2,709 matches
-
9. Fidelitatea Nu dispunem încă de rezultatele vreunor teste inelare recunoscute la nivel internațional. V. INVENTARIEREA MICROORGANISMELOR - NUMĂRARE PE PLACĂ LA 21șC 1. Obiectul și domeniul de aplicare Prezentul capitol descrie procedura de referință de inventariere a microorganismelor prin tehnica numărării coloniilor la 21șC, în laptele pasteurizat preincubat timp de cinci zile la 6șC, în principal în scopul determinării gradului de contaminare a laptelui pasteurizat cu microorganisme psihotrope capabile să se înmulțească în lapte la temperatura de 6șC. 2. Definiție "Microorganisme
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
aerobioză în condițiile de operare descrise. 3. Principiu Incubarea laptelui pasteurizat la 6șC timp de cinci zile. Omogenizarea unui volum determinat de eșantion de lapte preincubat cu mediul de cultură pe cutii Petri la 21șC timp de 25 de ore. Numărarea coloniilor și calculul numărului de microorganisme per mililitru de lapte pasteurizat. 4. Aparatură și sticlărie de laborator Materialul obișnuit de laborator și, mai ales: 4.1 Aparatură 4.1.1 Cuptor cu aer cald, reglabil la 170 - 175șC. 4.1
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
din material sintetic steril, transparent și incolor, fundul plăcilor având un diametru interior de aproximativ 90-100 mm. Adâncimea interioară trebuie să fie de cel puțin 10 mm. Fundul nu trebuie să prezinte nici un fel de neregularități care ar putea stânjeni numărarea coloniilor. 4.2.5 Sterilizarea sticlăriei Sticlăria de laborator trebuie sterilizată cu ajutorul uneia dintre următoarele metode: a) în cuptorul cu aer cald (4.1.1.), la o temperatură între 170 și 175șC, timp de cel puțin o oră; b) în
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
trebuie să fie închise ermetic, iar dopurile sau capacele baloanelor nu trebuie să fie strânse. Se usucă sticlăria sterilizată în autoclavă pentru eliminarea tuturor vaporilor. Pipetele trebuie sterilizate în cuptorul cu aer cald (4.1.1). 5. Mediul de cultură - numărarea germenilor din lapte pe placa de agar-agar 5. 1. Compoziție Extract de drojdie 2,5 g Tripton 5,0 g D (+) Glucoză sau dextroză 1,0 g Lapte praf degresat 1,0 g Agar-agar între 10 și 15 g, în funcție de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
așezate mai mult de șase una peste cealaltă. Plăcile nu trebuie să se atingă între ele, nici să fie în contact cu pereții sau cu partea superioară a etuvei. Se incubează la 21 ± 1șC timp de 25 ore. 7.8. Numărarea coloniilor Se numără coloniile de pe cutiile Petri cu cel mult 300 de colonii. Se examinează plăcile la lumină scăzută. Se poate folosi o lupă (pct. 4.1.6) și/sau un contor cu înregistrare (4.1.8) pentru facilitarea numărării
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
Numărarea coloniilor Se numără coloniile de pe cutiile Petri cu cel mult 300 de colonii. Se examinează plăcile la lumină scăzută. Se poate folosi o lupă (pct. 4.1.6) și/sau un contor cu înregistrare (4.1.8) pentru facilitarea numărării. A nu se confunda particulele de materie precipitată cu coloniile de mărimea unui vârf de ac. Dacă există îndoieli, se face analiză minuțioasă, utilizând, dacă este cazul, o lupă de ordin superior (4.1.7) pentru a distinge coloniile de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
face o estimare și se înmulțește cu inversul factorului de diluare. Rezultatul se exprimă indicându-se "număr estimat de microorganisme per mililitru". 9. Fidelitatea Nu dispunem încă de rezultatele vreunor teste inelare recunoscute la nivel internațional. VI. INVENTARIEREA COLIFORMILOR - METODA NUMĂRĂRII COLONIILOR OBȚINUTE LA 30șC 1. Obiectul și domeniul de aplicare Prezentul capitol descrie procedura de referință de inventariere a coliformilor din laptele pasteurizat prin tehnica numărării coloniilor la 30șC. 2. Definiție "Coliformi" reprezintă bacteriile care, la 30șC, formează colonii caracteristice
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
încă de rezultatele vreunor teste inelare recunoscute la nivel internațional. VI. INVENTARIEREA COLIFORMILOR - METODA NUMĂRĂRII COLONIILOR OBȚINUTE LA 30șC 1. Obiectul și domeniul de aplicare Prezentul capitol descrie procedura de referință de inventariere a coliformilor din laptele pasteurizat prin tehnica numărării coloniilor la 30șC. 2. Definiție "Coliformi" reprezintă bacteriile care, la 30șC, formează colonii caracteristice sau colonii necaracteristice care fermentează lactoza cu producere de gaz în condițiile de operare descrise. 3. Principiu Amestecarea unui volum determinat din eșantionul de lapte cu
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
