186 matches
-
au fost aprobate de autoritatea competentă. METODA PLĂCII DE GELOZĂ Pentru metoda plăcii de geloză se folosesc vase de plastic cu capac (diametrul intern 5,0 cm) pline cu plăci de geloză (în conformitate cu ISO, versiunea actuală) și vase umplute cu geloză de glucoză biliară roșu-violet (geloză VRBG în conformitate cu ISO, versiunea actuală), care se presează pe fiecare zonă de eșantionare și apoi de incubează. Suprafața de contact a fiecărei plăci este de 20 cm2. După preparare, geloza are o durată de viață
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
competentă. METODA PLĂCII DE GELOZĂ Pentru metoda plăcii de geloză se folosesc vase de plastic cu capac (diametrul intern 5,0 cm) pline cu plăci de geloză (în conformitate cu ISO, versiunea actuală) și vase umplute cu geloză de glucoză biliară roșu-violet (geloză VRBG în conformitate cu ISO, versiunea actuală), care se presează pe fiecare zonă de eșantionare și apoi de incubează. Suprafața de contact a fiecărei plăci este de 20 cm2. După preparare, geloza are o durată de viață la depozitare de aproximativ trei
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
actuală) și vase umplute cu geloză de glucoză biliară roșu-violet (geloză VRBG în conformitate cu ISO, versiunea actuală), care se presează pe fiecare zonă de eșantionare și apoi de incubează. Suprafața de contact a fiecărei plăci este de 20 cm2. După preparare, geloza are o durată de viață la depozitare de aproximativ trei luni, dacă este păstrată la temperaturi între 2 și 4 oC în flacoane închise. Imediat înainte de prepararea plăcilor, geloza respectivă trebuie topită la 100 oC și răcită până la 46-48 oC.
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
de contact a fiecărei plăci este de 20 cm2. După preparare, geloza are o durată de viață la depozitare de aproximativ trei luni, dacă este păstrată la temperaturi între 2 și 4 oC în flacoane închise. Imediat înainte de prepararea plăcilor, geloza respectivă trebuie topită la 100 oC și răcită până la 46-48 oC. Plăcile trebuie puse într-o cabină cu flux de aer laminar și trebuie umplute cu geloză până se obține o suprafață convexă. Plăcile preparate trebuie uscate înainte de utilizare prin
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
temperaturi între 2 și 4 oC în flacoane închise. Imediat înainte de prepararea plăcilor, geloza respectivă trebuie topită la 100 oC și răcită până la 46-48 oC. Plăcile trebuie puse într-o cabină cu flux de aer laminar și trebuie umplute cu geloză până se obține o suprafață convexă. Plăcile preparate trebuie uscate înainte de utilizare prin incubare peste noapte la 37 oC, în poziție inversă. Aceasta este de asemenea o verificare utilă pentru posibile contaminări pe perioada preparării: plăcile cu colonii vizibile trebuie
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
2-4 oC, dacă sunt sigilate în pungi de plastic. TEHNICA TAMPOANELOR Eșantioanele trebuie prelevate cu tampoane de bumbac umezite cu 1 ml de soluție de NaCl peptonă 0,1% (8,5 g NaCl, 1 g caseină - peptonă tripsină, 0,1% geloză și 1 000 ml apă distilată) de pe o suprafață preferabil de 20 cm2 marcată cu șablon steril. Dacă eșantionarea se face după curățare și dezinfectare, trebuie adăugată la soluția de umezire a tampoanelor o cantitate de 30g/l de Tween
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
suficiente. Tampoanele trebuie ținute cu un forceps steril și suprafața eșantionată trebuie tamponată de 10 ori de sus în jos apăsând puternic pe suprafață. Tampoanele trebuie colectate într-un flacon conținând 40 ml de peptonă tamponată cu soluție salină de geloză 0,1%. Tampoanele eșantion trebuie refrigerate la 4 oC până la procesări ulterioare. Flaconul trebuie scuturat viguros înainte de diluția în etape de câte 10 pași în 40 ml de soluție NaCl peptonă 0,1%, urmată de examinarea microbiologică (ex. tehnica de
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
