20,025 matches
-
Protocolul prezentat în cele ce urmează se bazează pe Wullings et al. (1998). 5.1.1. Se prepară soluția de fixare (a se vedea apendicele 7). 5.1.2. Se introduc cu pipeta 100 μl din fiecare extract într-un tub Eppendorf și sunt centrifugați timp de 8 minute la 7 000 g. 5.1.3. Se elimină lichidul supernatant și se dizolvă extractul concentrat în 500 μl de fixativ preparat cu mai puțin de 24 de ore înainte. Se agită
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
metoda PCR validată, descrisă de apendicele 6. 6.1. (a) Metoda Pastrik (2000) 1. Se pun cu pipeta 220 μl de tampon de liză (100 mM NaCl, 10mM Tri-HCl [pH 8,0], 1 mM EDTA [pH 8,0] într-un tub Eppendorf de 1,5 ml. 2. Se adaugă 100 μl de extract de probă și se așază într-un bloc de încălzire sau într-o baie de aburi la 95 °C timp de zece minute. 3. Se așază tubul pe
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
un tub Eppendorf de 1,5 ml. 2. Se adaugă 100 μl de extract de probă și se așază într-un bloc de încălzire sau într-o baie de aburi la 95 °C timp de zece minute. 3. Se așază tubul pe gheață timp de cinci minute. 4. Se adaugă 80 μl de soluție concentrată de lizozimă (50 mg de lizozimă pe mililitru în 10 mM Tri HCl, pH 8,0) și se lasă la incubat la 37 °C timp de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se omogenizează bine prin agitare și se lasă la incubat la 65 °C timp de 30 de minute. 6. Se adaugă 100 μl de Easy DNA(r) soluție B (Invitrogen), se omogenizează bine prin agitare până când precipitatul circulă liber în tub, iar proba prezintă o viscozitate uniformă. 7. Se adaugă 500 μl de cloroform și se omogenizează prin agitare până când viscozitatea scade, iar amestecul devine omogen. 8. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute, la 4 °C
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
prin agitare până când viscozitatea scade, iar amestecul devine omogen. 8. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute, la 4 °C, pentru a separa fazele și a forma interfaza. 9. Se varsă faza superioară într-un alt tub Eppendorf. 10. Se adaugă 1 mililitru de etanol la 100 % (-20 °C), se omogenizează rapid prin agitare și se lasă la incubat pe gheață timp de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se elimină etanolul din extractul concentrat. 12. Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (-20 ° C) și se amestecă, răsturnând tubul. 13. Se centrifughează la 15 000 g timp de 10 minute la 4 °C, se conservă extractul concentrat și se elimină etanolul. 14. Se lasă să se usuce extractul în aer liber sau într-un Speed Vac de ADN. 15
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
contaminare, în conformitate cu protocoalele publicate (a se vedea apendicele 6). Protocolul PCR validat este o reacție multiplex care include și un control PCR intern. 6.2.3. Se adaugă 5 μl de extract de ADN la 25 μl reactiv PCR, în tuburi PCR sterile. 6.2.4. Se constituie o probă martor negativ care nu conține decât amestecul reactiv pentru PCR și se adaugă în locul probei o apă pură provenind din aceeași sursă ca și cea utilizată în amestecul PCR. 6.2
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
2.4. Se constituie o probă martor negativ care nu conține decât amestecul reactiv pentru PCR și se adaugă în locul probei o apă pură provenind din aceeași sursă ca și cea utilizată în amestecul PCR. 6.2.5. Se așază tuburile în același termociclu folosit la testul preliminar și se lansează programul PCR optimizat în mod corespunzător (a se vedea apendicele 6). 6.3. Analiza produsului reacției PCR 6.3.1. Se decodează amplimerii prin electroforeză pe gel de agaroză. O
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
martorul pozitiv. 9.3. Test PCR (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru în apă ultrapură. (b) Într-un bloc de încălzire sau într-o baie de apă fiartă, se încălzesc 100 μl de suspensie în tuburi închise la 100 °C timp de 4 minute. În cazul în care este necesar, adăugarea de NaOH proaspăt preparat cu o concentrație finală de 0,05 M poate facilita liza celulelor. Probele pot fi depozitate la temperaturi între -16 °C
