificitate sporită. MARKERII DE METILARE Absența metilării genelor celulare la femeile fără leziuni cervicale sugerează o mai mare specificitate a acestei metode comparativ cu detecția ADN HPV prin HC2. Metilarea promotorilor este importantă în reglarea exprimării genelor care controlează evoluția ciclului celular. Această metodă are avantajul posibilității de
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
HC 2 dar o specificitate sporită. MARKERII DE METILARE Absența metilării genelor celulare la femeile fără leziuni cervicale sugerează o mai mare specificitate a acestei metode comparativ cu detecția ADN HPV prin HC2. Metilarea promotorilor este importantă în reglarea exprimării genelor care controlează evoluția ciclului celular. Această metodă are avantajul posibilității de a fi efectuată în probe de urină, ceea ce crește acceptabilitatea. Markerii de metilare pot aduce informații și mai utile dacă sunt determinați împreună cu integrarea ADN HPV. EXPRESIA CADHERINEI Pasquale
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
persistentă și malignizarea. Pierderea expresiei E-cadherinei este datorată hipermetilării promoterului pentru gena acestei proteine. De asemenea, lipsa E-cadherinei a fost semnalată în cancere laringiene cu evoluție agresivă. Este un marker imunohistochimic cu valoare prognostică. ANOMALIILE CROMOZOMIALE Creșterea expresiei TERC (telomerase gene RNA component) a fost constatată la 77% dintre femeile cu cancer invaziv. Expresia TERC se datorează prezenței a două sau mai multe copii ale genei TERC pe brațul q al cromozomului 3. Tehnica de lucru este hibridizarea in situ cu
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
evoluție agresivă. Este un marker imunohistochimic cu valoare prognostică. ANOMALIILE CROMOZOMIALE Creșterea expresiei TERC (telomerase gene RNA component) a fost constatată la 77% dintre femeile cu cancer invaziv. Expresia TERC se datorează prezenței a două sau mai multe copii ale genei TERC pe brațul q al cromozomului 3. Tehnica de lucru este hibridizarea in situ cu sonde marcate fluorescent (tehnica FISH). Sensibilitatea este de 100% iar specifictatea de 70% însă tehnica este foarte laborioasă și complicată tehnic. Alți markeri pentru proliferarea
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
de către virusurile ARN, iar TLR 9 pentru rezistența înnăscută față de virusurile ADN. TLR 9 sezizează ca structuri specifice ADN HPV și, în același timp, străine pentru gazdă, motivul CpG nemetilat. Un eveniment cheie în inițierea răspunsului imun înăscut este activarea genelor pentru interferonul (IFN) tip I. La nivel molecular exprimarea genelor pentru IFN este fin reglată de semnale intra și extracelulare generate de activarea factorului nuclear kappa B, pe de o parte, și de activarea factorilor de transcriere reglați de IFN
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
virusurile ADN. TLR 9 sezizează ca structuri specifice ADN HPV și, în același timp, străine pentru gazdă, motivul CpG nemetilat. Un eveniment cheie în inițierea răspunsului imun înăscut este activarea genelor pentru interferonul (IFN) tip I. La nivel molecular exprimarea genelor pentru IFN este fin reglată de semnale intra și extracelulare generate de activarea factorului nuclear kappa B, pe de o parte, și de activarea factorilor de transcriere reglați de IFN (abreviat IRF). Răspunsul timpuriu în infecția virală este caracterizat de
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
citokine proinflamatorii. POLIMORFISMUL GENETIC ȘI SUSCEPTIBILITATEA LA CANCERUL DE COL Dacă infecția HPV este principalul determinant extern al cancerului de col, susceptibilitatea genetică este elementul major ce ține de gazdă. Polimorfismul genetic, identificat de antigenele de histocompatibilitate, controlează expresia unor gene care intervin în arhitectura tisulară și în reactivitatea biologică în situații ca inflamația, alterarea ciclului celular, susceptibilitatea la transformarea malignă. Receptorul pentru vitamian D (vDr) este un marker asociat funcțiilor de barieră ale epidermului sau mucoaselor dar și răspunsului inflamator
