14,361 matches
-
conținând 1, 2, 3, 4 și 5 g/l acid tartric. Se introduc în două flacoane conice a și b 20 ml din aceste soluții și se continuă cum s-a descris anterior pentru eluatul de vin. Un grafic al absorbțiilor acestor soluții în funcție de concentrația lor în acid tartric este o linie dreaptă, ușor curbată spre interior către origine. Dacă este necesar, se trasează această parte a curbei cu mai multă grijă utilizând determinări pe soluții cu concentrații precis cunoscute, mai
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
dreaptă, ușor curbată spre interior către origine. Dacă este necesar, se trasează această parte a curbei cu mai multă grijă utilizând determinări pe soluții cu concentrații precis cunoscute, mai mici de 1,0 g/l. 3.3.5. Exprimarea rezultatelor Absorbția măsurată pentru eluat se găsește pe curba de calibrare și se citește concentrația acidului tartric în vin, în grame pe litru. Rezultatul se exprimă cu o cifră zecimală. 17. ACIDUL CITRIC 1. PRINCIPUL METODEI Acidul citric este convertit în oxaloacetat
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
redusă (NADH): oxaloacetat + NADH + H+ L-maleat + NAD+ piruvat + NADH + H+ L-lactat + NAD+ Cantitatea de NADH oxidată la NAD+ în aceste reacții este proporțională cu cantitatea de citrat prezent. Oxidarea NADH este măsurată de descreșterea rezultantă a puterii de absorbție la o lungime de undă de 340 nm. 2. REACTIVI 2.1. Soluție tampon pH 7,8 (0,51 M glicilglicină: pH 7,8; Zn2+ (0,6x10-3M): Se dizolvă 7,13 g glicilglicină în aproximativ 70 ml de apă bidistilată
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
Se recomandă ca înainte de determinare să fie verificată activitatea enzimei. 2.5. Polivinilpolipirolidonă (PVPP) Notă: Toți reactivii de mai sus sunt disponibili în comerț. 3. APARATURA 3.1. Un spectrofotometru pentru determinări la 340 nm, lungimea de undă la care absorbția NADH este maximă. În cazul în care acesta nu este disponibil se poate utiliza un spectrofotometru cu o sursă spectrală discontinuă, pentru determinări la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse determinări ale absorbției absolute (nu sunt folosite curbe
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
lungimea de undă la care absorbția NADH este maximă. În cazul în care acesta nu este disponibil se poate utiliza un spectrofotometru cu o sursă spectrală discontinuă, pentru determinări la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse determinări ale absorbției absolute (nu sunt folosite curbe de calibrare, dar standardizarea se face prin considerarea coeficientului de extincție a NADH), trebuie verificate scalele de lungime de undă și absorbția spectrală a aparatului. 3.2. Cuve de sticlă cu lungimea drumului optic de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
pentru determinări la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse determinări ale absorbției absolute (nu sunt folosite curbe de calibrare, dar standardizarea se face prin considerarea coeficientului de extincție a NADH), trebuie verificate scalele de lungime de undă și absorbția spectrală a aparatului. 3.2. Cuve de sticlă cu lungimea drumului optic de 1 cm sau cuve de folosință unică. 3.3. Micropipete pentru pipetarea de volume în intervalul 0,02 la 2 ml. 4. PREGĂTIREA PROBEI Determinarea citratului se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
într-un flacon conic de 50 ml, se adaugă PVPP umed luat de pe filtru cu o spatulă. Se agită 2-3 minute. Se filtrează. 5. METODA DE LUCRU Cu spectrofotometrul ajustat la o lungime de undă de 340 nm se determină absorbția folosind cuve de 1 cm, utilizând aerul ca standard de absorbție zero (referință) (fără cuvă în drumul optic). Se adaugă următoarele în cuve de 1 cm: Cuvă de referință (ml) Cuvă probă (ml) Soluția 2.1 1,00 1,00
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
luat de pe filtru cu o spatulă. Se agită 2-3 minute. Se filtrează. 5. METODA DE LUCRU Cu spectrofotometrul ajustat la o lungime de undă de 340 nm se determină absorbția folosind cuve de 1 cm, utilizând aerul ca standard de absorbție zero (referință) (fără cuvă în drumul optic). Se adaugă următoarele în cuve de 1 cm: Cuvă de referință (ml) Cuvă probă (ml) Soluția 2.1 1,00 1,00 Soluția 2.2 0,10 0,10 Proba de măsurat - 0
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