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
sterilizate pentru fiecare eșantion. La efectuarea testului PCR, a se evita transferul de ADN pe recipientele sau dispozitivele de măcinare. În cazul în care se recurge la testul PCR, se recomandă măcinarea în saci de unică folosință și utilizarea de tuburi de unică folosință. 1.1.3. Se decantează supranatantul. În cazul în care acesta este prea tulbure, se filtrează printr-o centrifugare la viteză mică (la 180 g maximum timp de zece minute, la o temperatură de 4-10 °C) sau
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
prezența agentului patogen. - A se preleva eșantioane de apă de suprafață în apropierea plantelor gazdă în cazul în care aceste plante gazdă sunt prezente. 2.1.1. În punctele de prelevare selecționate, eșantioanele de apă se colectează prin umplerea unor tuburi sau sticle sterile de unică folosință la o adâncime, atunci când este posibil, mai mare de 30 cm și la o distanță maximă de 2 m de la mal. Pentru efluenții proveniți din prelucrarea cartofilor sau efluenții de ape reziduale, se colectează
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
exsudatului bacterian din tulpină Prezența R. solanacearum în tulpini ofilite de cartof, de tomate sau de alte plante gazdă poate fi evaluată prin următorul test simplu prezumtiv: se secționează tulpina chiar deasupra nivelului solului. Se pune extremitatea tăiată într-un tub cu apă curată. După câteva minute, se observă scurgeri spontane și caracteristice de fire de exsudat bacterian din fasciculele vasculare tăiate. 2. Detectarea granulelor de poli-β-hidroxibutirat 1. Se prepară un frotiu din exsudatul bacterian scurs din țesutul infectat pe o
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
testului ELISA, se recomandă utilizarea de anticorpi monoclonali specifici în locul anticorpilor policlonali. 4.2.1. Pentru îmbogățirea PCR, se transferă 100 μl de extract de eșantion în 10 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire (apendicele 2) împărțit anterior în tuburi sau flacoane fără urme de ADN. Pentru îmbogățirea ELISA, se pot folosi proporții mai mari de mediu nutritiv lichid (de exemplu, 100 μl în 1,0 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire). 4.2.2. Se incubează timp de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
lichid (de exemplu, 100 μl în 1,0 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire). 4.2.2. Se incubează timp de 72 ore între 27 și 30 °C într-o cultură agitată sau statică fără a închide ermetic dopul tubului, pentru a permite aerisirea. 4.2.3. Se amestecă bine înainte de a se utiliza pentru testele ELISA sau PCR. 4.2.4. În testele anterioare, mediul nutritiv lichid de îmbogățire se tratează în același mod ca și eșantioanele. Notă: În
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
pentru utilizare în cadrul metodelor PCR validate indicate în apendicele 6. (a) Metoda Pastrik (2000) (1) Se pipetează 220 μl de tampon de liză [100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 1 mM EDTA (pH 8,0)] într-un tub Eppendorf de 1,5 ml. (2) Se adaugă 100 μl de extract de eșantion și se introduce într-un bloc de încălzire sau în baie de abur la 95 °C timp de zece minute. (3) Se așază tubul pe gheață
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
într-un tub Eppendorf de 1,5 ml. (2) Se adaugă 100 μl de extract de eșantion și se introduce într-un bloc de încălzire sau în baie de abur la 95 °C timp de zece minute. (3) Se așază tubul pe gheață timp de cinci minute. (4) Se adaugă 80 μl de soluție concentrată de lizozimă (50 mg de lizozimă pe ml în 10 mM Tris-HCl, pH 8,0) și se incubează la 37 °C timp de 30 de minute
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Invitrogen), se amestecă bine în agitator și se incubează la 65 °C timp de 30 de minute. (6) Se adaugă 100 μl de soluție B de Easy DNA(r) (Invitrogen), se omogenizează bine în agitator până când precipitatul circulă liber în tub, iar eșantionul are o consistență vâscoasă uniformă. (7) Se adaugă 500 μl de cloroform și se omogenizează în agitator până când vâscozitatea este redusă și amestecul este omogen. (8) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
