1,684 matches
-
transplant de măduvă osoasă decât pentru transplantul de alte organe. Există date potrivit cărora împerecherea donor-receptor pentru alele HLA -DRB1 este importantă în descreșterea riscului de respingere de transplant față de o boală a gazdei receptoare, deși, pentru moment, importanța împerecherii alelelor la alți loci genici nu este clară. Odată cu izolarea și identificarea genelor HLA, a devenit posibilă utilizarea tehnicilor de analiză a ADN în tipajul HLA printre care sunt: hibridizarea probei oligonucleotidice cu specificitate de secvență (SSOPH), reacția de polimerizare în
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
într-un amestec de reacție care este desfășurată într- un termocycler și prin care se produc milioane de copii ale acestei regiuni ADN utilizate în reacția de tipare HLA. Multe tehnici de tipare utilizează secvențe primer care sunt complementare tuturor alelelor la un locus HLA, pe când alte proceduri de tipare utilizează seturi de primeri care sunt complementari doar unui subset de alele, la un anumit asemenea locus. Acum este posibilă utilizarea hibridării de probe oligonucleotidice sintetice monocatenare cu specificitate de secvență
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
regiuni ADN utilizate în reacția de tipare HLA. Multe tehnici de tipare utilizează secvențe primer care sunt complementare tuturor alelelor la un locus HLA, pe când alte proceduri de tipare utilizează seturi de primeri care sunt complementari doar unui subset de alele, la un anumit asemenea locus. Acum este posibilă utilizarea hibridării de probe oligonucleotidice sintetice monocatenare cu specificitate de secvență (SSOP) cu ADN amplificat și denaturat în vederea identificării de alele. Atunci când nu poate fi identificată o secvență unică se impune utilizarea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
utilizează seturi de primeri care sunt complementari doar unui subset de alele, la un anumit asemenea locus. Acum este posibilă utilizarea hibridării de probe oligonucleotidice sintetice monocatenare cu specificitate de secvență (SSOP) cu ADN amplificat și denaturat în vederea identificării de alele. Atunci când nu poate fi identificată o secvență unică se impune utilizarea mai multor oligonucleotide diferite în definirea unei alele specifice HLA. Acest lucru este valabil pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
posibilă utilizarea hibridării de probe oligonucleotidice sintetice monocatenare cu specificitate de secvență (SSOP) cu ADN amplificat și denaturat în vederea identificării de alele. Atunci când nu poate fi identificată o secvență unică se impune utilizarea mai multor oligonucleotide diferite în definirea unei alele specifice HLA. Acest lucru este valabil pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
specificitate de secvență (SSOP) cu ADN amplificat și denaturat în vederea identificării de alele. Atunci când nu poate fi identificată o secvență unică se impune utilizarea mai multor oligonucleotide diferite în definirea unei alele specifice HLA. Acest lucru este valabil pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
alele specifice HLA. Acest lucru este valabil pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile de hibridizare sunt ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile de hibridizare sunt ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau cu o etichetă moleculară de detecție neradioactivă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile de hibridizare sunt ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau cu o etichetă moleculară de detecție neradioactivă. După vizualizare, pattern-ul de hibridizare poate fi citit în vederea determinării alelelor de interes. Metoda SSOP este adesea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau cu o etichetă moleculară de detecție neradioactivă. După vizualizare, pattern-ul de hibridizare poate fi citit în vederea determinării alelelor de interes. Metoda SSOP este adesea utilizată în situațiile în care sunt tipate multe probe, în baterii mari. Modificările de convertire a acesteia pentru procedura în care se utilizează formatul mic al unei camere de microtitrare permit ca o singură
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
