3,879 matches
-
vizuale oficiale sau avizate oficial prin tăierea tuberculilor, și - în cazul cartofilor de sămânță și, dacă este cazul, pentru alte tipuri de cartofi o testare de laborator oficială sau avizată oficial utilizând metoda stabilită în anexa II, (ii) în cazul tomatelor, - inspecție vizuală, în perioade corespunzătoare, cel puțin a culturii în creștere de plante destinate replantării în scop profesional. 2. Notificarea anchetelor oficiale prevăzute în art. 2 alin. (3) include: (i) în cazul anchetelor asupra cartofilor, - suprafața totală estimată cultivată, în
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
pe regiune, - numărul și perioada de prelevare a eșantioanelor luate pentru testare, - numărul inspecțiilor vizuale de pe teren, - numărul (și dimensiunea eșantionului) de inspecții vizuale asupra tuberculilor; (ii) în cazul anchetelor asupra cel puțin a culturii în creștere de plante de tomate destinate replantării în scop profesional, - numărul total estimat de plante, - numărul inspecțiilor vizuale; (iii) în cazul anchetelor asupra plantelor gazdă, altele decât cartofi și tomate, inclusiv plante gazdă solanacee sălbatice, - specie, - numărul și perioada eșantioanelor prelevate, - zona/râul eșantionat, dacă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
tuberculilor; (ii) în cazul anchetelor asupra cel puțin a culturii în creștere de plante de tomate destinate replantării în scop profesional, - numărul total estimat de plante, - numărul inspecțiilor vizuale; (iii) în cazul anchetelor asupra plantelor gazdă, altele decât cartofi și tomate, inclusiv plante gazdă solanacee sălbatice, - specie, - numărul și perioada eșantioanelor prelevate, - zona/râul eșantionat, dacă este cazul, - metoda de analiză; (iv) în cazul anchetelor asupra apei și deșeurilor lichide deversate din instalațiile de prelucrare industrială sau de ambalare, - numărul și
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM (SMITH) YABUUCHI ET AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof.........................................................................17 1. Pregătirea eșantionului pentru
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
testul PCR..............................................................................29 Apendicele 7 Materiale pentru test(ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă, izolarea agentului
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă, izolarea agentului patogen din țesutul vascular infectat pe mediile de diagnosticare și, în cazul unui rezultat pozitiv, identificarea culturii ca fiind Ralstonia solanacearum. Referințe la diagramă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ca metode unice de detectare. 8 Testul de probă biologică Testul de probă biologică este folosit pentru izolarea Ralstonia solanacearum din extractele finale de cartof prin îmbogățire selectivă într-o plantă gazdă și nu poate fi făcut pe plante de tomate sau vinete. Testul solicită condiții optime de incubare specificate în prezenta metodă. Bacteriile inhibitoare ale Ralstonia solanacearum în mediul SMSA probabil că nu vor interfera cu acest test. 9 Test(e) de confirmare Identificarea sigură a unei culturi pure de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
1., în combinație cu un test al patogenicității (secțiunea II.4.3.). Caracterizarea sușelor este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. SECȚIUNEA II Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată 1. Simptome 1.1 Simptome la cartof Planta de cartof. Stadiul incipient al infecției este reprezentat de ofilirea frunzelor înspre vârful plantei în timpul temperaturilor diurne ridicate și de revenirea în timpul nopții. Ofilirea devine repede ireversibilă și duce la moartea plantei
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
parenchimatos. În stadii avansate, infecția izbucnește în exterior de la talon și de la ochi și poate duce la leziuni de culoare brun-roșcat ușor adâncite ale cojii din care se pot scurge bacteriile determinând aderarea particulelor de sol. 1.2 Simptome la tomate Planta de tomată. Primul simptom vizibil este aspectul slăbit al frunzelor tinere. În condiții favorabile de mediu pentru agentul patogen (temperatura solului circa 25° C, umiditate saturată) epinastia și ofilirea unei părți sau a întregii plante se produce în câteva
