10,924 matches
-
tratarea celulelor, substanța de testare fie poate fi preparată în mediul de cultură, fie poate fi dizolvată sau suspensionate într-un excipient corespunzător. Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
celule supraviețuitoare. Eficiența de clonare și cea de supraviețuire se exprimă ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și cea de supraviețuire se exprimă ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și subculturile și schemele de alimentare), durata
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și subculturile și schemele de alimentare), durata tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem de activare metabolică la mamifere folosit, martorii pozitivi și negativi, tipul de agent selectiv folosit, - argumentarea alegerii dozelor, - metoda folosită pentru exprimarea numărului de celule viabile și mutante, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și eliminarea unui fragment de ADN care conține regiunea alterată de agenți chimici și fizici. Testul se bazează pe încorporarea timidinei marcate cu tritiu (timidină tritiată) (3H-TdR) în ADN-ul celulelor mamifere care nu sunt în faza S a ciclului celular. Încorporarea 3H-TdR se poate determina prin autoradiografiere sau prin LSC (liquid scintillation counting) ADN-ului din celulele tratate. Cu excepția cazului când se folosesc hepatocite de șobolan, culturile de celule de mamifere se tratează cu agentul testat cu și fără un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
testați până la limita superioară a solubilității. Pentru substanțele netoxice, foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Celule Mediile de creștere, concentrația CO2, temperatura și umiditatea adecvate sunt necesare pentru menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
creștere, concentrația CO2, temperatura și umiditatea adecvate sunt necesare pentru menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu o densitate corespunzătoare în vase de cultură și incubate la 37 C. Culturile pe termen scurt de hepatocite de șobolan se obțin permițând hepatocitelor proaspăt disociate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
mediu ce conține 3H-TdR o perioadă de timp corespunzătoare. La sfârșitul perioadei de tratament, celulele trebuie filtrate, spălate, fixate și uscate. Lamele trebuie introduse în emulsia autoradiografică (alternativ, poate fi folosit un film fotografic), expuse, developate, colorate și numărate. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele Tehnica de autoradiografiere: Culturile celulare se tratează cu substanța de testare o perioadă de timp corespunzătoare, apoi se tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
La sfârșitul perioadei de tratament, celulele trebuie filtrate, spălate, fixate și uscate. Lamele trebuie introduse în emulsia autoradiografică (alternativ, poate fi folosit un film fotografic), expuse, developate, colorate și numărate. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele Tehnica de autoradiografiere: Culturile celulare se tratează cu substanța de testare o perioadă de timp corespunzătoare, apoi se tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. 2.1. Determinările autoradiografice Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și numărul de granulații găsite în nucleii celulari trebuie să fie înregistrate separat. Pentru descrierea distribuției cantității de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și numărul de granulații per nucleu se vor folosi media, mediana și modul șirului. 2.2. Tehnica LSC În tehnica LSC, 3H-TdR încorporată trebuie raportată folosind
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se poate folosi media dpm/ g ADN cu deviația standard. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, densitatea și numărul de pasaje celulare în momentul tratamentului, numărul de culturi celulare, - metodele folosite pentru menținerea culturilor, inclusiv compoziția mediului, temperatura și concentrația CO2, - substanța de testare, excipientul folosit, concentrațiile și motivația alegerii acestor concentrații folosite în experiment, - informații despre sistemul de activare metabolică, - schema
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cu deviația standard. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, densitatea și numărul de pasaje celulare în momentul tratamentului, numărul de culturi celulare, - metodele folosite pentru menținerea culturilor, inclusiv compoziția mediului, temperatura și concentrația CO2, - substanța de testare, excipientul folosit, concentrațiile și motivația alegerii acestor concentrații folosite în experiment, - informații despre sistemul de activare metabolică, - schema de tratament, - martorii pozitivi și negativi, - tehnica
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
refacerea ADN-ului, însă datele existente despre bazele moleculare ale procesului sunt limitate. Detectarea SCE necesită câteva mijloace de marcare diferențiată a cromatidelor surori, rezultat ce poate fi obținut prin încorporarea bromodeoxiuridinei (BrdU) în ADN-ul cromozomial pentru două cicluri celulare. Celulele de mamifere sunt tratate in vitro cu substanța de testare cu și fără un sistem exogen de activare metabolică la mamifere, dacă este cazul, apoi sunt cultivate pe o perioadă de două cicluri de replicare într-un mediu ce
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
colchicină) pentru oprirea celulelor în stadiul de metafază al mitozei (c-metafaza), celulele sunt prelevate și se efectuează preparatele cromozomiale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Pentru acest test se pot folosi culturi celulare primare (limfocite umane) sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, celule ovariene de hamster chinezesc). Liniile celulare trebuie verificate pentru a decela contaminarea cu Mycoplasma. * Trebuie folosite medii de cultură și condiții de incubare (de exemplu temperatură, vase de cultură
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
efectuează preparatele cromozomiale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Pentru acest test se pot folosi culturi celulare primare (limfocite umane) sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, celule ovariene de hamster chinezesc). Liniile celulare trebuie verificate pentru a decela contaminarea cu Mycoplasma. * Trebuie folosite medii de cultură și condiții de incubare (de exemplu temperatură, vase de cultură, concentrația CO2 și umiditate) corespunzătoare. * Substanțele testate pot fi preparate în mediul de cultură sau dizolvate sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și umiditate) corespunzătoare. * Substanțele testate pot fi preparate în mediul de cultură sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat înainte de începerea tratamentului celulelor. Concentrația finală de excipient în mediul de cultură nu trebuie să afecteze în mod semnificativ viabilitatea celulară sau rata de creștere, iar efectele asupra frecvenței SCE trebuie monitorizate printr-un solvent martor. Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Alternativ, dacă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații de expunere Se vor folosi cel puțin trei concentrații ale substanței de testare, spațiate în mod adecvat. Concentrația maximă trebuie să producă un efect toxic semnificativ, permițând totuși producerea unei replicări celulare corespunzătoare. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita superioară a solubilității prin metode adecvate. Pentru substanțele netoxice foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
corespunzătoare. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita superioară a solubilității prin metode adecvate. Pentru substanțele netoxice foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturile de rezervă (de exemplu, prin tripsinizare sau prin descuamare), cultivate în vase de cultură cu o densitate corespunzătoare și incubate la 37 C. Pentru culturile unistratificate, numărul de celule pe cultură trebuie ajustat astfel încât
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]