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
adjuvanți distincți nu numai că este imunostimulatoare dar previne pericolul autoimunității induse de vaccinuri. Recunoașerea modelului molecular asociat virusurilor patogene de către TLR inițiază o cascadă de semnale celulare care conduc la activarea unei importante căi nucleare de reglare a expresiei genelor: calea factorului nuclear kappa B. Genele controlate sunt implicate în inflamație, necroză și reparare celulară etc. RĂSPUNSUL IMUN DUPĂ INFECȚIA NATURALĂ Papilomavirusurile inițiază infecția în stratul bazal al epiteliului cervical iar replicarea este activă mai ales în keratinocitele în curs
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
imunostimulatoare dar previne pericolul autoimunității induse de vaccinuri. Recunoașerea modelului molecular asociat virusurilor patogene de către TLR inițiază o cascadă de semnale celulare care conduc la activarea unei importante căi nucleare de reglare a expresiei genelor: calea factorului nuclear kappa B. Genele controlate sunt implicate în inflamație, necroză și reparare celulară etc. RĂSPUNSUL IMUN DUPĂ INFECȚIA NATURALĂ Papilomavirusurile inițiază infecția în stratul bazal al epiteliului cervical iar replicarea este activă mai ales în keratinocitele în curs de diferențiere. Răspunsul imun după infecția
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
timpurii E6 și E7 inhibă căile interferonului de tip I, dar acest efect este specific tipului de virus (O’Brien P.M., Campo M.S., 2003). E6 HPV16 se leagă și inactivează funcția factorului de transcripție IRF-3, cu rol important în reglarea genelor IFN-alfa și IFN-beta. Inhibiția răspunsului imun nespecific nu se produce cu E6 de la HPVlr (HPV6) și de la alte papilomavirusuri benigne. E6 HPV18 poate inhiba calea de activare a interferonului mediată de Jak-STAT. Această interacție se produce, de asemenea, cu E6
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
om a fost publicată de Zhang L.F., și colab., 1991. Acest grup, condus de Jan Frazer, a demonstrat că cel mai avantajos sistem de producție a unei cantități suficiente de proteină virală pentru un vaccin de uz uman este clonarea genei L1 într-un vector prokariot și expresia ei în E. coli. Patentul pentru proprietatea intelectuală asupra vaccinurilor HPV VLP L1 este deținut de australianul Frazer de la Universitatea din Queensland. Acest patent a fost vândut unor importanți producători de vaccin: Merck
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
neg) sau care au vindecat spontan infecția (poz/neg) progresează în proporție de cel mult 10%. În prezent se aplică două vaccinuri profilactice HPV care conțin proteina capsidară majoră L1 asamblată în VLP (virus-like particles). Vaccinurile sunt produse prin expresia genelor L1 în celule prokariote (Gardasil®) sau eukaryote (Cervarix®). Aceste proteine se asamblează în VLP care sunt capside virale goale, lipsite de genomul viral. Cele două vaccinuri comerciale sunt: Gardasil® - vaccin tetravalent; protejează împotriva genotipurilor HPV6/11/16/18. Vaccinul recombinant
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
testată cu mai mult sau mai puțin succes în melanom, cancer renal, cancer colo-rectal sau de prostată (Copier J., și colab., 2007). În cancerul de col uterin această strategie a fost testată cu celule manipulate ex vivo în sensul modificării genelor pentru citokine. Este recunoscută capacitatea celulelor transformate ale epiteliului cevical de-a produce cantități exagerate și profiluri modificate de citokine. Ca și în alte tentative de imunoterapie în cancer este important ca studiile să producă rezultate credibile (Hoos A., și
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]