1,913 matches
-
6). Când au fost folosite recipiente, site sau plase pentru a păstra ouăle în cuva principala, acestea trebuie îndepărtate după eclozarea larvelor 1, cu excepția plaselor care sunt păstrate pentru a împiedica peștii să scape. Dacă este necesar să se transfere larvele, acestea nu trebuie expuse la aer și nu trebuie folosite minciocuri pentru a scoate peștii din recipientele conținând ouăle (aceste precauții nu sunt necesare în cazul speciilor mai puțin fragile, cum este crapul). Momentul transferului variază în funcție de specie și transferul
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
cu înălțimea redusă și, daca este necesar, echipate cu o sita la mică distanță de fundul păharului. Dacă volumul acestor recipiente este suficient pentru a respecta cerințele de încărcare (vezi 1.7.1.2) nu este necesar transferul embrionilor și larvelor. 1.6.5. Apă Este corespunzătoare pentru test orice apă care respectă caracteristicile chimice ale unei ape de diluare enumerate în apendicele 4 și în care supraviețuirea loturilor martor din specia testată este cel puțin la fel de bună că aceea prezentată
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
semnificative asupra supraviețuirii și nici efecte adverse vizibile asupra stadiilor de viață timpurii. La testele în regim semistatic, pot fi adoptate două moduri de lucru diferite: fie (i) se prepară soluții de lucru noi în recipiente curate, iar ouăle și larvele sunt transferate cu grijă în noile recipiente, într-un volum mic din vechea soluție evitând expunerea la aer fie (îi) organismele sunt păstrate în recipientele inițiale în timp ce o fracțiune (cel puțin trei sferturi) din apa de testare este schimbată. Frecvență
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
a concentrației substanței testate (adică în afara intervalului de 80 - 120% din concentrația nominală sau sub 80% din concentrația măsurată inițial) pe parcursul schimbării apei, trebuie luată în considerare folosirea unui test în regim dinamic. În oricare dintre cazuri, trebuie evitată stresarea larvelor în timpul operațiunii de schimbare a apei. La testele în regim dinamic este necesar un sistem care să dozeze și să dilueze continuu soluția de bază a substanței testate (de exemplu pompă dozatoare, diluator proporțional, sistem de saturație) pentru a asigura
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
de gastrula. În cazul ouălor obținute de la furnizori comerciali, s-ar putea să nu fie posibilă începerea testului imediat dupa fertilizare. Deoarece amânarea începerii testului poate influența puternic sensibilitatea acestuia, testul trebuie inițiat în următoarele opt ore după fertilizare. Deoarece larvele nu sunt hrănițe pe durata expunerii, testul trebuie să se încheie imediat înainte ca sacul vitelin al fiecărei larve din fiecare incinta să fi fost complet absorbit sau înainte de a apărea moartea prin inaniție la loturile martor. Durată depinde de
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
dupa fertilizare. Deoarece amânarea începerii testului poate influența puternic sensibilitatea acestuia, testul trebuie inițiat în următoarele opt ore după fertilizare. Deoarece larvele nu sunt hrănițe pe durata expunerii, testul trebuie să se încheie imediat înainte ca sacul vitelin al fiecărei larve din fiecare incinta să fi fost complet absorbit sau înainte de a apărea moartea prin inaniție la loturile martor. Durată depinde de specia folosită. Câteva durăte recomandate sunt prezentate în apendicele 2 și 3. 1.7.1.2. Încărcarea Numărul de
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
dorit ca observațiile să fie mai frecvente (de exemplu la fiecare 30 de minute în primele trei ore), deoarece în unele cazuri timpul de supraviețuire este mai relevant decât numărul deceselor (de exemplu când există efecte toxice acute). Embrionii și larvele moarte trebuie îndepărtate imediat ce sunt observate, fiindcă se pot descompune rapid. La îndepărtarea exemplarelor moarte trebuie să se manifeste o grijă extremă pentru a nu răni sau leza ouăle/larvele din vecinătate, acestea fiind extrem de delicate și de sensibile. Simptomele
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
deceselor (de exemplu când există efecte toxice acute). Embrionii și larvele moarte trebuie îndepărtate imediat ce sunt observate, fiindcă se pot descompune rapid. La îndepărtarea exemplarelor moarte trebuie să se manifeste o grijă extremă pentru a nu răni sau leza ouăle/larvele din vecinătate, acestea fiind extrem de delicate și de sensibile. Simptomele care indică moartea organismului variază în funcție de stadiul de viață: - pentru ouă: în special în stadiile timpurii, o pierdere accentuată a translucidității și schimbarea colorației, provocată de coagularea și/sau precipitarea
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