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
avansate, infecția izbucnește în exterior de la talon și de la ochi și poate duce la leziuni de culoare brun-roșcat ușor adâncite ale cojii din care se pot scurge bacteriile determinând aderarea particulelor de sol. 1.2 Simptome la tomate Planta de tomată. Primul simptom vizibil este aspectul slăbit al frunzelor tinere. În condiții favorabile de mediu pentru agentul patogen (temperatura solului circa 25° C, umiditate saturată) epinastia și ofilirea unei părți sau a întregii plante se produce în câteva zile și duce
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
o scurgere bacteriană albă sau gălbuie. 2. Teste de triere rapidă Testele de triere rapidă ușurează diagnosticul prezumtiv. Folosiți unul sau mai multe dintre următoarele teste: Testul de exsudație a tulpinii Prezența Ralstonia solanacearum în tulpini ofilite de cartof sau tomate poate fi evaluată prin următorul test prezumtiv simplu: Se taie tulpina chiar deasupra nivelului solului. Se pune suprafața tăiată într-un pahar cu apă. Imediat după aceea, fire de exudat bacteriană curg spontan din fasciculele vasculare. Nici o altă bacterie care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
prezumtiv simplu: Se taie tulpina chiar deasupra nivelului solului. Se pune suprafața tăiată într-un pahar cu apă. Imediat după aceea, fire de exudat bacteriană curg spontan din fasciculele vasculare. Nici o altă bacterie care produce infecții vasculare la cartofi sau tomate nu va prezenta acest fenomen. Detectarea granulelor de poli-β-hidroxibutirat (PHB) Granulele de PHB din celulele de Ralstonia solanacearum sunt vizualizate prin colorarea cu albastru de Nil A sau cu negru de Sudan B. Se prepară un frotiu din scurgere sau
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
secțiunea III.3) și testul PCR (secțiunea III.4). 3. Procedura de izolare 3.1. Se îndepărtează scurgerea sau secțiunile de țesut decolorat din inelul vascular al tuberculului de cartof sau din căile vasculare ale tulpinii plantei de cartof sau tomată. Se pune în suspensie într-un volum mic de apă distilată sterilă sau un tampon fosfat de 50 mM. Se lasă 5 - 10 minute pe masă. 3.2. Se prepară o serie de diluții zecimale ale suspensiei, de exemplu 1
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Hayward, 1994): Utilizarea trehalozei Biovar 2 Biovar 2-A Biovar 2- T - + + Utilizarea inozitei + - + Utilizarea D- ribozei - - + Activitate pectolitică scăzută scăzută ridicată Determinarea rasei Rasa se poate determina (Buddenhagen et al., 1962) în baza testelor de patogenicitate la plantele de tomate sau la vinete și la plantele de tutun și printr-un test de reacție de hipersensibilitate (HR) la frunzele de tutun (Lozano și Sequeira, 1970): Rasă* 1 2 3 Reacția la: - plante de tomate/vinete ofilire nici o reacție Ofilire - plante
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
testelor de patogenicitate la plantele de tomate sau la vinete și la plantele de tutun și printr-un test de reacție de hipersensibilitate (HR) la frunzele de tutun (Lozano și Sequeira, 1970): Rasă* 1 2 3 Reacția la: - plante de tomate/vinete ofilire nici o reacție Ofilire - plante de tutun ofilire nici o reacție Nici o reacție - frunze de tutun necroză (48 de ore) și ofilire (7-8 zile) HR (12 - 24 ore) cloroză (2-8 zile) * rasa 4 (patogenă pentru ghimbir și alte câteva plante
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
pentru confirmarea diagnosticului de Ralstonia solanacearum și pentru evaluarea virulenței culturilor identificate ca fiind Ralstonia solanacearum. Se prepară un inocul de 106 celule pe ml din cultură și dintr-o sușă de control pozitiv. Se inoculează 5- 10 plante de tomată sau vinete, preferabil la nivelul celei de a treia frunze adevărate sau mai bătrâne (secțiunea III.6.). Se incubează până la două săptămâni la 22° C - 28° C și umiditate relativă mare, udând zilnic. Se observă ofilirea și/sau epinastia, cloroza
