15,443 matches
-
metoda de analiză. ANEXA II PROTOCOL DE TESTARE PENTRU DIAGNOSTICAREA, DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM (SMITH) YABUUCHI ET AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
PENTRU DIAGNOSTICAREA, DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM (SMITH) YABUUCHI ET AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof.........................................................................17 1. Pregătirea
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof.........................................................................17 1. Pregătirea eșantionului pentru testare...................................................17 2. Test de imunofluorescență (IF)............................................................18 3. Test de imunoadsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA)........20 4. Testul de reacție de polimerizare în lanț (PCR(tm))..........................20 5. Testul de placare selectivă ..............................................................22
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
5 Materiale pentru testul ELISA..........................................................................28 Apendicele 6 Materiale pentru testul PCR..............................................................................29 Apendicele 7 Materiale pentru test(ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Materiale pentru testul PCR..............................................................................29 Apendicele 7 Materiale pentru test(ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă, izolarea agentului patogen din țesutul vascular infectat pe mediile de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă, izolarea agentului patogen din țesutul vascular infectat pe mediile de diagnosticare și, în cazul unui rezultat pozitiv, identificarea culturii ca fiind Ralstonia solanacearum. Referințe
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
unul dintre testele enumerate în secțiunea II.4.1, în combinație cu un test de patogenicitate (secțiunea II.4.3). Caracterizarea sușei este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum din eșantioanele de tuberculi de cartof Protocolul este destinat detectării infecțiilor latente în tuberculii de cartof printr-unul sau, de preferință, mai multe teste de triere care, dacă sunt pozitive, sunt suplimentate prin izolarea agentului patogen; urmat de identificarea unei culturi pure ca fiind Ralstonia solanacearum
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
combinație cu un test de patogenicitate (secțiunea II.4.3). Caracterizarea sușei este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum din eșantioanele de tuberculi de cartof Protocolul este destinat detectării infecțiilor latente în tuberculii de cartof printr-unul sau, de preferință, mai multe teste de triere care, dacă sunt pozitive, sunt suplimentate prin izolarea agentului patogen; urmat de identificarea unei culturi pure ca fiind Ralstonia solanacearum , în cazul izolării unor colonii tipice. Referințe la diagramă 1
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Testul este folosit pentru multe alte bacterii de carantină, de exemplu Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Datorită parametrilor de citire specificați în această metodă, este un test sensibil (pragul de sensibilitate de 10³ - 104 celule pe ml de extract final de cartof). Factorul critic pentru siguranța rezultatelor testului este calitatea antiserului. Doar antiserul cu un titru superior (minim 2000 pentru antiserul brut) este acceptabil și toate testele trebuie efectuate la titrul antiserului sau o diluție sub titru. Este preferată metoda indirectă. Metoda
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
specificitate echivalente metodei indirecte. Testul IF are avantajul interpretării subiective a morfologiei colorației celulare și intensității fluorescenței care oferă informații asupra specificității reacției. Reacțiile încrucișate cu bacterii apropiate din punct de vedere serologic din sol sau asociate cu țesuturi de cartof cu morfologia celulară a Ralstonia solanacearum sunt obișnuite. Testul IF poate fi utilizat ca test unic de triere, deși în cazurile în care sunt bănuite reacții încrucișate ar trebui făcut un test de triere suplimentar bazat pe un principiu biologic
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