agitator până când vâscozitatea este redusă și amestecul este omogen. (8) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C pentru a separa fazele și a forma interfaza. (9) Faza superioară se transferă într-un nou tub Eppendorf. (10) Se adaugă 1 ml de etanol la 100 % (- 20 °C), se omogenizează scurt în agitator și se incubează pe gheață timp de zece minute. (11) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de zece minute. (11) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se îndepărtează etanolul din extractul concentrat. (12) Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (- 20 °C) și se amestecă rotind tubul. (13) Se centrifughează la 15 000 g timp de zece minute la 4 °C, se păstrează extractul concentrat și se îndepărtează etanolul. (14) Extractul concentrat se lasă să se usuce în aer liber sau într-un SpeedVac ADN. (15) Se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
cazul în care este posibil, se recomandă utilizarea unui protocol PCR compus care include, de asemenea, un control intern al PCR. 6.2.3. Se adaugă 2-5 μl de extract de ADN pe 25 μl de mediu reactiv PCR în tuburi PCR sterile în conformitate cu protocoalele PCR (a se vedea apendicele 6). 6.2.4. Se include un eșantion de control negativ conținând numai un amestec reactiv pentru PCR și se adaugă la aceeași sursă de apă ultrapură ca și cea utilizată
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
6). 6.2.4. Se include un eșantion de control negativ conținând numai un amestec reactiv pentru PCR și se adaugă la aceeași sursă de apă ultrapură ca și cea utilizată în amestecul pentru PCR în locul eșantionului. 6.2.5. Tuburile se introduc în același ciclor termic ca și cel utilizat la testul preliminar și se lansează programul PCR optimizat în mod corespunzător (apendicele 6). 6.3. Analiza produsului reacției PCR 6.3.1. Fragmentele PCR se detectează prin electroforeză în
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de cartof Protocolul descris în continuare se bazează pe Wullings et al. (1998): 7.1.1. Se prepară soluția de fixare (a se vedea apendicele 7). 7.1.2. Se pipetează 100 μl din fiecare extract de eșantion într-un tub Eppendorf și se centrifughează timp de șapte minute la 7 000 g. 7.1.3. Se îndepărtează supranatantul și se dizolvă extractul concentrat în 200 μl de fixativ preparat cu mai puțin de 24 ore înainte. Se omogenizează în agitator
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
este egală cel puțin cu jumătatea celei obținute pentru controlul pozitiv. 4. Testul PCR 4.1. Se prepară o suspensie de circa 106 celule/ml în apă sterilă pentru biologie moleculară. 4.2. Se încălzesc 100 μl din suspensie în tuburi închise într-un bloc de încălzire sau în baie de abur fierbinte la 100 °C timp de patru minute. Eșantioanele pot fi păstrate apoi la o temperatură situată între - 16 și - 24 °C până în momentul în care sunt necesare. 4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
x S/s unde S = suprafața (S) a ferestrei lamei cu multe godeuri și s = suprafața (s) a câmpului obiectivului s = πi2/4G2K2 unde i = coeficientul de câmp (depinde de tipul ocularului și variază de la 8 la 24) K = coeficientul tubului (1 sau 1,25) G = grosisment (de 100 de ori, 40 de ori etc.) obiectiv. 3. Se calculează numărul de celule fluorescente tipice pe ml de extract concentrat resuspendat (N). N = C x 1 000/y x F unde y
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
32006D0441 DECIZIA COMISIEI din 23 iunie 2006 de acceptare a unor angajamente oferite în cadrul procedurii antidumping privind importurile anumitor tuburi și țevi obținute fără sudură, din fier sau din oțel, originare, între altele, din România (2006/441/CE) COMISIA COMUNITĂȚILOR EUROPENE, având în vedere Tratatul de instituire a Comunității Europene, având în vedere Regulamentul (CE) nr. 384/96 al Consiliului
32006D0441-ro () [Corola-website/Law/294833_a_296162]