12,274 matches
-
grijă să nu se prindă aer, apoi se așază lamele în camera de hibridizare umedă preîncălzită și se lasă acolo o noapte, în obscuritate și la o temperatură de 55 °C, pentru a permite desfășurarea hibridizării. 5.2.7. Se prepară trei pahare de laborator care conțin 1 l de apă ultrapură, 1 l de hibmix 1x (334 ml de hibmix 3x și 666 ml de apă ultrapură) și 1 l de hibmix 1/2x (167 ml de hibmix 3x și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
C. m. ssp. sepedonicus (de exemplu, NCPPB 2140 sau NCPPB 4053); - de asemenea, în cazul în care este posibil, pentru testul PCR se utilizează ADN extras din probe de martori pozitivi. Pentru a evita riscurile de contaminare, martorii pozitivi se prepară într-un mediu diferit de cel în care se găsesc probele care trebuie testate. În măsura posibilului, extractele de probe trebuie curățate de pământ. În anumite cazuri, este recomandabil să se prepare extracte de cartofi spălați, în cazul în care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
a evita riscurile de contaminare, martorii pozitivi se prepară într-un mediu diferit de cel în care se găsesc probele care trebuie testate. În măsura posibilului, extractele de probe trebuie curățate de pământ. În anumite cazuri, este recomandabil să se prepare extracte de cartofi spălați, în cazul în care se prevede folosirea protocoalelor PCR. 6.1. Metode de purificare a ADN-ului Se folosesc probe martori pozitivi și negativi, în conformitate cu metoda descrisă anterior. Materialul de control se prepară la fel ca
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
recomandabil să se prepare extracte de cartofi spălați, în cazul în care se prevede folosirea protocoalelor PCR. 6.1. Metode de purificare a ADN-ului Se folosesc probe martori pozitivi și negativi, în conformitate cu metoda descrisă anterior. Materialul de control se prepară la fel ca și probele. Există o serie întreagă de metode pentru purificarea ADN-ului țintă, în cazul substratelor de probe complexe, pentru a elimina inhibitorii PCR și alte reacții enzimatice și a concentra ADN-ul țintă în extractul de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
cu condiția ca metodele respective să aibă o eficacitate recunoscută ca fiind echivalentă, pentru purificarea ADN-ului provenit din probele martori care conțin între 103 și 104 celule de agent patogen pe mililitru. 6.2. PCR 6.2.1. Se prepară matricele de test și de control pentru PCR, urmând protocoalele validate (a se vedea apendicele 6). Se prepară o diluție zecimală din extractul de ADN provenit din probă (1:10 în apă ultrapură). 6.2.2. Se prepară amestecul reactiv
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
din probele martori care conțin între 103 și 104 celule de agent patogen pe mililitru. 6.2. PCR 6.2.1. Se prepară matricele de test și de control pentru PCR, urmând protocoalele validate (a se vedea apendicele 6). Se prepară o diluție zecimală din extractul de ADN provenit din probă (1:10 în apă ultrapură). 6.2.2. Se prepară amestecul reactiv pentru PCR într-un mediu lipsit de orice contaminare, în conformitate cu protocoalele publicate (a se vedea apendicele 6). Protocolul
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
1. Se prepară matricele de test și de control pentru PCR, urmând protocoalele validate (a se vedea apendicele 6). Se prepară o diluție zecimală din extractul de ADN provenit din probă (1:10 în apă ultrapură). 6.2.2. Se prepară amestecul reactiv pentru PCR într-un mediu lipsit de orice contaminare, în conformitate cu protocoalele publicate (a se vedea apendicele 6). Protocolul PCR validat este o reacție multiplex care include și un control PCR intern. 6.2.3. Se adaugă 5 μl
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
sepedonicus care să formeze colonii, adăugate extractelor de probe care anterior au dat rezultate negative (pentru preparare, a se vedea apendicele 2). Pentru a obține o sensibilitate maximă a detecției este preferabil să se utilizeze un extract de probă proaspăt preparat în condiții optime de creștere. Cu toate acestea, metoda poate fi aplicată cu succes pentru extracte conservate în soluție de glicerol la temperaturi între -68 °C și -86 °C. Anumite varietăți de pătlăgea vânătă constituie un mediu excelent de îmbogățire
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