3 -6 zile după prepararea eșantionului. Agentul patogen este obținut direct în cultură și poate fi identificat imediat. Pentru exploatarea completă a potențialului său, testul cere o pregătire atentă a taloanelor pentru a se evita bacteriile secundare asociate tuberculului de cartof care sunt organisme concurente ale Ralstonia solanacearum în mediu și pot afecta dezvoltarea agentului patogen. Unele sușe se pot dezvolta insuficient, deoarece componentele mediului pot afecta organismul țintă. Se cere de asemenea atenție la diferențierea Ralstonia solanacearum de celelalte bacterii
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
diferit pentru confirmarea sau infirmarea diagnosticului. În asemenea cazuri cel mai recomandat test este testul IF. 5 Testul ELISA Testul ELISA este în general mai puțin sensibil decât testul IF (prag de sensibilitate 104- 105 celule pe extract final de cartof). Testul este ieftin și rapid, dar în general mai vulnerabil la false rezultate pozitive (reacții încrucișate) și negative (inhibare de către moleculele fenolice din extractul de cartof). Cerințele de specificitate a antiserului sunt extrem de mari. Testul ELISA nu poate fi folosit
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
sensibil decât testul IF (prag de sensibilitate 104- 105 celule pe extract final de cartof). Testul este ieftin și rapid, dar în general mai vulnerabil la false rezultate pozitive (reacții încrucișate) și negative (inhibare de către moleculele fenolice din extractul de cartof). Cerințele de specificitate a antiserului sunt extrem de mari. Testul ELISA nu poate fi folosit ca test de triere unic. 6 Testul PCR PCR are potențialul unei detectări foarte sensibile, deși testul este ușor inhibat de componente de plantă sau de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
specificitate a antiserului sunt extrem de mari. Testul ELISA nu poate fi folosit ca test de triere unic. 6 Testul PCR PCR are potențialul unei detectări foarte sensibile, deși testul este ușor inhibat de componente de plantă sau de extract de cartof ducând la un rezultat negativ fals. Unii cultivari de cartof conțin mai mulți inhibitori decât alții. De aceea este necesară îndepărtarea acestor inhibitori. Inhibiția se poate reduce prin diluare, dar se diluează și populația de Ralstonia solanacearum. Trebuie acordată multă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
fi folosit ca test de triere unic. 6 Testul PCR PCR are potențialul unei detectări foarte sensibile, deși testul este ușor inhibat de componente de plantă sau de extract de cartof ducând la un rezultat negativ fals. Unii cultivari de cartof conțin mai mulți inhibitori decât alții. De aceea este necesară îndepărtarea acestor inhibitori. Inhibiția se poate reduce prin diluare, dar se diluează și populația de Ralstonia solanacearum. Trebuie acordată multă atenție în toate etapele pregătirii eșantionului și testului pentru a
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
false. Testele pozitive false pot să apară de asemenea din omologie de secvențe cu alte organisme. Din aceste motive, testul direct PCR nu poate fi folosit ca test unic de triere. 7 Testul de îmbogățire Eșantioanele de extract final de cartof incubat în mediu nutritiv semi-selectiv, cum este mediul nutrivitv modificat SMSA, permite multiplicarea Ralstonia solanacearum. Poate mult mai important este faptul că, de asemenea, diluează potențialii inhibitori ai testelor ELISA sau PCR. Astfel, Ralstonia solanacearum în mediu nutritiv îmbogățit poate
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Cu toate acestea, datorită relativei lipse de experiență în lucrul cu ele, nu pot fi utilizate ca metode unice de detectare. 8 Testul de probă biologică Testul de probă biologică este folosit pentru izolarea Ralstonia solanacearum din extractele finale de cartof prin îmbogățire selectivă într-o plantă gazdă și nu poate fi făcut pe plante de tomate sau vinete. Testul solicită condiții optime de incubare specificate în prezenta metodă. Bacteriile inhibitoare ale Ralstonia solanacearum în mediul SMSA probabil că nu vor
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cel puțin unul dintre testele enumerate în secțiunea II.4.1., în combinație cu un test al patogenicității (secțiunea II.4.3.). Caracterizarea sușelor este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. SECȚIUNEA II Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată 1. Simptome 1.1 Simptome la cartof Planta de cartof. Stadiul incipient al infecției este reprezentat de ofilirea frunzelor înspre vârful plantei în timpul temperaturilor diurne ridicate și de revenirea în timpul
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]