1,083 matches
-
infectate sunt acoperite cu un mediu adecvat care conține 1% m/v agar și fie 0,01 mg/ml tripsină, fie nu conține tripsină. Este important să nu se adauge ser la mediul suprapus. 5. După 72 de ore de incubare la 37 C, plăcile vor avea mărimea suficientă. Ele se pot observa cel mai bine prin îndepărtarea stratului de agar și prin îmbibarea monostratului de celule cu cristale violete (0,5 % m/v) în 25% v/v etanol. 6. Toate
jrc1919as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87069_a_87856]
-
de celule primare, inclusiv celule umane (de ex. celule de hamster chinezesc, limfocite din sângele periferic uman sau al altor mamifere). 1.4.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea mediilor de cultură și a condițiilor de incubare (vasele de cultură, concentrația CO2, temperatura și umiditatea) corespunzătoare pentru dezvoltarea culturilor. Se impune controlul regulat al liniilor și sușelor celulare, pentru verificarea stabilității numărului modal de cromozomi și a absenței contaminării cu micoplasmă și, dacă se constată contaminarea, celulele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația de CO2, dacă este cazul, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și numărului de culturi, inclusiv datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația de CO2, dacă este cazul, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate, - metodele de măsurare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și se depun imediat pe un mediu minimal. În procedeul cu preincubare, amestecul de tratare se incubează și apoi se amestecă cu geloza de acoperire înaintea depunerii pe un mediu minim. Pentru ambele metode, după două sau trei zile de incubare, coloniile care produc inversarea se numără și numărul obținut se compară cu cel al coloniilor spontane de inversare aflate pe plăci cu martor tratate cu solvent. Sunt descrise câteva proceduri pentru realizarea testului bacterian de mutație inversă. Printre cele utilizate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
lanț scurt, metale bivalente, aldehide, coloranți azoici și diazoderivații, alcaloizi ai pirolizidinei, compuși alchilici și nitroderivați (3). De asemenea, se admite că unele clase de mutageni nu se detectează întotdeauna prin procedee standard, ca încorporarea prin depunere sau procedeul cu incubare. Ar trebui să se considere că acestea sunt "cazuri izolate" și se recomandă cu tărie utilizarea unor procedee alternative pentru detectarea lor. Din categoria "cazuri izolate" este posibilă identificarea (împreună cu exemple de procedeele care se pot utiliza pentru detectarea acestora
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să se utilizeze culturi cu titru mare de bacterii viabile. Titrul se poate determina, fie plecând de la datele anterioare privind curbele de creștere ale culturilor martor, fie pentru fiecare test, prin determinarea numărului de celule viabile prin etalare. Temperatura de incubare recomandată este de 37oC. Se recomandă utilizarea a minimum cinci sușe de bacterii. Acestea ar trebui să includă patru sușe de S. typhimurium (TA 1535; TA 1537 sau TA97a sau TA97; TA98 și TA100) pentru care comparațiile între laboratoare au
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de geloză de acoperire, bacterii și substanța de testat/soluția de testat. Conținutul din fiecare eprubetă se agită și se toarnă pe suprafața unui mediu minimal de geloză depus pe placă. Geloza de acoperire se lasă să se solidifice înainte de incubare. Pentru metoda de preincubare (2) (3) (5) (6), substanța de testat/soluția de testat se supune la preincubare împreună cu sușa experimentală (ce conține aproximativ 108 celule viabile) și cu tamponul steril sau sistemul de activare metabolică (0,5 ml) de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
lucru. Pierderea ocazională a unei plăci nu invalidează în mod necesar testul. Substanțele în stare gazoasă sau cele volatile ar trebui să fie testate în condiții corespunzătoare, de ex. în vase închise ermetic (12) (14) (15) (16). 1.5.4. Incubarea Toată plăcile dintr-un test dat ar trebui să fie incubate la 37oC timp de 48-72 de ore. După incubare, se procedează la numărătoarea coloniilor care provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
