1,963 matches
-
cât și pentru a evalua virulența culturilor identificate ca fiind C. m. ssp. sepedonicus. 10.1. Se prepară un inoculum de aproximativ 106 celule/ml pe baza unei culturi de trei zile a izolatului care trebuie testat și a unei sușe martor pozitive corespunzătoare de C. m. ssp. sepedonicus. 10.2. Se inoculează 5-10 tulpini de plante tinere de pătlăgea vânătă în stadiul celei de-a treia frunze (a se vedea secțiunea 7.3 sau 7.4). 10.3. Se pun
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
la adresa http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main Apendicele 2 Prepararea martorilor pozitivi și negativi pentru aplicarea la conuri a testelor de depistare PCR/IF și FISH Se pune în cultură timp de 72 de ore o sușă virulentă de C. m. ssp. sepedonicus [NCPPB 4053 sau PD 406] pe un mediu de bază MTNA și se pune în suspensie într-un tampon fosfatat la 10 mM, astfel încât să se obțină o densitate celulară de aproximativ 1-2 x
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
bene: Testele preliminare trebuie să permită detectarea reproductibilă a cel puțin 103-104 celule de C. m. ssp. sepedonicus pe mililitru de extract de probă. De asemenea, testele preliminare nu trebuie să arate nici un fals rezultat pozitiv cu o gamă de sușe bacteriene selecționate. 1. Protocol PCR multiplex cu control PCR intern (Pastrik, 2000) 1.1. Oligonucleotide primeri Primer direct PSA-1 5' - ctc ctt gtg ggg tgg gaa aa - 3' Primer indirect PSA-R 5' - tac tga gat gtt tca ctt ccc c
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
comunitare de combatere a influenței aviare prin intermediul Directivei 92/40/ CEE a Consiliului din 19 mai 1992 de introducere a măsurilor comunitare de combatere a influenței aviare 2. (2) În urma unei epizootii deosebit de grave de influență aviară, cauzată de o sușă a virusului H5N1 cu patogenitate ridicată, declarată în decembrie 2003 în Asia de Sud-Est, Comisia a adoptat o serie de măsuri de protecție împotriva influenței aviare. (3) În afară de aceasta, începând cu anul 2002, s-au pus în aplicare programe de supraveghere a
32006D0052-ro () [Corola-website/Law/294684_a_296013]
-
mod considerabil rentabilitatea aviculturii. Există riscul introducerii agentului patogen din cauza comerțului internațional cu păsări de curte vii și produse din carne de pasăre, inclusiv cu pene neprelucrate. (2) În urma apariției unei epidemii foarte grave de influență aviară cauzată de o sușă H5N1 deosebit de patogenă a virusului influenței aviare în numeroase state din Asia de sud-est în decembrie 2003, Comisia a adoptat o serie de măsuri de protecție în ceea ce privește influența aviară, ținând seama de faptul că boala prezintă, de asemenea, un risc semnificativ pentru
32006D0183-ro () [Corola-website/Law/294731_a_296060]
-
pentru a reduce riscul posibil de răspândire a influenței aviare cu o patogenitate joasă și înaltă prin intermediul penelor, ar trebui ca penele să fie prelucrate în mod corespunzător înainte de a fi comercializate. Avizul menționat anterior a fost publicat înainte ca sușa înalt patogenă H5N1 a virusului influenței aviare să fi manifestat o tendință de răspândire la scară mondială. (6) Având în vedere avizul EFSA și actuala stare de urgență, Comisia intenționează să revizuiască măsurile comunitare permanente în vigoare cu privire la importurile de
32006D0183-ro () [Corola-website/Law/294731_a_296060]
-
prevadă certificate de sănătate la importul de pene și părți de pene și să se stabilească lista de țări terțe din care statele membre autorizează importurile de subproduse de origine animală menționate anterior. (7) Ținând seama de răspândirea rapidă a sușei înalt patogene H5N1 a influenței aviare pe parcursul ultimelor luni, de riscul de pătrundere a influenței aviare în Comunitate prin intermediul penelor neprelucrate, pentru a asigura o protecție ridicată a sănătății persoanelor care manipulează loturi importate de pene neprelucrate și până la revizuirea
32006D0183-ro () [Corola-website/Law/294731_a_296060]
-
DAS-ELISA 9. Testul biologic B. Teste de identificare 1. Testele de identificare nutrițională și enzimatică 2. Testul IF 3. Testul ELISA 4. Testul PCR 5. Testul FISH 6. Testul de profil al acizilor grași (FAP) 7. Metodele de caracterizare a sușei 7.1. Determinarea biovarului 7.2. Amprenta genomică 7.3. Metodele PCR C. Test de confirmare Apendicele 1 Laboratoarele care practică optimizarea și validarea protocoalelor Apendicele 2 Mediile de izolare și de cultură a R. solanacearum Apendicele 3 (A) Materialul