numit „dotblot” revers, probele oligonucleotidice sunt legate la un suport solid. ADN din probele de analizat este amplificat prin folosirea de primeri marcați cu biotină. ADN amplificat este apoi hibridizat cu probele imobilizate care conțin secvențe complementare secvențelor găsite în alelele potențial prezente din ADN analizat. După vizualizare cu folosirea unui sistem de de-tecție legat la avidină, pattern-ul de hibridizare este utilizat pentru determinarea alelelor prezente. Această metodă este utilă în tiparea oricărui număr de probe, existând kit-uri comerciale
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
ADN amplificat este apoi hibridizat cu probele imobilizate care conțin secvențe complementare secvențelor găsite în alelele potențial prezente din ADN analizat. După vizualizare cu folosirea unui sistem de de-tecție legat la avidină, pattern-ul de hibridizare este utilizat pentru determinarea alelelor prezente. Această metodă este utilă în tiparea oricărui număr de probe, existând kit-uri comerciale pentru aplicarea ei. 12.1. APLICAREA ANALIZEI RFLP Dacă două alele diferă pentru o anumită secvență de nucleotide, fragmentul ADN amplificat poate fi testat pentru
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
sistem de de-tecție legat la avidină, pattern-ul de hibridizare este utilizat pentru determinarea alelelor prezente. Această metodă este utilă în tiparea oricărui număr de probe, existând kit-uri comerciale pentru aplicarea ei. 12.1. APLICAREA ANALIZEI RFLP Dacă două alele diferă pentru o anumită secvență de nucleotide, fragmentul ADN amplificat poate fi testat pentru clivaj cu enzime de restricție specifice. Fragmentele ADN rezultate (restrictele) sunt analizate prin electroforeză în gel. Această abordare este disponibilă doar atunci când sunt prezente situsuri de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
restrictele) sunt analizate prin electroforeză în gel. Această abordare este disponibilă doar atunci când sunt prezente situsuri de restricție cunoscute, pe când metoda PCR-RFLP se folosește ca o tehnică suplimentară pentru identificarea grosieră a tipurilor HLA. O altă metodă de identificare a alelelor HLA utilizează primeri cu specificitate de secvență (SSP) în cadrul reacției PCR numită, în acest caz, și metoda ARMS (de la Allele Refractory Mutation System) adică Sistemul Alelic Refractar la Mutație. Primerii se asociază la un subset de alele HLA cu secvențe
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de identificare a alelelor HLA utilizează primeri cu specificitate de secvență (SSP) în cadrul reacției PCR numită, în acest caz, și metoda ARMS (de la Allele Refractory Mutation System) adică Sistemul Alelic Refractar la Mutație. Primerii se asociază la un subset de alele HLA cu secvențe complimentare la secvența primerilor (fig. 12.2). În cadrul reacții PCR ulterioare sunt amplificate doar aceste alele selectate în condiții strict controlate. ADN amplificat cu ajutorul unor asemenea primeri este identificat prin gel electroforeză și apoi pattern-ul de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
și metoda ARMS (de la Allele Refractory Mutation System) adică Sistemul Alelic Refractar la Mutație. Primerii se asociază la un subset de alele HLA cu secvențe complimentare la secvența primerilor (fig. 12.2). În cadrul reacții PCR ulterioare sunt amplificate doar aceste alele selectate în condiții strict controlate. ADN amplificat cu ajutorul unor asemenea primeri este identificat prin gel electroforeză și apoi pattern-ul de amplificare este utilizat spre a determina tipurile de HLA. Procedura SSP este utilă în tiparea unui număr mic de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
gel electroforeză și apoi pattern-ul de amplificare este utilizat spre a determina tipurile de HLA. Procedura SSP este utilă în tiparea unui număr mic de eșantioane, existând kit-uri comerciale pentru utilizarea ei. O altă metodă de identificare a alelelor HLA este reprezentată de secvențierea directă a ADN al alelelor HLA purtate de un individ uman. Secvențierea este laborioasă și foarte complexă, dar este cea mai precisă în identificarea corectă a perechii HLA potrivită pentru realizarea unui transplant. Aceasta deoarece
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
spre a determina tipurile de HLA. Procedura SSP este utilă în tiparea unui număr mic de eșantioane, existând kit-uri comerciale pentru utilizarea ei. O altă metodă de identificare a alelelor HLA este reprezentată de secvențierea directă a ADN al alelelor HLA purtate de un individ uman. Secvențierea este laborioasă și foarte complexă, dar este cea mai precisă în identificarea corectă a perechii HLA potrivită pentru realizarea unui transplant. Aceasta deoarece, secvențierea poate identifica toate diferențele prezente în regiunea analizată, pe când