pătlăgea vânătă, frecându-le cu etanol la 70 %. Se efectuează un test IF sau PCR pe seva de pătlăgea vânătă și se trece la izolarea pe mediu adecvat (selectiv) (a se vedea secțiunea 8). De asemenea, este posibil să se prepare o colorare Gram (a se vedea apendicele 9). Se identifică culturile pure de izolați presupuși de C. m. ssp. sepedonicus și li se confirmă patogenicitatea (a se vedea secțiunile 9 și 10). 7.10. În anumite circumstanțe și în special
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
IF sau PCR efectuat pe proba compozită (a se vedea secțiunea 7.10) a dat un rezultat pozitiv. După caz, tulpinile de pătlăgele vinete trebuie să fie macerate, în conformitate cu metoda descrisă la secțiunea 3.1.3. Ca martori pozitivi, se prepară diluții la a zecea parte dintr-o suspensie de 106 ufc/ml de C. m. ssp. sepedonicus (de exemplu, NCPPB 4053 sau PD 406). Pentru a evita orice posibilitate de contaminare, martorii pozitivi se prepară la distanță de probele care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
3. Ca martori pozitivi, se prepară diluții la a zecea parte dintr-o suspensie de 106 ufc/ml de C. m. ssp. sepedonicus (de exemplu, NCPPB 4053 sau PD 406). Pentru a evita orice posibilitate de contaminare, martorii pozitivi se prepară la distanță de probele care trebuie testate. În cazul fiecărui lot de mediu selectiv nou preparat, trebuie să se verifice în ce măsură este adecvat pentru cultura agentului patogen înainte de a-l utiliza pentru testarea probelor de rutină. Materialul de control se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de glicerol - Producție de acid pe bază de lactoză - sau slab Producție de acid pe bază de ramnoză - Producție de acid pe bază de salicină - Colorare Gram (a se vedea apendicele 9) + 9.2. Test de imunofluorescență (IF) (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru într-un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
pe bază de salicină - Colorare Gram (a se vedea apendicele 9) + 9.2. Test de imunofluorescență (IF) (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru într-un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea 4). (d) Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul obținut cu cultura trebuie să fie echivalent cu cel obținut cu
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea 4). (d) Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul obținut cu cultura trebuie să fie echivalent cu cel obținut cu martorul pozitiv. 9.3. Test PCR (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru în apă ultrapură. (b) Într-un bloc de încălzire sau într-o baie de apă fiartă, se încălzesc 100 μl de suspensie în tuburi închise la 100 °C timp de 4 minute
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Schaad et al., 1999). (d) Identificarea C. m. ssp. sepedonicus este pozitivă atunci când amplimerii PCR au aceeași dimensiune și prezintă aceleași polimorfisme de lungime a fragmentelor de restricție ca și pentru sușa martor pozitivă. 9.4. Test FISH (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru în apă ultrapură. (b) Se urmează procedura testului FISH (a se vedea secțiunea 5). (c) Testul FISH este pozitiv în cazul în care obținem aceleași reacții cu cultura și martorul pozitiv. 9
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
1 Anteiso A; în schimb, acidul menționat este prezent la toate Clavibacter spp., la niveluri cuprinse între 1 % și 5 %. În cazul C. m. ssp. sepedonicus, nivelul menționat gravitează de obicei în jurul valorii de 5 %. 9.6. BOX-PCR (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru în apă ultrapură. (b) Se efectuează testul în conformitate cu procedura (Smith et al., 2001). 10. TEST DE CONFIRMARE Testul puterii patogene trebuie efectuat atât pentru a aduce confirmarea finală a unui diagnostic de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
10. TEST DE CONFIRMARE Testul puterii patogene trebuie efectuat atât pentru a aduce confirmarea finală a unui diagnostic de C. m. ssp. sepedonicus, cât și pentru a evalua virulența culturilor identificate ca fiind C. m. ssp. sepedonicus. 10.1. Se prepară un inoculum de aproximativ 106 celule/ml pe baza unei culturi de trei zile a izolatului care trebuie testat și a unei sușe martor pozitive corespunzătoare de C. m. ssp. sepedonicus. 10.2. Se inoculează 5-10 tulpini de plante tinere
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
stabilesc niveluri de contaminare la a zecea parte, urmând diluția în următoarele cinci microfiole. Cele șase microfiole contaminate vor fi utilizate ca martori pozitivi. Cele patru microfiole necontaminate vor fi utilizate ca martori negativi. Microfiolele se etichetează în consecință. Se prepară alicote de 100 μl în microfiole sterile de 1,5 ml, astfel încât să se obțină nouă replici ale fiecărei probe martor. Se depozitează la temperaturi între -16 și -24 °C până în momentul utilizării. Prezența și cuantificarea C. m. ssp. sepedonicus
