5,180 matches
-
situație, molecula deplasant determină zone de concentrații mari în solut, adiacente frontului deplasant (fig. I.33 I.34 I.35. În zonele concentrate, soluții intră în competiție pentru locurile de la suprafața fazei staționare. Componenții cu afinitate mare pentru suprafața fazei staționare se atașează în locul celor cu afinitate mică. Pe măsură ce frontul deplasant traversează coloana, împinge soluții, iar competiția între aceștia este continuă. In final componenții se separă în zone adiacente și distincte. Substanțele cu izoterme liniare nu pot fi separate prin această
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
strat subțire; - Cromatografia pe strat suprapresurizat; - Cromatografia planară multidimensională. CROMATOGRAFIA DE LICHIDE DE INALTĂ PERFORMANȚĂ; CROMATOGRAFIA PRIN SCHIMB IONIC; CROMATOGRAFIA DE EXCLUDERE; GAZ - CROMATOGRAFIA; CROMATOGRAFIA CU FUIDE SUPERCRITICE. V. 1. CROMATOGRAFIA PLANARA PLANAR CHROMATOGRAPHY (PC) Datorită achizițiilor de noi faze staționare și aparate a apărut o nouă tehnică numită cromatografia planară (CP). Ea include cromatografia pe hârtie și pe strat subțire dezvoltate sub multe aspecte tehnice. Cromatografia planară este denumită și cromatografia pe pat/coloană deschisă. Cromatografia planară este probabil cea
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
CP poate oferi avantaje substanțiale în raport cu alte tehnici. V. 1. 1. CROMATOGRAFIA PE HÂRTIE PAPER CHROMATOGRAPHY (PC) Cromatografia pe hârtie este o metodă fizico-chimică de separare și identificare a unor amestecuri de substanțe, bazată pe repartiția lor diferită între faza staționară constituită din hârtia cromatografică și lichidul fixat pe ea și o fază mobilă formată dintr-un solvent sau amestec de solvenți organici și anorganici. In hârtia cromatografică, datorită structurii fibroase, există goluri, iar celuloza care formează faza staționară prezintă suprafețe
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
între faza staționară constituită din hârtia cromatografică și lichidul fixat pe ea și o fază mobilă formată dintr-un solvent sau amestec de solvenți organici și anorganici. In hârtia cromatografică, datorită structurii fibroase, există goluri, iar celuloza care formează faza staționară prezintă suprafețe de ordinul 600 m2/g. Datorită structurii poroase este posibilă ascensiunea capilară a solventului și separarea componenților. Faza staționară este alcătuită din faza apoasă care există întotdeauna în celuloză datorită caracterului hidrofil și structurii poroase a celulozei. Uneori
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
amestec de solvenți organici și anorganici. In hârtia cromatografică, datorită structurii fibroase, există goluri, iar celuloza care formează faza staționară prezintă suprafețe de ordinul 600 m2/g. Datorită structurii poroase este posibilă ascensiunea capilară a solventului și separarea componenților. Faza staționară este alcătuită din faza apoasă care există întotdeauna în celuloză datorită caracterului hidrofil și structurii poroase a celulozei. Uneori hârtia poate servi ca suport pentru alte faze staționare. Cele mai utilizate hârtii cromatografice sunt redate în tabelul de mai jos
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
structurii poroase este posibilă ascensiunea capilară a solventului și separarea componenților. Faza staționară este alcătuită din faza apoasă care există întotdeauna în celuloză datorită caracterului hidrofil și structurii poroase a celulozei. Uneori hârtia poate servi ca suport pentru alte faze staționare. Cele mai utilizate hârtii cromatografice sunt redate în tabelul de mai jos. Hârtia cromatografică obișnuită nu se poate folosi la separările de substanțe grase, alcaloizi, proteine, etc. Pentru aceste scopuri se folosește hârtia cromatografică hidrofobizată sau celuloza modificată chimic. Prin