și schimbarea colorației, provocată de coagularea și/sau precipitarea proteinelor, conducând la un aspect alb-opac; - pentru embrioni: absența mișcărilor corpului și/sau absența bătăilor inimii și/sau decolorarea opaca la speciile ai căror embrioni sunt în mod normal translucizi; - pentru larve: imobilitatea și/sau absența mișcărilor respiratorii și/sau absența bătăilor inimii și/sau colorația alb-opacă a sistemului nervos central și/sau absența reacției la stimuli mecanici. 1.7.5.3. Aspectul anormal Numărul larvelor prezentând anomalii ale formei corpului și
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
sunt în mod normal translucizi; - pentru larve: imobilitatea și/sau absența mișcărilor respiratorii și/sau absența bătăilor inimii și/sau colorația alb-opacă a sistemului nervos central și/sau absența reacției la stimuli mecanici. 1.7.5.3. Aspectul anormal Numărul larvelor prezentând anomalii ale formei corpului și/sau pigmentare, precum și stadiul absorbției sacului vitelin trebuie înregistrate la intervale adecvate, în funcție de durată testului și de natură anomaliei în cauză. Trebuie spus că embrioni și larve anormale apar în mod natural și numărul
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
1.7.5.3. Aspectul anormal Numărul larvelor prezentând anomalii ale formei corpului și/sau pigmentare, precum și stadiul absorbției sacului vitelin trebuie înregistrate la intervale adecvate, în funcție de durată testului și de natură anomaliei în cauză. Trebuie spus că embrioni și larve anormale apar în mod natural și numărul lor poate reprezenta câteva procente în loturile martor ale unor specii. Animalele anormale nu trebuie îndepărtate din recipiente decât atunci când mor. 1.7.5.4. Comportamentul anormal Anomaliile, de exemplu hiperventilarea, înotul necoordonat
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
preferată greutății în vivo (peste zvântat). În general, într-un test efectuat corect, coeficientul de variație a lungimii în lotul martor este ≤ 20%. Aceste observații pun la dispoziția analizei statistice totalitatea datelor următoare sau unele dintre acestea: - mortalitatea cumulata, - numărul larvelor sănătoase la încheierea testului, - momentele de început și sfârșit al eclozării (adică 90% ouă eclozate în fiecare incinta de la același nivel al concentrației), - numărul larvelor eclozate în fiecare zi, - lungimea (și greutatea) animalelor supraviețuitoare la încheierea testului, - numărul larvelor cu
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
pun la dispoziția analizei statistice totalitatea datelor următoare sau unele dintre acestea: - mortalitatea cumulata, - numărul larvelor sănătoase la încheierea testului, - momentele de început și sfârșit al eclozării (adică 90% ouă eclozate în fiecare incinta de la același nivel al concentrației), - numărul larvelor eclozate în fiecare zi, - lungimea (și greutatea) animalelor supraviețuitoare la încheierea testului, - numărul larvelor cu diformități sau cu aspect anormal, - numărul larvelor prezentând comportament anormal. 2. REZULTATELE ȘI PREZENTAREA ACESTORA 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă implicarea unui statistician atât
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
numărul larvelor sănătoase la încheierea testului, - momentele de început și sfârșit al eclozării (adică 90% ouă eclozate în fiecare incinta de la același nivel al concentrației), - numărul larvelor eclozate în fiecare zi, - lungimea (și greutatea) animalelor supraviețuitoare la încheierea testului, - numărul larvelor cu diformități sau cu aspect anormal, - numărul larvelor prezentând comportament anormal. 2. REZULTATELE ȘI PREZENTAREA ACESTORA 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă implicarea unui statistician atât în structurarea cât și în analiza testului, deoarece această metodă de testare permite variații
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
început și sfârșit al eclozării (adică 90% ouă eclozate în fiecare incinta de la același nivel al concentrației), - numărul larvelor eclozate în fiecare zi, - lungimea (și greutatea) animalelor supraviețuitoare la încheierea testului, - numărul larvelor cu diformități sau cu aspect anormal, - numărul larvelor prezentând comportament anormal. 2. REZULTATELE ȘI PREZENTAREA ACESTORA 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă implicarea unui statistician atât în structurarea cât și în analiza testului, deoarece această metodă de testare permite variații considerabile în modul de lucru, cum ar fi
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
de varianta sau alte metode (adică puterea testului) trebuie calculată și menționată în raport. Trebuie spus că nu toate observațiile enumerate la pct. 1.7.5.6. sunt adecvate pentru analiză statistică de varianta. De exemplu, mortalitatea cumulata și numărul larvelor sănătoase la încheierea testului pot fi analizate folosind metode probit) Dacă urmează să fie estimate CL/CEx, una sau mai multe curbe, cum ar fi curbă logistică, trebuie ajustate la datele studiate folosind o metodă precum metodă celor mai mici
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