trebui să fie testate în condiții corespunzătoare, de ex. în vase închise ermetic (12) (14) (15) (16). 1.5.4. Incubarea Toată plăcile dintr-un test dat ar trebui să fie incubate la 37oC timp de 48-72 de ore. După incubare, se procedează la numărătoarea coloniilor care provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia de pe fiecare placă. De asemenea, ar trebui să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
mutanților se determină prin însămânțarea unui număr cunoscut de celule într-un mediu ce conține agentul selectiv pentru a detecta celulele mutante și într-un mediu fără agent selectiv pentru a determina eficacitatea clonării (viabilitatea). După un timp corespunzător de incubare, se numără coloniile. Frecvența mutantului se determină prin compararea numărului de colonii de mutanți în mediul selectiv cu numărul de colonii în mediul neselectiv. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Celulele Există
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Pentru a asigura o performanță constantă a testului, ar trebui să se dispună de date anterioare specifice privind sistemul celular utilizat. 1.4.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea mediilor de cultură și a condițiilor de incubare (vasele de cultură, temperatura, concentrația CO2, și umiditatea) corespunzătoare. Alegerea mediilor ar trebui să se facă în funcție de sistemele selective și de tipul celulelor utilizate în test. O importanță deosebită o prezintă alegerea condițiilor de cultură, astfel încât să asigure creșterea optimă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de testare: - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv, de ex. datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația CO2, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară în timpul tratamentului, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - timpul de manifestare (inclusiv numărul de celule însămânțate și reînsămânțate, programele de alimentare, dacă este cazul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv, de ex. datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația CO2, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară în timpul tratamentului, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - timpul de manifestare (inclusiv numărul de celule însămânțate și reînsămânțate, programele de alimentare, dacă este cazul), - agenții selectivi, - criteriile
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
celulele hepatice proaspăt disociate să se fixeze pe o suprafață corespunzătoare. Celulele hepatice de la animale martori negativi ar trebui să aibă o viabilitate (5) de minimum 50%. 1.5.7. Determinarea UDS Celulele hepatice proaspăt izolate se supun în general incubării într-un mediu, ce conține 3H-TdR, pentru o perioadă de timp corespunzătoare, de ex. trei până la opt ore. La încheierea perioadei de incubare, ar trebui ca mediul să fie îndepărtat de pe celule, care pot să fie incubate apoi într-un
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
5) de minimum 50%. 1.5.7. Determinarea UDS Celulele hepatice proaspăt izolate se supun în general incubării într-un mediu, ce conține 3H-TdR, pentru o perioadă de timp corespunzătoare, de ex. trei până la opt ore. La încheierea perioadei de incubare, ar trebui ca mediul să fie îndepărtat de pe celule, care pot să fie incubate apoi într-un mediu, ce conține timidină nemarcată în exces, pentru diminuarea radioactivității neîncorporate ("cold chase"). Celulele sunt apoi spălate, fixate și uscate. Pentru perioade de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ar trebui ca mediul să fie îndepărtat de pe celule, care pot să fie incubate apoi într-un mediu, ce conține timidină nemarcată în exces, pentru diminuarea radioactivității neîncorporate ("cold chase"). Celulele sunt apoi spălate, fixate și uscate. Pentru perioade de incubare mai lungi, s-ar putea ca procedeul "cold chase" să nu fie necesar. Lamelele sunt imersate în soluție autoradiografică, păstrate la întuneric (de ex. refrigerate timp de 7-14 zile), developate, colorate și apoi se procedează la numărarea grăunților de argint
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
economic local, regional, național și internațional, prin utilizarea mai eficientă a potențialului economic și uman existent în zonă; ... g) înființarea și dezvoltarea de IMM-uri inovative, capabile să utilizeze în mod eficient resursele existente și care, la finalul perioadei de incubare, se vor afla într-o situație stabilă din punct de vedere financiar; ... h) crearea unei relații eficiente între potențialul tehnologic și antreprenorial al zonelor-țintă; ... i) dezvoltarea unei infrastructuri de afaceri capabile să facă față presiunilor concurențiale; ... j) favorizarea accesului IMM