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
interes, iar ADN amplificat este secvențiat direct, fără o clonare prealabilă a ADN într-un vector potrivit. Cum majoritatea persoanelor sunt heterozigote la locii HLA, se pot alege primeri cu specificitate de secvență, spre a se realiza amplificarea unei singure alele la un locus HLA testat. Există alternativa amplificării unui amestec de alele și de a le secvenția, utilizându-se analiza pozițiilor nucleotidice polimorfice, spre a identifica alelele prezente. Secvențiatoare automate de ADN facilitează achiziția și analiza datelor de secvențiere. Pentru
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
ADN într-un vector potrivit. Cum majoritatea persoanelor sunt heterozigote la locii HLA, se pot alege primeri cu specificitate de secvență, spre a se realiza amplificarea unei singure alele la un locus HLA testat. Există alternativa amplificării unui amestec de alele și de a le secvenția, utilizându-se analiza pozițiilor nucleotidice polimorfice, spre a identifica alelele prezente. Secvențiatoare automate de ADN facilitează achiziția și analiza datelor de secvențiere. Pentru stabilirea donorului potrivit unui anumit receptor se poate aplica și metoda analizei
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
alege primeri cu specificitate de secvență, spre a se realiza amplificarea unei singure alele la un locus HLA testat. Există alternativa amplificării unui amestec de alele și de a le secvenția, utilizându-se analiza pozițiilor nucleotidice polimorfice, spre a identifica alelele prezente. Secvențiatoare automate de ADN facilitează achiziția și analiza datelor de secvențiere. Pentru stabilirea donorului potrivit unui anumit receptor se poate aplica și metoda analizei polimorfismelor conformaționale cu specificitate de secvență sau a tipării heteroduplexului. În cadrul acestei metode, ADN amplificat
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
primitor sunt supuse procedurii de renaturare, după care se efectuează electroforeza. Monocatenele provenite de la un heterozigot renaturat A-A’ și a-a’ în care literele A și A’, respectiv a și a’ reprezintă catenele complementare ale ADN purtător al unei alele, respectiv al celeilalte alele, se vor asocia, spre a realiza homoduplexuri (A-A’ și respectiv a-a’) și heteroduplexuri (A-a’ și respectiv a-A’). Mobilitățile fragmentelor reasociate (dublu-catenare) vor fi variabile în funcție de secvența lor. Pe această cale se pot
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de renaturare, după care se efectuează electroforeza. Monocatenele provenite de la un heterozigot renaturat A-A’ și a-a’ în care literele A și A’, respectiv a și a’ reprezintă catenele complementare ale ADN purtător al unei alele, respectiv al celeilalte alele, se vor asocia, spre a realiza homoduplexuri (A-A’ și respectiv a-a’) și heteroduplexuri (A-a’ și respectiv a-A’). Mobilitățile fragmentelor reasociate (dublu-catenare) vor fi variabile în funcție de secvența lor. Pe această cale se pot compara pattern-urile mobilităților
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
asocia, spre a realiza homoduplexuri (A-A’ și respectiv a-a’) și heteroduplexuri (A-a’ și respectiv a-A’). Mobilitățile fragmentelor reasociate (dublu-catenare) vor fi variabile în funcție de secvența lor. Pe această cale se pot compara pattern-urile mobilităților electroforetice ale alelelor donorului și receptorului, spre a se deduce dacă există potrivire alelică. Aceste pattern-uri electroforetice obținute fie pe calea SSCP, fie pe calea analizei heteroduplexului sunt complexe, dar totodată edificatoare asupra potrivirii alelelor HLA de la donor cu acelea de la receptor
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
pot compara pattern-urile mobilităților electroforetice ale alelelor donorului și receptorului, spre a se deduce dacă există potrivire alelică. Aceste pattern-uri electroforetice obținute fie pe calea SSCP, fie pe calea analizei heteroduplexului sunt complexe, dar totodată edificatoare asupra potrivirii alelelor HLA de la donor cu acelea de la receptor. Dar, identificarea în sine a alelelor specifice HLA existente la o anumită persoană este mult mai dificilă. Specificitatea tipajului HLA bazat pe analiza ADN este în mare măsură influențată de condițiile de reasociere
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]