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
filtru sterilizat și trecut prin autoclavă) 15 mM Se diluează până la 1 x, după caz. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1X Dodecilsulfat de sodiu (SDS) 0,01 % Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă CMSCY 301 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare, respectând calculele din tabel. Pentru fiecare lamă (care conține 2 probe diferite în duplicat), sunt necesari 90 μl de soluție de hibridizare. Tabel: Cantități sugerate pentru prepararea amestecului de hibridizare 2 8 Apă ultrapură sterilă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
dizolva. Soluție colorantă de safranină Soluție mamă: Safranină O 2,5 g Etanol la 95 % 100 ml Se amestecă și se depozitează. Se diluează în raport 1:10 pentru a obține o soluție de lucru. Procedura de colorare 1. Se prepară frotiurile, se usucă la aer și se fixează la căldură. 2. Se scufundă lama în soluția de cristal violet timp de un minut. 3. Se spală rapid cu apă curentă. 4. Se scufundă în soluția iodo-iodurată a lui Lugol timp
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și să se conserve în condiții adecvate: - toți tuberculii care fac parte din eșantion și, în măsura posibilului, toate plantele care fac parte din eșantion; - orice extract rezidual și material suplimentar preparat pentru testul sau testele de depistare, precum lamele preparate pentru testele de imunofluorescență și - orice documentație relevantă, până la încheierea respectivelor proceduri. După caz, conservarea tuberculilor va permite testarea varietăților. 2. În cazul confirmării prezenței organismului, trebuie să se păstreze și să se conserve în condiții adecvate: - materialul menționat la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
unui rezultat pozitiv confirmat pentru o maladie infecțioasă, atunci, în conformitate cu cerințele menționate la art. 10 alin. (2) și (3), se face o verificare pentru a confirma faptul că sunt identificate toate celelalte componente rezultate din donarea incriminata, dar și componentele preparate din donările anterioare ale aceleiași persoane. Fișa donatorului va fi actualizată imediat. ... Capitolul VIII Stocarea, distribuția și livrarea Articolul 14 (1) Centrele de transfuzie sanguina prin sistemul de calitate, unitățile de transfuzie sanguina și serviciul clinic din spital vor certifică
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189264_a_190593]
-
forma plăci 1. Este cel mai bine să se folosească o gamă de diluție a virusului pentru a asigura că un număr optim de plăci sunt prezente pe tavă. Zece soluții diluate până la 10% în STF sunt suficiente. 2. Se prepară celule embrionare monostratificate confluente sau o linie celulară adecvată (de exemplu rinichi bovin Madin - Darby), în vase Petri cu diametrul de 5 cm. 3. 0,2 ml din fiecare diluție de virus este adăugată în fiecare din cele două vase
jrc1919as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87069_a_87856]
-
produselor fabricate din trei sau mai multe fructe, indicarea fructelor utilizate poate fi înlocuită prin cuvintele "amestec de fructe", printr-o mențiune similară sau prin cea a numărului de fructe utilizate. ... 3. Etichetarea cuprinde indicarea conținutului de fructe, incluzând cuvintele "preparat cu... grame de fructe pentru 100 grame" de produs finit. În cazul utilizării extractelor apoase, calculul se face după scăderea masei apei utilizate la prepararea extractelor. 4. a) Etichetarea cuprinde indicarea conținutului total de zaharuri, incluzând cuvintele "conținutul total de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/153401_a_154730]
-
primește o anumită linie, suprafață sau formă care îi determină funcția finală într-o măsură mai mare decât compoziția chimică; (c) "substanță" înseamnă substanță în conformitate cu definiția de la articolul 2 din Directiva 67/548/CEE a Consiliului 12; (d) "preparare" înseamnă preparat în conformitate cu definiția de la articolul 2 din Directiva 67/548/CEE; (e) "deșeuri" înseamnă deșeuri în conformitate cu definiția de la articolul 1 litera (a) din Directiva 75/442/CEE a Consiliului 13; (f) "eliminare" înseamnă eliminare în conformitate cu definiția de la articolul 1 litera (e
32004R0850-ro () [Corola-website/Law/292994_a_294323]