necaracteristice care fermentează lactoza cu producere de gaz în condițiile de operare descrise. 3. Principiu Amestecarea unui volum determinat din eșantionul de lapte cu mediul de cultură pe cutiile Petri puse la incubare la 30șC timp de 24 de ore. Numărarea coloniilor caracteristice și, dacă este cazul, confirmarea identității coloniilor necaracteristice verificând capacitatea lor de a fermenta lactoza. Apoi, calcularea numărului de coliformi per mililitru de lapte pasteurizat. 4. Aparatură și sticlărie de laborator Materialul obișnuit de laborator și, mai ales
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
material sintetic steril, transparent și incolor, fundul plăcilor având un diametru interior de aproximativ 90-100 de mm. Înălțimea interioară trebuie să fie de cel puțin 10 mm. Fundul nu trebuie să prezinte nici un fel de neregularități care ar putea stânjeni numărarea coloniilor. 4.2.5 Sterilizarea sticlăriei Sticlăria de laborator trebuie sterilizată cu ajutorul uneia dintre următoarele metode: a) în cuptorul cu aer cald (pct. 4.1.1), la o temperatură de 170 până la 175șC, timp de cel puțin o oră; b
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
mult de șase una peste cealaltă. Plăcile nu trebuie să se atingă între ele și nici să fie în contact cu pereții sau cu partea superioară a etuvei. Se incubează la 30 ± 1șC timp de 24 ± 2 ore. 6.6 Numărarea coloniilor 6.6.1 Se numără coloniile de pe cutiile Petri cu cel mult 150 de colonii. Se vor număra coloniile roșu închis cu un diametru de cel puțin 0,5 mm, cu sau fără precipitat în jur, caracteristice coliformilor. 6
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
anse cu buclă (pct. 4.1.6). Se incubează eprubetele la 30 ± 1șC timp de 24 ± 2 ore. Coloniile care produc gaz în clopotele Durham vor fi considerate coliformi. 7. Calculul și exprimarea rezultatelor 7.1 Se vor reține pentru numărare (vezi pct. 7.4) plăcile cu cel mult 150 de colonii. 7.2 Dacă este nevoie de un test de confirmare, se calculează numărul de colonii de coliformi cu ajutorul procentajului de colonii de coliformi confirmat. 7.3 Se calculează numărul
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
și celulele epiteliale) al căror nucleu poate fi colorat diferit de albastrul de metilen. 3. Principiu Etalarea a 0,01 ml de lapte pe o suprafață de 1 cm2 a unei lame port-obiect. Pelicula de lapte este uscată și colorată. Numărarea se efectuează cu ajutorul unui microscop. Numărul celulelor somatice inventoriate pentru o suprafață determinată se înmulțește cu un factor de multiplicare pentru a se obține numărul de celule pe ml. 4. Reactivi Produsele chimice trebuie să fie de calitate analitică. Soluția
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
surplusului de colorant. Se usucă din nou și se păstrează la adăpost de praf. 6.6. Etalonarea câmpului microscopic Alegându-se puterea de mărire de 500-1 000 de ori, se măsoară cu ajutorul micrometrului obiectiv (5.7) diametrul câmpului microscopic. 7. Numărarea și calcularea 7.1. Inventarierea celulelor Se utilizează un microscop (pct. 5.1). În locul inventarierii celulelor, se inventariază doar nucleele acestora, ușor de recunoscut și vizibile în proporție de cel puțin 50% în câmpul microscopic. Se numără benzile sau câmpurile
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
un microscop (pct. 5.1). În locul inventarierii celulelor, se inventariază doar nucleele acestora, ușor de recunoscut și vizibile în proporție de cel puțin 50% în câmpul microscopic. Se numără benzile sau câmpurile aflate în treimea centrală a peliculei, evitându-se numărarea benzilor sau a câmpurilor alese exclusiv din zonele periferice ale peliculei. Măsurile de precauție la pregătirea peliculelor și deci fidelitatea rezultatelor trebuie verificate cel puțin o dată pe lună, numărându-se părți diferite din peliculă. Inventarierea se poate face și prin
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
benzilor sau a câmpurilor alese exclusiv din zonele periferice ale peliculei. Măsurile de precauție la pregătirea peliculelor și deci fidelitatea rezultatelor trebuie verificate cel puțin o dată pe lună, numărându-se părți diferite din peliculă. Inventarierea se poate face și prin numărarea câmpurilor microscopice repartizate în așa fel încât toate părțile peliculei să fie reprezentate în mod echivalent. 7.2. Determinarea numărului minim de celule de numărat Dat fiind faptul că inventarierea microscopică a celulelor somatice poate fi utilizată și pentru etalonarea
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
repartizate în așa fel încât toate părțile peliculei să fie reprezentate în mod echivalent. 7.2. Determinarea numărului minim de celule de numărat Dat fiind faptul că inventarierea microscopică a celulelor somatice poate fi utilizată și pentru etalonarea tehnicilor de numărare mecanică și automată, coeficientul de variație al numărărilor pe eșantioane identice nu trebuie să fie mai mare decât cel obținut cu aparatele electronice. Coeficientul de variație pentru un eșantion de lapte care conține de la 400 000 la 600 000 de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