2.1 1,00 1,00 Soluția 2.2 0,10 0,10 Proba de măsurat - 0,20 Apă bidistilată 2,00 1,80 Soluția 2.3 0,02 0,02 Se amestecă și după aproximativ 5 minute se citește absorbția soluțiilor din cuvele de referință și probă (A1). Se adaugă: Soluția 2.4 0,02 ml 0,02 ml Se amestecă; se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ cinci minute) și se citesc absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și probă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
și după aproximativ 5 minute se citește absorbția soluțiilor din cuvele de referință și probă (A1). Se adaugă: Soluția 2.4 0,02 ml 0,02 ml Se amestecă; se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ cinci minute) și se citesc absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și probă (A2). Se calculează diferența absorbțiilor (A2-A1) pentru cuvele de referință și probă, Ar și As. La final, se calculează diferența între acestea: Notă: Timpul necesar pentru finalizarea acțiunii enzimei poate varia de la un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
referință și probă (A1). Se adaugă: Soluția 2.4 0,02 ml 0,02 ml Se amestecă; se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ cinci minute) și se citesc absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și probă (A2). Se calculează diferența absorbțiilor (A2-A1) pentru cuvele de referință și probă, Ar și As. La final, se calculează diferența între acestea: Notă: Timpul necesar pentru finalizarea acțiunii enzimei poate varia de la un lot la altul. Valoarea de mai sus este dată numai orientativ și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
aici, 3,14 ml) v = volumul probei în ml (aici, 0,2 ml) M = masa moleculară a substanței de determinat (aici, pentru acid citric anhidru, M = 192,1) d = drumul optic în cuvă în cm (aici, 1 cm) = coeficientul de absorbție a NADH (la 340 nm = 6,3 m mol-1 1 cm-1), astfel că C = 479 x A Dacă proba a fost diluată în timpul pregătirii, rezultatul se înmulțește cu factorul de diluare. Notă: La 334 nm: C = 488 A (=6,2
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
transformă în L-alanină printr-o reacție catalizată de glutamat piruvat transaminază (GPT): (1) L-lactat + NAD+ piruvat + NADH + H+ (2) D-lactat + NAD+ piruvat + NADH + H+ (3) Piruvat + L-glutamat L-alanină + -ketoglutarat Cantitatea de NADH formată, măsurată de creșterea absorbției la lungimea de undă de 340 nm, este proporțională cu cantitatea de lactat prezentă inițial. Notă: Acidul L-lactic poate fi determinat independent utilizând reacțiile (1) și (3), iar acidul D-lactic poate fi determinat în mod similar utilizând reacțiile
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
stabilă cel puțin un an la 4° C. Se recomandă înainte de determinare verificarea activității enzimei. Notă: Toți reactivii sunt disponibili în comerț. 2.2. Aparatură 2.2.1. Un spectrofotometru pentru determinări la 340 nm., lungimea de undă la care absorbția NADH este maximă. În cazul în care acesta nu este disponibil se poate utiliza un spectrofotometru cu o sursă spectrală discontinuă, care să permită măsurători la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse măsurători ale absorbției absolute (adică nu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
undă la care absorbția NADH este maximă. În cazul în care acesta nu este disponibil se poate utiliza un spectrofotometru cu o sursă spectrală discontinuă, care să permită măsurători la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse măsurători ale absorbției absolute (adică nu sunt folosite curbe de calibrare, dar standardizarea se face prin considerarea coeficientului de extincție a NADH), trebuie verificate scalele de lungime de undă și absorbția spectrală a aparatului. 2.2.2. Cuve de sticlă cu lungimea căii
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
măsurători la 334 nm sau 365 nm. Deoarece sunt incluse măsurători ale absorbției absolute (adică nu sunt folosite curbe de calibrare, dar standardizarea se face prin considerarea coeficientului de extincție a NADH), trebuie verificate scalele de lungime de undă și absorbția spectrală a aparatului. 2.2.2. Cuve de sticlă cu lungimea căii optice de 1 cm sau cuve de folosință unică. 2.2.3. Micropipete pentru pipetarea de volume în intervalul 0,02 la 2 ml. 2.3. Pregătirea probei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