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
SMSA; a se vedea apendicele 2). Se întinde sau se prepară în linii cu o tehnică de diluare-însămânțare corespunzătoare. În cazul în care se consideră util, se prepară plăci din cutii Petri separate cu o suspensie de celule diluate din sușa virulentă biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv. (d) Se incubează plăcile timp de 2-6 zile la 28 °C. - În mediul nutritiv general, izolările virulente de R. solanacearum dezvoltă colonii fluide, neregulate, plate, albicioase, deseori cu verticile caracteristice în
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
care cresc în apă. Gazdele cunoscute sunt plantele spontane de cartof, Solanum dulcamara, S. nigrum, Datura stramonium și alți membri ai familiei solanaceelor. Pelargonium spp. și Portulaca oleracea sunt, de asemenea, plante gazdă. Printre anumite buruieni europene care pot găzdui sușe virulente biovar 2, rasa 3 de R. solanacearum în rădăcini și/sau rizosfere în condiții de mediu specifice se numără Atriplex hastata, Bidens pilosa, Cerastium glomeratum, Chenopodium album, Eupatorium cannabinum, Galinsoga parviflora, Ranunculus scleratus, Rorippa spp., Silene alba, S. nutans
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
frotiu din exsudatul bacterian scurs din țesutul infectat pe o lamelă de microscop sau se prepară un frotiu dintr-o cultură de 48 ore pe bază de YPGA sau SPA (apendicele 2). 2. Se prepară frotiuri de control pozitiv din sușa biovar 2 de R. solanacearum și, în cazul în care se consideră necesar, un frotiu de control negativ dintr-un PHB negativ cunoscut. 3. Se lasă la uscat și se trece rapid partea inferioară a fiecărei lamele de câteva ori
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de anticorpi și de exsudat bacterian marcate (circa 5 μl în fiecare caz) pe ferestrele lamelor de testare cu multe godeuri. (b) Se prepară frotiuri de control pozitiv și negativ din suspensii biovar 2 de R. solanacearum și dintr-o sușă heterologă. (c) Se observă aglutinarea în eșantioanele pozitive după o amestecare ușoară timp de cincisprezece secunde. 4. Izolarea selectivă 4.1. Însămânțare pe mediu selectiv Notă: Înainte de aplicarea acestei metode pentru prima dată, se efectuează teste preliminarii pentru a garanta
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
proaspăt preparate. Cu toate acestea, metoda se aplică, de asemenea, utilizărilor de extracte păstrate sub glicerol la o temperatură cuprinsă între - 68 și - 86 °C. Se prepară, pentru control pozitiv, diluții zecimale de suspensie de 106 ufc/ml dintr-o sușă virulentă biovar 2 de R. solanacearum (de exemplu, NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). Pentru a evita orice posibilitate de contaminare, controalele pozitive se prepară complet separat de eșantioanele de testat. Pentru fiecare lot de mediu selectiv proaspăt pregătit, acesta
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
sanco/Home/main). Se recomandă stabilirea titrului pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind un conjugat corespunzător de izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Toate antiserurile policlonale validate au un titru de imunofluorescență de cel puțin 1: 2 000. La efectuarea testului, diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
timp de cincisprezece minute la 7 000 g și resuspendarea în același volum de tampon concentrat. Acest lucru este rareori necesar, mai ales atunci când eșantioanele sunt fixate de lame prin flambare. Se prepară lame de control pozitiv separate dintr-o sușă omologă sau orice altă sușă de referință de R. solanacearum în suspensie în extract de cartof, după cum prevede apendicele 3 B și, facultativ, în tampon. În cazul în care este posibil, ar trebui să se folosească drept control similar pe
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