Rezultatele: - rezultatele oricăror studii preliminare referitoare la stabilitatea substanței testate, - date demonstrând că loturile din incintele martor au îndeplinit standardul de supraviețuire globală acceptabilă al speciei testate (apendicele 2 și 3), - rezultate despre mortalitate/supraviețuire în stadiile de embrion și larva și mortalitatea/supraviețuirea globală, - zilele de eclozare și numărul eclozărilor, - lungimea (și greutatea) corporală , - incidența și descrierea anomaliilor morfologice, dacă există, - incidența și descrierea efectelor comportamentale, dacă există, - analiza statistică și prelucrarea datelor, - la testele analizate folosind analiza de varianta
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
un bulb de aspirație flexibil. Cantitatea de apă care se transferă odată cu icrele trebuie să fie cât mai mică posibilă. Icrele sunt mai grele decât apa și ies pe la fundul tubului. Trebuie avut grijă pentru a preveni că icrele (și larvele) să vină în contact cu aerul. Proba(Probele) din lot(uri) se examinează la microscop pentru a se asigura că nu există anomalii în primele etape de dezvoltare a embrionului. Nu este permisă dezinfecția icrelor. Rata mortalității icrelor atinge apogeul
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
peștele femelă, deoarece unele femele produc în mod constant icre de bună calitate, iar altele niciodată. De asemenea, rata de dezvoltare a embrionului și rata de ieșire din ou variază de la un lot la altul. Icrele fecundate cu succes și larvele din sacul vitelin supraviețuiesc bine, în mod normal peste 90%. La 25oC, ieșirea din ou se produce la 3-5 zile de la fertilizare și sacul vitelin se absoarbe în aproximativ 13 zile după fecundare. Hisaoka și Battle au descris bine dezvoltarea
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
mod normal peste 90%. La 25oC, ieșirea din ou se produce la 3-5 zile de la fertilizare și sacul vitelin se absoarbe în aproximativ 13 zile după fecundare. Hisaoka și Battle au descris bine dezvoltarea embrionului (2). Datorită transparenței icrelor și larvelor după ieșirea din ou, se poate urmări dezvoltarea peștelui și este posibilă observarea malformațiilor. La aproximativ patru ore după depunerea icrelor, icrele nefecundate se pot distinge de cele fecundate (3). Pentru a efectua această examinare, icrele și larvele se așează
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
icrelor și larvelor după ieșirea din ou, se poate urmări dezvoltarea peștelui și este posibilă observarea malformațiilor. La aproximativ patru ore după depunerea icrelor, icrele nefecundate se pot distinge de cele fecundate (3). Pentru a efectua această examinare, icrele și larvele se așează pe vase de laborator de volum mic și se studiază la microscop. Condițiile de desfășurare a testului, care se aplică în primele etape de viață, sunt prezentate în lista din apendicele 2. Valorile optime ale pH-ului și
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
malformații majore, obținându-se astfel măsurători viciate ale lungimii. În plus, pentru fiecare tratament, va exista același număr de pești ce urmeaza sa se măsoare, asigurându-se validitatea statisticii testului. DETERMINAREA LC50 ȘI EC50 Se calculează procentul de icre și larve supraviețuitoare și se corectează cu mortalitatea din probele martor conform formulei lui Abbott (4): unde, P = supraviețuirea corectata, % P' = supraviețuirea observată la concentrațiile experimentate, % C = supraviețuirea în cazul martorului Dacă este posibil, LC50 se determina printr-o metodă corespunzătoare la
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
13-16 zile) 80 80 Medaka 24 ± 1 2 Pimephales promelas 25 ± 2 - 16 4-5 5 De îndată ce este posibil după fecundare (prima fază de gastrula) până la 4 zile după ieșirea din ou (8-9 zile) 60 70 1 Pentru embrioni. 2 Pentru larve. 3 Întuneric pentru embrioni și larve până la o săptămână după ieșirea din ou, cu excepția cazului în care se inspectează. Apoi se dă o lumină atenuata pe durata testului. APENDICE 3 CONDIȚIILE, DURATA TESTULUI ȘI CRITERIILE DE SUPRAVIEȚUIRE PENTRU ALTE SPECII
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
1 2 Pimephales promelas 25 ± 2 - 16 4-5 5 De îndată ce este posibil după fecundare (prima fază de gastrula) până la 4 zile după ieșirea din ou (8-9 zile) 60 70 1 Pentru embrioni. 2 Pentru larve. 3 Întuneric pentru embrioni și larve până la o săptămână după ieșirea din ou, cu excepția cazului în care se inspectează. Apoi se dă o lumină atenuata pe durata testului. APENDICE 3 CONDIȚIILE, DURATA TESTULUI ȘI CRITERIILE DE SUPRAVIEȚUIRE PENTRU ALTE SPECII BINE STUDIATE Specii Temperatura (oC) Salinitatea
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
grame de substanță activă pe hectar, și DL50 pe cale orală și prin contact, în μg de substanță activă pe albină (rapoarte de pericol) și, dacă este necesar, persistența reziduurilor pe sau în plantele tratate; ii) dacă este cazul, efectele asupra larvelor de albine, asupra comportamentului albinelor și asupra supraviețuirii și dezvoltării coloniei după utilizarea produsului de uz fitosanitar în condițiile propuse. 2.5.2.4. Statele membre estimează posibilitatea expunerii artropodelor utile altele decât albina comună la produsul de uz fitosanitar
jrc3350as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88508_a_89295]