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
cu lichide sau substanțe solide. Se impregnează hârtia cu soluții tampon, acizi, baze, săruri, lichide polare sau nepolare, cu agenți de complexare, cu agenți de precipitare și cu schimbători de ioni lichizi sau solizi. Impregnarea hârtiei cu o altă fază staționară lărgește posibilitățile de separare a substanțelor anorganice și organice. Hârtiile cele mai utilizate pentru impregnări sunt: Whatman 3, 1, 4 și Schleicher-Schull 2043 și 2045. Hârtiile impregnate cu acid silicic sunt folosite pentru separările lipidelor polare, hidraților de carbon și
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
de cromatografie s-a încercat să se facă o clasificare a solvenților. Unii autori au luat în considerare așa - numita tărie relativă, grupându-i în ordinea puterii de eluție, alții au ținut seama de tensiunea superficială dintre solvent și faza staționară. Iată câțiva dintre cei mai utilizați solvenți în cromatografia pe hârtie: - alcooli: amilic (n- și izo-), butilic (n-, izo-, terț-), etilic, metilic, propilic (n-, izo-); - cetone: acetona, acetilacetona, etilizopropilcetona, metiletilcetona; - esteri: acetat de etil, formiat de etil; - eteri: eter etilic
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
cromatografic dat, să se caracterizeze un solut (substanța dizolvată) prin distanța pe care o parcurge în raport cu frontul de solvent. Desfășurarea procesului cromatografic Se va distinge cazul de mișcare al fazei mobile prin capilaritate și mișcare prin flux forțat. Placa, faza staționară În CSS, plăcile folosite sunt constituite dintr-un suport inert rigid sau flexibil (placă de sticlă, foiță de aluminiu sau de poliamidă, etc.), pe care faza staționară este depusă sub forma unui strat subțire (grosimea între 200 și 250 μm
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
mișcare al fazei mobile prin capilaritate și mișcare prin flux forțat. Placa, faza staționară În CSS, plăcile folosite sunt constituite dintr-un suport inert rigid sau flexibil (placă de sticlă, foiță de aluminiu sau de poliamidă, etc.), pe care faza staționară este depusă sub forma unui strat subțire (grosimea între 200 și 250 μm). Stratul subțire depus se amestecă cu lianți minerali sau organici pentru a asigura adeziunea pe placa cromatografică. Dimensiunile obișnuite ale suprafeței stratului sunt: - 10 x 5 cm
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
permite depunerea (spotarea) unui volum de 10 nl. e1e2proba1 cm e1, e2 = etaloane Practic, trebuie efectuată spotarea în soluția unui solvent, a cărui forță eluantă să fie mai puțin puternică decât cea a solventului de developare, altfel spus, dacă faza staționară este polară, spotarea trebuie efectuată într-un solvent cât mai apolar posibil. Aparatele semi- sau automate de spotare a probei sunt disponibile din punct de vedere comercial: Nanomat®; pipeta este coborâtă spre stratul fazei staționare prin acțiunea unui magnet. Volumele
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
developare, altfel spus, dacă faza staționară este polară, spotarea trebuie efectuată într-un solvent cât mai apolar posibil. Aparatele semi- sau automate de spotare a probei sunt disponibile din punct de vedere comercial: Nanomat®; pipeta este coborâtă spre stratul fazei staționare prin acțiunea unui magnet. Volumele depuse sunt de 100-200 nl și reportabilitatea depunerii este de ordinul 1%. Linomat®(Camag); metodă semiautomată de spotare prin pulverizare pe benzi înguste. În cazul unei serii mai mari, operația poate fi automatizată total cu ajutorul
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
eșantionare, capabil să spoteze de la 100 nl până la mai mulți μl, cu o precizie de 1%. Depunerea în formă de linie poate fi obținută utilizând plăci cu zonă de concentrare. Un strat de kieselgur este suprapus peste stratul de fază staționară pe care s-a efectuat spotarea. Acest strat de kieselgur nu reține solutul, el va fi antrenat de eluant din zona în care a fost depus. Volumele foarte diferite (0,5-500 μl) pot fi spotate cu seringa sau cu aparatul