7 000 g și resuspendarea în același volum de tampon concentrat. Acest lucru este rareori necesar, mai ales atunci când eșantioanele sunt fixate de lame prin flambare. Se prepară lame de control pozitiv separate dintr-o sușă omologă sau orice altă sușă de referință de R. solanacearum în suspensie în extract de cartof, după cum prevede apendicele 3 B și, facultativ, în tampon. În cazul în care este posibil, ar trebui să se folosească drept control similar pe aceeași lamă țesut infectat în
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
caută prezența celulelor intens fluorescente cu morfologia caracteristică a R. solanacearum în ferestrele de test ale lamelor (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei de control pozitiv la aceeași diluție de anticorpi. Celulele cu colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. În cazul în care se suspectează o contaminare, testul trebuie refăcut. Se poate întâmpla atunci când toate lamele unui lot
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
apendicele 6). Fragmentele digerate prin electroforeză în gel de agar se detectează în conformitate cu metoda descrisă anterior și se vizualizează prin iluminare ultravioletă dispunerea tipică a fragmentelor după analiza enzimatică restrictivă și colorarea cu bromură de etidiu. Apoi se compară cu sușele de control pozitiv înainte și după macerare. Interpretarea rezultatului testului PCR Testul PCR este negativ atunci când în eșantionul respectiv nu este detectat fragmentul PCR caracteristic de R. solanacearum având dimensiunea prevăzută, iar fragmentul este detectat pentru toate eșantioanele de control
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
folosesc alicote de extracte de eșantion care au dat anterior rezultate negative la testele de identificare a R. solanacearum. Drept eșantioane de control pozitiv, se prepară suspensii conținând 105-106 de celule pe ml de biovar 2 R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 3) într-un tampon fosfat 0,01 M (PB), dintr-o cultură de 3-5 zile. Se prepară lame separate de control pozitiv din sușa omologă sau din orice altă sușă
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
biovar 2 R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 3) într-un tampon fosfat 0,01 M (PB), dintr-o cultură de 3-5 zile. Se prepară lame separate de control pozitiv din sușa omologă sau din orice altă sușă de referință de R. solanacearum, în suspensie în extract de cartof, în conformitate cu apendicele 3 B. Utilizarea unei oligosonde eubacteriene marcate cu izotiocianat de fluoresceină (FITC) permite controlul procesului de hibridizare colorând toate eubacteriile prezente
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 3) într-un tampon fosfat 0,01 M (PB), dintr-o cultură de 3-5 zile. Se prepară lame separate de control pozitiv din sușa omologă sau din orice altă sușă de referință de R. solanacearum, în suspensie în extract de cartof, în conformitate cu apendicele 3 B. Utilizarea unei oligosonde eubacteriene marcate cu izotiocianat de fluoresceină (FITC) permite controlul procesului de hibridizare colorând toate eubacteriile prezente în eșantion. Materialele de control pozitiv
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
prezența celulelor intens fluorescente, cu o morfologie tipică de R. solanacearum în ferestrele de test ale lamelor (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei de control pozitiv sau mai bună. Celulele cu colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. 7.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie refăcut. Aceasta se poate întâmpla atunci când toate lamele unui
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
main). Se recomandă să se stabilească titrul pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion care a dat anterior rezultate negative pentru R. solanacearum și o suspensie a unei bacterii care nu provoacă reacții încrucișate într-un tampon fosfat (PBS) ca eșantioane de control negativ
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
tampon fosfat (PBS) ca eșantioane de control negativ. Drept eșantion de control pozitiv, se folosesc alicote de extracte de eșantion care au dat anterior rezultate negative, amestecate cu 103-104 de celule/ml de biovar 2 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 2 A și B). Pentru a compara rezultatele din fiecare placă, se folosește o suspensie standard de 105-106 de celule/ml în PBS de R. solanacearum. Eșantioanele de control pozitiv
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]