sau înainte de incubare. Tampoanele eșantion trebuie refrigerate la 4 oC până la procesări ulterioare. PROCEDURI BACTERIOLOGICE În plus față de descrierea făcută, pot fi utilizate metode ISO. Numărările bacteriologice ar trebui raportate în funcție de numărul de organisme pe cm2 de suprafață. Plăcile de geloză de numărare inoculate și plăcile de geloză de contact trebuie incubate timp de 24 de ore la 37 oC ± 1 oC în condiții aerobe pentru numărarea tuturor coloniilor (TNV). Această procedură trebuie să aibă loc în termen de două ore
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
la 4 oC până la procesări ulterioare. PROCEDURI BACTERIOLOGICE În plus față de descrierea făcută, pot fi utilizate metode ISO. Numărările bacteriologice ar trebui raportate în funcție de numărul de organisme pe cm2 de suprafață. Plăcile de geloză de numărare inoculate și plăcile de geloză de contact trebuie incubate timp de 24 de ore la 37 oC ± 1 oC în condiții aerobe pentru numărarea tuturor coloniilor (TNV). Această procedură trebuie să aibă loc în termen de două ore de la eșantionare. Ar trebui numărat și înregistrat
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
oC ± 1 oC în condiții aerobe pentru numărarea tuturor coloniilor (TNV). Această procedură trebuie să aibă loc în termen de două ore de la eșantionare. Ar trebui numărat și înregistrat numărul de colonii bacteriene. Pentru estimarea cantitativă a enterobacteriilor trebuie utilizată geloza VRBG. Incubarea plăcilor inoculate și plăcile de geloză de contact trebuie să înceapă în termen de două ore de la eșantionare în condiții aerobe. După o incubare de 24 de ore la 37 oC ± 1 oC, plăcile trebuie examinate pentru a
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
tuturor coloniilor (TNV). Această procedură trebuie să aibă loc în termen de două ore de la eșantionare. Ar trebui numărat și înregistrat numărul de colonii bacteriene. Pentru estimarea cantitativă a enterobacteriilor trebuie utilizată geloza VRBG. Incubarea plăcilor inoculate și plăcile de geloză de contact trebuie să înceapă în termen de două ore de la eșantionare în condiții aerobe. După o incubare de 24 de ore la 37 oC ± 1 oC, plăcile trebuie examinate pentru a urmări creșterea enterobacteriilor. Analiza trebuie efectuată pentru toate
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
transport, șorțuri, mese de tranșare, uși batante dacă sunt atinse de carcase în trecere, tobogane pentru organe de uz alimentar, părți din lanț atinse frecvent de carcase, structuri aeriene de pe care poate picura umezeală etc. CALCULAREA REZULTATELOR Pentru plăcile de geloză de contact, pentru TNV și pentru numărările de enterobacterii din testele cu tampoane, rezultatele trebuie menționate într-un formular de înregistrare. În scopul verificărilor desfășurării proceselor de curățare și dezinfecție au fost stabilite doar două categorii pentru TNV și enterobacterii
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
rezultatele trebuie menționate într-un formular de înregistrare. În scopul verificărilor desfășurării proceselor de curățare și dezinfecție au fost stabilite doar două categorii pentru TNV și enterobacterii: acceptabil și inacceptabil. Valorile acceptabile pentru numărul de colonii de pe o placă de geloză de contact și numărul de colonii pentru TNC și enterobacterii (rezultate din teste pe tampoane) sunt menționate în tabelul 2. Tabelul 2: Valorile medii pentru numărul de colonii pentru testarea suprafețelor Valori acceptabile Inacceptabile Total numărări viabile (TNV) 0-10/cm2
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
seminal; 13.3.6. au fost supuși următoarelor teste în materie de sănătate animală, într-un laborator aprobat de autoritatea competentă, în conformitate cu un program de control conform pct. 13.3.7: 13.3.6.1. un test de imunodifuzie în geloză (testul Coggins) pentru depistarea anemiei infecțioase ecvine, cu rezultat negativ; 13.3.6.2 un test de seroneutralizare pentru depistarea arteritei virale ecvine, cu rezultat negativ la diluția de 1 la 4 sau un test de izolare a virusului pentru
jrc2679as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87833_a_88620]
-