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
capilară. Procesul de developare se oprește când cele 2 fronturi se întâlnesc. Avantajul acestui sistem este că, permite ocuparea totală a stratului de adsorbant și dublarea numărului de eșantioane pe care le putem analiza. Developarea circulară În acest sistem faza staționară este dispusă orizontal, faza mobilă ajunge până la centrul plăcii și se distribuie uniform prin capilaritate, ceea ce produce un spot circular care crește dacă se continuă alimentarea solventului. Developarea anticirculară În acest procedeu, lichidul vector migrează de la periferie spre centrul plăcii
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
împrospăteze capilaritatea și în acest fel să domine faza mobilă. Scopul imediat este câștigarea de timp și de a ajunge la un sistem de cvasicoloană. Utilizarea forței centrifuge Migrarea solventului este în funcție de viteza de rotație și de alimentare a fazei staționare. Viteza maximă permisă este definită de cantitatea de lichid ce poate alimenta stratul fără a inunda suprafața. FAZE STAȚIONARE Silicea Modificări chimice ale silicei Se introduc radicali alifatici C2-C18, grupări diolice, CN etc. • Faze grefate polare Curent, sunt utilizate 3
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
ajunge la un sistem de cvasicoloană. Utilizarea forței centrifuge Migrarea solventului este în funcție de viteza de rotație și de alimentare a fazei staționare. Viteza maximă permisă este definită de cantitatea de lichid ce poate alimenta stratul fără a inunda suprafața. FAZE STAȚIONARE Silicea Modificări chimice ale silicei Se introduc radicali alifatici C2-C18, grupări diolice, CN etc. • Faze grefate polare Curent, sunt utilizate 3 tipuri de faze amino, cian și diol. Migrarea solvenților este rapidă și plăcile nu sunt sensibile la umiditate (cum
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
polari capabili de a diminua legăturile de hidrogen sau de a forma la rândul lor legături de hidrogen cu grupele OH. Are loc o lărgire a canalelor ceea ce duce la creșterea capacității de pătrundere a solvenților și a formării fazelor staționare lichide în acest suport. Capacitatea mare de a reține apa și solvenții polari conferă celulozei calități excelente de suport pentru cromatografia de repartiție lichid - lichid. Preparate din celuloză: pulbere de celuloză-D.O.-Camag, pulbere de celuloză-D.F.O.-Camag, pulbere
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
obținuți prin expunerea la vapori de amoniac. Mult mai delicată este utilizarea unei soluții de eluant în care este dizolvat reactivul, de exemplu ninhidrina pentru detectarea acizilor aminați, fluorescamina pentru amine biogenice și proteine. Reactivul poate fi prezent în faza staționară. Nu trebuie confundat cu indicatorul de fluorescență al plăcilor. Astfel, utilizarea unei sări de zirconiu permite detectarea unor estrogeni. Măsurări densitometrice În scop cantitativ evaluarea conținutului în substanța activă de pe placa cromatografică se face cu ajutorul densitometrelor prin două moduri: - măsurarea
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
sau selectivă (PC-PC) Desfășurarea unei separări țintă sau selectivă prin 2D-CP (CPxCP).a) cromatograma și densitograma după prima developare cu primul solvent b) delimitarea (răzuirea) spotului țintă de pe primul strat c) spotul extras este aplicat pe o a doua fază staționară pentru analiza compușilor transferați d) cromatograma și densitograma de separare după a doua developare cu al doilea sistem de solvenți Ilustrarea etapelor in-situ ale separării 2D-CP (CPxCP) a) cromatograma uscată după prima separare este finisată utilizând primul sistem de solventi