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
fiecărei noi locații care va fi inclusă în Program cu destinația de incubator de afaceri este de maximum 500.000 lei și de maximum 200.000 lei pentru reabilitarea/renovarea și reamenajarea clădirii incubatorului la începutul fiecărui nou ciclu de incubare. 2.5. Prin Program sunt alocate fonduri pentru achiziționarea de echipament IT amp;C și mobilier pentru utilarea fiecărui nou incubator, în limita maximă de 150.000 lei. La sfârșitul fiecărui ciclu de incubare, dacă uzura morală și fizică a
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
la începutul fiecărui nou ciclu de incubare. 2.5. Prin Program sunt alocate fonduri pentru achiziționarea de echipament IT amp;C și mobilier pentru utilarea fiecărui nou incubator, în limita maximă de 150.000 lei. La sfârșitul fiecărui ciclu de incubare, dacă uzura morală și fizică a echipamentelor IT le face inutilizabile, la solicitarea Administratorului de Incubator cu aprobarea PNUD și cu avizul AIPPIMM se pot înlocui respectivele echipamente. Achiziționarea echipamentelor IT amp;C și a mobilierului se va face de către
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
AIPPIMM se pot înlocui respectivele echipamente. Achiziționarea echipamentelor IT amp;C și a mobilierului se va face de către PNUD, conform procedurilor proprii. 2.6. Prin Program se pot aloca fonduri în valoare de maxim 6.000 lei/ciclu 1 de incubare pentru proiectarea și găzduirea unui site web propriu al Incubatorului în care să se prezinte activitatea acestuia, firmele incubate și activitatea lor și 2.000 lei ciclu 2 de incubare pentru îmbunătățirea/dezvoltarea site-ului existent. Alocarea acestor fonduri se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
în valoare de maxim 6.000 lei/ciclu 1 de incubare pentru proiectarea și găzduirea unui site web propriu al Incubatorului în care să se prezinte activitatea acestuia, firmele incubate și activitatea lor și 2.000 lei ciclu 2 de incubare pentru îmbunătățirea/dezvoltarea site-ului existent. Alocarea acestor fonduri se va face la cererea Administratorului de Incubator, cu aprobarea PNUD. 2.7. Fondurile destinate Programului distribuite cu titlu de alocații financiare nerambursabile sunt: a) alocații financiare nerambursabile oferite fiecărei firme
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
sisteme de protecție a valorilor umane și materiale, aparate și instalații de măsurare, control și reglare în directă legătură cu activitățile codului CAEN principal de activitate; ... b) alocații financiare nerambursabile oferite fiecărei firme incubate, o singură dată pe parcursul perioadei de incubare în valoare de maxim 5.000 lei pentru servicii de consultanță specializată, la cererea firmei, înaintată de către Administrator PNUD-ului; sumele vor fi alocate numai după efectuarea serviciilor și emiterea facturii; ... c) alocații financiare nerambursabile oferite firmelor incubate pentru rambursarea
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
suplimentare destinate beneficiarilor Programului, pentru cofinanțarea unor activități precum: participarea la cursuri, târguri, expoziții, conferințe, activități de promovare, dar nu mai mult de 70% din costul produsului/serviciului achiziționat și nu mai mult de 9.000 lei beneficiar/ciclu de incubare. Firmele incubate vor dovedi printr-un memoriu justificativ necesitatea fondurilor suplimentare, precum și relevanța activităților și a achizițiilor respective pentru dezvoltarea afacerilor lor. ... 2.7.1. Alocarea sumelor prevăzute la punctul 2.7. punctele a), b) c) și d) se poate
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]
-
utilizării alocațiilor financiare nerambursabile în maxim 45 de zile calendaristice de la momentul alocăii acestora de care Administrator. 2.8. Prin Program sunt alocate fonduri pentru plata serviciilor Administratorului Incubatorului de Afaceri în valoare de maxim 190.000 lei/ciclu de incubare, și în plus, 9.000 lei/an, pentru organizarea de evenimente, așa cum sunt ele prevăzute în documentele specificate la punctul 4.1.2.1. lit. g). 2.9. La cererea Administratorilor de Incubatoare, prin Program, se pot aloca cu aprobarea
EUR-Lex () [Corola-website/Law/247112_a_248441]