Metoda de lucru 2.4.1. Determinarea acidului lactic total Soluția tampon trebuie să fie la o temperatură între 20 și 25°C înainte de a trece la determinare. Cu spectrofotometrul reglat la lungimea de undă de 340 nm, se determină absorbția folosind cuve cu drum optic de 1 cm, cu aerul ca standard de absorbție zero (referință) (fără cuvă în drumul optic) sau cu apă ca standard. Se pun următoarele în cuve cu drum optic de 1 cm: Cuvă de referință
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
fie la o temperatură între 20 și 25°C înainte de a trece la determinare. Cu spectrofotometrul reglat la lungimea de undă de 340 nm, se determină absorbția folosind cuve cu drum optic de 1 cm, cu aerul ca standard de absorbție zero (referință) (fără cuvă în drumul optic) sau cu apă ca standard. Se pun următoarele în cuve cu drum optic de 1 cm: Cuvă de referință (ml) Cuvă probă (ml) Soluția 2.1.1 1,00 1,00 Soluția 2
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
bidistilată 1,00 0,80 Suspensia 2.1.3 0,02 0,02 Proba de măsurat - 0,20 Se amestecă folosind un agitator de sticlă sau o baghetă din material sintetic cu un capăt turtit; după cinci minute se măsoară absorbția soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă (A1). Se adaugă 0,02 ml de soluție 2.1.4 și 0,05 ml de soluție de la punctul 2.1.5, se omogenizează, se așteaptă terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
referință și pentru probă (A1). Se adaugă 0,02 ml de soluție 2.1.4 și 0,05 ml de soluție de la punctul 2.1.5, se omogenizează, se așteaptă terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și se determină puterea de absorbție a soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă (A2). Se calculează diferențele (A2 - A1) dintre absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă, AR și AS. La final se calculează diferența dintre ele: 2.4.2. Determinarea acidului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
05 ml de soluție de la punctul 2.1.5, se omogenizează, se așteaptă terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și se determină puterea de absorbție a soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă (A2). Se calculează diferențele (A2 - A1) dintre absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă, AR și AS. La final se calculează diferența dintre ele: 2.4.2. Determinarea acidului L-lactic și a acidului D-lactic Determinările acidului L-lactic și acidului D-lactic pot fi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
efectuate independent aplicând procedura pentru determinarea acidului lactic total până la determinarea A1 și continuând apoi după cum urmează: Se adaugă 0,02 ml de soluție 2.1.4, se omogenizează, se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ 20 minute) și se determină absorbțiile din cuvele de referință și pentru probă (A2). Se adaugă 0,05 ml de soluție 2.1.5, se omogenizează, se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și se măsoară absorbțiile în cuvele de referință și pentru probă (A3
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
terminarea reacției (aproximativ 20 minute) și se determină absorbțiile din cuvele de referință și pentru probă (A2). Se adaugă 0,05 ml de soluție 2.1.5, se omogenizează, se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și se măsoară absorbțiile în cuvele de referință și pentru probă (A3). Se calculează diferențele (A2 - A1) pentru acid L-lactic și (A3 - A2) pentru acid D-lactic între absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă, AR și AS. La final se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
5, se omogenizează, se așteaptă până la terminarea reacției (aproximativ 30 minute) și se măsoară absorbțiile în cuvele de referință și pentru probă (A3). Se calculează diferențele (A2 - A1) pentru acid L-lactic și (A3 - A2) pentru acid D-lactic între absorbțiile soluțiilor din cuvele de referință și pentru probă, AR și AS. La final se calculează diferența între acestea: Notă: Timpul necesar pentru finalizarea acțiunii enzimei poate varia de la un lot la altul. Valoarea de mai sus este dată numai orientativ
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]
-
lactic și acid lactic total) v = volumul probei în ml (aici, 0,2 ml) M = masa moleculară a substanței de determinat (aici, pentru acid DL-lactic, M = 90,08) d = drumul optic în cuvă în cm (aici, 1 cm) = coeficientul de absorbție a NADH (la 340 nm = 6,3 m mol-1 1 cm-1), 2.5.1.1. Acidul lactic total și acidul D-lactic C = 0,164 A Dacă proba a fost diluată în timpul pregătirii, rezultatul se înmulțește cu factorul de diluare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86816_a_87603]