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
solvenți b) modificarea totală a solventului puternic (ST) în sistemul combinat c) modificarea totală a selectivității (valoare, SV) solventului din sistem CP cuplare-straturi (PC-PC) Diagrama selecționării “în cros” a straturilor cuplate CP (CP-CP) ce asigură o separare multidimensională pe faze staționare prin descreșterea polarității Combinare MD-PC Ilustrarea cuplării de straturi OPLC (OPLC-OPLC) pentru a asigura separarea MD cu trei faze staționare cu polaritate descrescătoare. a) principiul utilizării a trei plăci cromatografice b) OPLC-OPLC în flux continuu (canal îngust, faza mobilă de
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
sistem CP cuplare-straturi (PC-PC) Diagrama selecționării “în cros” a straturilor cuplate CP (CP-CP) ce asigură o separare multidimensională pe faze staționare prin descreșterea polarității Combinare MD-PC Ilustrarea cuplării de straturi OPLC (OPLC-OPLC) pentru a asigura separarea MD cu trei faze staționare cu polaritate descrescătoare. a) principiul utilizării a trei plăci cromatografice b) OPLC-OPLC în flux continuu (canal îngust, faza mobilă de intrare și ieșire, canal gros, fante pentru a asigura transferul fazei mobile între două plăci) APLICAȚIILE CROMATOGRAFIEI PLANARE Identificarea substanțelor
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
se clasifică astfel: de adsorbție; de repartiție; cu faze inverse; prin schimb ionic; prin excluzie moleculară. Echipamentul de bază constă din 1-2 sau mai multe rezervoare, o pompă de înaltă presiune, un injector pentru introducerea probei, o coloană cu faza staționară, un detector și un înregistrator. Aparatele moderne sunt înzestrate cu sisteme de degazare, precoloane etc. Principii generale 1. Parametrii de reținere Schema unui cromatograf HPLC 1. COLOANE Sunt constituite din tuburi de sticlă, oțel și alte materiale. Coloanele au o
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
Schema unui cromatograf HPLC 1. COLOANE Sunt constituite din tuburi de sticlă, oțel și alte materiale. Coloanele au o lungime de 50-100 cm, diametrul exterior de 5-50 mm și cel interior de 6,3 mm. Acestea sunt umplute cu faze staționare (constituite din materiale rigide, lungime de 5-30 cm, diametrul interior 1-9 mm) 2. FAZE STATIONARE De obicei, faza staționară este formată din particule uniforme, de dimensiuni mici (5-10 mm), împachetate într-o coloană cilindrică. Sistemele utilizate sunt cele care definesc
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
lungime de 50-100 cm, diametrul exterior de 5-50 mm și cel interior de 6,3 mm. Acestea sunt umplute cu faze staționare (constituite din materiale rigide, lungime de 5-30 cm, diametrul interior 1-9 mm) 2. FAZE STATIONARE De obicei, faza staționară este formată din particule uniforme, de dimensiuni mici (5-10 mm), împachetate într-o coloană cilindrică. Sistemele utilizate sunt cele care definesc mecanismul de separare. CAPITOLUL V Metode cromatografice de analiză a medicamentelor 165 Absorbția cromatografică rezultă din interacțiunea solventului și
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]
-
particule uniforme, de dimensiuni mici (5-10 mm), împachetate într-o coloană cilindrică. Sistemele utilizate sunt cele care definesc mecanismul de separare. CAPITOLUL V Metode cromatografice de analiză a medicamentelor 165 Absorbția cromatografică rezultă din interacțiunea solventului și cu suprafața fazei staționare solide. In general, eluenții utilizați pentru absorbția cromatografică sunt mai puțin polari decât fazele staționare și aceste sisteme sunt descrise ca faze normale. Cromatografia de partiție implică o fază staționară lichidă nemiscibilă cu dizolvantul și care îmbracă un suport inert
ANALIZA MEDICAMENTELOR VOLUMUL 1 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/84343_a_85668]