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
să fie găsite în controalele pozitive. Testul de placare selectivă este pozitiv dacă sunt izolate colonii caracteristice de Ralstonia solanacearum. 6. Testul de probă biologică În baza Janse, 1988. 6.1 Se utilizează până la 10 plante test de răsad de tomată sau de vinete în stadiul celei de a treia frunze adevărate pentru fiecare eșantion. Plantele de test nu se udă cu 24 de ore înaintea inoculării. 6.2 Se distribuie 100 μl de extract concentrat resuspendat între plantele de test
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de triere, de exemplu lamele de imunofluorescență, și - toată documentația relevantă, până la finalizarea respectivei metode. 2. În cazul confirmării organismului, ar trebui să se păstreze să și conserve în condiții corespunzătoare: - materialul prevăzut în alin. (1), și - un eșantion din tomata sau vânăta infectată inoculată cu extractul de plantă sau tubercul, dacă este cazul, și - cultura izolată a organismului, până cel puțin o lună după procedura de notificare prevăzută în art. 5 alin. (2). ANEXA IV Elementele din investigația prevăzută în
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
art. 5alin. alin. (1) lit. (a) pct. (i) includ, când sunt relevante: (i) locurile de producție - care cultivă sau au cultivat cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi depistați ca fiind infectați cu organismul, - care cultivă sau au cultivat tomate care sunt din aceeași sursă ca tomatele depistate ca fiind infectate cu organismul, - care cultivă sau au cultivat cartofi sau tomate care au fost puse sub control oficial datorită apariției suspectate a organismului, - care cultivă sau au cultivat cartofi care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
i) includ, când sunt relevante: (i) locurile de producție - care cultivă sau au cultivat cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi depistați ca fiind infectați cu organismul, - care cultivă sau au cultivat tomate care sunt din aceeași sursă ca tomatele depistate ca fiind infectate cu organismul, - care cultivă sau au cultivat cartofi sau tomate care au fost puse sub control oficial datorită apariției suspectate a organismului, - care cultivă sau au cultivat cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi depistați ca fiind infectați cu organismul, - care cultivă sau au cultivat tomate care sunt din aceeași sursă ca tomatele depistate ca fiind infectate cu organismul, - care cultivă sau au cultivat cartofi sau tomate care au fost puse sub control oficial datorită apariției suspectate a organismului, - care cultivă sau au cultivat cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi care au fost cultivați în locuri de producție depistate ca fiind infectate cu organismul, - care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
puse sub control oficial datorită apariției suspectate a organismului, - care cultivă sau au cultivat cartofi care sunt înrudiți prin clonare cu cartofi care au fost cultivați în locuri de producție depistate ca fiind infectate cu organismul, - care cultivă cartofi sau tomate și care sunt situate în vecinătatea unor locuri de producție infectate, inclusiv acele locuri care partajează echipamente de producție și facilități direct sau printr-un contractant comun, - care utilizează apă de suprafață pentru irigare sau stropire din orice sursă confirmată
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
și dezinfectarea acestor structuri sau obiecte, - ca rezultat al investigației și testării în conformitate cu art. 5 alin (1) lit. (a) pct. (ii), în cazul cartofilor, acei tuberculi sau plante cu o relație de rudenie clonală colaterală sau ascendentă, și în cazul tomatelor, acele plante cu aceeași sursă ca materialul vegetal enumerat desemnat ca fiind contaminat în conformitate cu art. 5 alin (1) lit. (a) pct. (ii) și pentru care apare ca probabilă contaminarea printr-o legătură clonală, deși rezultatele testării pot să fi fost
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]