99 și USDA 1119 sau orice altă sușă cu sensibilitate echivalentă. 7. Mediile de cultură utilizate pentru păstrarea sușei în laborator și pentru producerea de antigene nu trebuie să favorizeze disocierea bacteriană (S minus R); este preferabil să se folosească geloză de cartof. 8. Emulsia bacteriană se prepară din ser fiziologic (NaCl 8,5‰) fenolizat la 5%. Nu se utilizează formol. 9. Institutele de stat menționate în cele ce urmează sunt responsabile cu testarea oficială a antigenelor: (a) Germania: Bundesgesundheitsamt, Berlin
jrc29as1966 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85161_a_85948]
-
să fie negativ. (b) Dacă examenul bacteriologic este negativ, iar TWS (sau TCM) este pozitiv, se efectuează un test citologic complet care trebuie să fie negativ. 4. Examenul bacteriologic trebuie să cuprindă: (a) așezarea laptelui într-o cutie Petri în geloză din sânge de bovine sau ovine; (b) așezarea laptelui în mediu TKT sau în mediu Edwards. Examenul bacteriologic are rolul de a identifica toți germenii patogeni și nu trebuie să se limiteze la detectarea streptococilor sau stafilococilor patogeni specifici. Din
jrc29as1966 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85161_a_85948]
-
referință pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf cu acelea ale substanțelor standard, fie prin fluorescență în lumină UV (conținut ridicat de antibiotice) sau prin bioautografie într-un mediu de geloză inoculat cu B cereus. 3. Reactivi și mediul de cultură 3.1 Soluție tampon, pH 3,5 Acid citric monohidrat A.R. 10,256 g Difosfat de sodiu Na2HPO4 ·2H2O A.R. 7,45 g Acetonă A.R. 300 ml
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
B cereus ATTC nr. 11.778 Menținerea sușei părinte, prepararea suspensiei sporilor și inocularea mediului de cultură: se urmăresc instrucțiunile date la pct. 3.1 și 3.2 ale metodei pentru determinarea conținutului de Clorotetraciclină, oxitetraciclină, tetraciclină prin difuziune prin geloză care este descrisă în partea 2 a prezentei anexe. 3.10 Mediul de cultură 1 Glucoză 1 g Peptonă triptică 10 g Extras din carne 1,5 g Extras din drojdie 3 g Geloză 20 g Apă distilată la 1
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
Clorotetraciclină, oxitetraciclină, tetraciclină prin difuziune prin geloză care este descrisă în partea 2 a prezentei anexe. 3.10 Mediul de cultură 1 Glucoză 1 g Peptonă triptică 10 g Extras din carne 1,5 g Extras din drojdie 3 g Geloză 20 g Apă distilată la 1 000 ml Se ajustează pH-ul la 5,8 imediat înaintea folosirii. 3.11 Soluție de 0,1 % (g / v) clorură de 2,3,5-trifeniltetrazoliu și soluție 5 % (g / v) de glucoză. 4. Aparate
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
60 Tetraciclină(TC) 0,40 Oxitetraciclină(OTC) 0,20 4-epi-CTC 0,15 4-epi-TC 0,13 4-epi-OTC 0,10 Activitatea antibiotică a compușilor "epi" este mai mică decât cea a compușilor normali. DETERMINAREA CLOROTETRACICLINEI, OXITETRACICLINEI ȘI TETRACICLINEI A. PRIN DIFUZIUNE ÎN GELOZĂ 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă determinarea nivelelor de Clorotetraciclină (CTC), oxitetraciclină (OTC) și tetraciclină (TC) din furaje, concentrate și preamestecuri în care se găsesc mai mult de 5 ppm. Conținuturile mai mici de 5 ppm
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
clorhidric, pentru determinarea CTC, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și a TC. Extrasele sunt apoi diluate și activitatea antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteria din tubul de geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de geloză cu el la fiecare 14 zile. 3.2 Prepararea suspensiei de spori Se colectează bacteria din tubul de geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1), fără metilen albastru și acid boric, cu 3 - 4 % concentrație de geloză
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
geloză (3.1) folosind 2 - 3 ml de salină fiziologică (4.5). Cu această suspensie, se însămânțează un balon Roux conținând 300 ml de mediu de cultură (4.1), fără metilen albastru și acid boric, cu 3 - 4 % concentrație de geloză. Se incubează 3 - 5 zile la 28 - 30ș C, apoi se colectează sporii în 15 ml de etanol (4.6) după verificarea sporulației la microscop si se omogenizează. Această suspensie se păstrează în frigider timp de cel puțin 5 luni
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]