să fie reprezentate în mod echivalent. 7.2. Determinarea numărului minim de celule de numărat Dat fiind faptul că inventarierea microscopică a celulelor somatice poate fi utilizată și pentru etalonarea tehnicilor de numărare mecanică și automată, coeficientul de variație al numărărilor pe eșantioane identice nu trebuie să fie mai mare decât cel obținut cu aparatele electronice. Coeficientul de variație pentru un eșantion de lapte care conține de la 400 000 la 600 000 de celule pe ml nu trebuie să depășească 5
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
care au fost inventariate (de exemplu, 400 pentru CV = 5%). 7.3. Calculul factorului de multiplicare Folosindu-se 0,01 ml de lapte, factorul de multiplicare se calculează conform punctelor 7.3.1. sau 7.3.2. 7.3.1. Numărarea benzilor în peliculă Lungimea benzilor de inventariat este de 5 mm, adică exact lățimea peliculei. Lățimea benzilor corespunde în schimb diametrului câmpului microscopic, determinat cu micrometrul obiectiv (pct. 5.7). Factorul de multiplicare = unde d este diametrul în milimetri al
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
schimb diametrului câmpului microscopic, determinat cu micrometrul obiectiv (pct. 5.7). Factorul de multiplicare = unde d este diametrul în milimetri al câmpului microscopic, determinat cu micrometrul obiectiv (pct. 5.7). b este numărul total al benzilor numărate. 7.3.2. Numărarea câmpurilor microscopice în treimea centrală a peliculei sau cu ajutorul unei grile Factorul de multiplicare = unde d reprezintă diametrul în milimetri al câmpului microscopic determinat cu micrometrul obiectiv (pct. 5.7), s reprezintă numărul câmpurilor numărate. 7.4 Calcularea conținutului de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de potasiu, se vor respecta normele locale privitoare la evacuarea deșeurilor. 7. Mod de operare 7.1. Pregătirea eșantionului Laptele de analizat trebuie conservat după muls timp de cel puțin 24 de ore la aproximativ 2-6°C. Nu se recomandă numărarea eșantioanelor în ziua mulsului, fără tratare prealabilă, întrucât rezultatele riscă să fie prea slabe. Dacă totuși trebuie efectuată numărarea, eșantionul trebuie pretratat timp de cel puțin trei ore cu ajutorul dicromatului de potasiu (vezi pct. 6.2.1). 7.2. Mod
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
Laptele de analizat trebuie conservat după muls timp de cel puțin 24 de ore la aproximativ 2-6°C. Nu se recomandă numărarea eșantioanelor în ziua mulsului, fără tratare prealabilă, întrucât rezultatele riscă să fie prea slabe. Dacă totuși trebuie efectuată numărarea, eșantionul trebuie pretratat timp de cel puțin trei ore cu ajutorul dicromatului de potasiu (vezi pct. 6.2.1). 7.2. Mod de preparare Se încălzește eșantionul pretratat (pct. 7.1) sau eșantionul netratat ținut cel puțin o zi în baia
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
7.2. Mod de preparare Se încălzește eșantionul pretratat (pct. 7.1) sau eșantionul netratat ținut cel puțin o zi în baia de apă (pct. 5.2) la aproximativ 40°C. Se conservă apoi eșantionul la temperatura ambiantă până în momentul numărării. 7.3. Numărarea celulelor Se trece la numărare cu ajutorul contorului (pct. 5.1) în primele 15 minute după finalizarea încălzirii (vezi pct. 7.2). Chiar înainte de numărare, se amestecă bine eșantioanele pentru a se obține o repartizare cât mai omogenă
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de preparare Se încălzește eșantionul pretratat (pct. 7.1) sau eșantionul netratat ținut cel puțin o zi în baia de apă (pct. 5.2) la aproximativ 40°C. Se conservă apoi eșantionul la temperatura ambiantă până în momentul numărării. 7.3. Numărarea celulelor Se trece la numărare cu ajutorul contorului (pct. 5.1) în primele 15 minute după finalizarea încălzirii (vezi pct. 7.2). Chiar înainte de numărare, se amestecă bine eșantioanele pentru a se obține o repartizare cât mai omogenă a celulelor somatice
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
pretratat (pct. 7.1) sau eșantionul netratat ținut cel puțin o zi în baia de apă (pct. 5.2) la aproximativ 40°C. Se conservă apoi eșantionul la temperatura ambiantă până în momentul numărării. 7.3. Numărarea celulelor Se trece la numărare cu ajutorul contorului (pct. 5.1) în primele 15 minute după finalizarea încălzirii (vezi pct. 7.2). Chiar înainte de numărare, se amestecă bine eșantioanele pentru a se obține o repartizare cât mai omogenă a celulelor somatice. Ulterior, diluarea și prepararea eșantionului
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]