2,196 matches
-
din hemoglobină este normală și 40% este de tip mutant, aici fiind vorba de un raport de codominanță între alela normală β6A și alela mutantă β6S. Analiza electroforetică a ADN permite evidențierea mutației punctiforme ce are loc în gena pentru catena β, în cazul anemiei falciforme. Această mutație schimbă o pereche A-T într-una T-A la nivel de secvență genică din ADN, afectând cel de al șaselea codon. În ARNm purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β, acest
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
gena pentru catena β, în cazul anemiei falciforme. Această mutație schimbă o pereche A-T într-una T-A la nivel de secvență genică din ADN, afectând cel de al șaselea codon. În ARNm purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β, acest al șaselea codon este în mod normal GAG și codifică pentru acidul glutamic. În condițiile mutației de transversie A → T, de la nivelul ADN, el devine codon GUG, la nivel de ARNm, și codifică pentru valină (fig. 16.21
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
codon este în mod normal GAG și codifică pentru acidul glutamic. În condițiile mutației de transversie A → T, de la nivelul ADN, el devine codon GUG, la nivel de ARNm, și codifică pentru valină (fig. 16.21). În gena normală pentru catena β a hemoglobinei desemnată βA se află trei situsuri de restricție recunoscute de endonucleaza de restricție Dde I, unul în amonte de punctul start al transcripției genei și alte două în secvența codificatoare a acestei gene. În cazul mutației genei
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a hemoglobinei desemnată βA se află trei situsuri de restricție recunoscute de endonucleaza de restricție Dde I, unul în amonte de punctul start al transcripției genei și alte două în secvența codificatoare a acestei gene. În cazul mutației genei pentru catena β, desemnată βS, mutația anulează situsul de restricție Dde I din mijloc, rămânând doar primul și cel de al treilea asemenea situs de restricție (fig. 16.22A). Când ADN de la persoane normale se supune acțiunii restrictazei Dde I, acesta este
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de nucleotide (fig. 16.22). Mutații genetice în talasemii Talasemia este o anemie cronică cu aspecte clinice degenerative, uneori deosebit de severe. În realitate, această hemoglobinopatie reprezintă un grup heterogen de boli ale sângelui determinate de descreșterea sau absența sintezei de catene globinice (Olivieri, 1999; Weatherall și Clegg, 1981). În funcție de tipul de catenă globinică care nu este sintetizată în cantitate normală, se diferențiază trei tipuri de talasemii: α-talasemia, β-talasemia și δβ-talasemia. În toate aceste cazuri se înregistrează efecte la nivelul molecular, prin
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
o anemie cronică cu aspecte clinice degenerative, uneori deosebit de severe. În realitate, această hemoglobinopatie reprezintă un grup heterogen de boli ale sângelui determinate de descreșterea sau absența sintezei de catene globinice (Olivieri, 1999; Weatherall și Clegg, 1981). În funcție de tipul de catenă globinică care nu este sintetizată în cantitate normală, se diferențiază trei tipuri de talasemii: α-talasemia, β-talasemia și δβ-talasemia. În toate aceste cazuri se înregistrează efecte la nivelul molecular, prin instabilitatea moleculei de hemoglobină, ceea ce conduce la instalarea condiției patologice de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de β-talasemie, ne arată că structura genetică heterozigotă condiționează efecte fenotipice mai puțin severe, pe când aceea homozigotă are efecte clinice severe (tabelul 16.6). În cazul α-talasemiilor, mutația poate afecta unul, doi, trei sau toți cei patru loci genici pentru catena α−globinei rezultând 12 genotipuri posibile. În cazul absenței totale a sintezei catenei α-globinei, apare condiția patologică letală hydrops fetalis (vezi tabelul 16.6). Când există două mutații α-globinice, acestea pot apare în același cromozom și talasemia este numită thal-1
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
severe, pe când aceea homozigotă are efecte clinice severe (tabelul 16.6). În cazul α-talasemiilor, mutația poate afecta unul, doi, trei sau toți cei patru loci genici pentru catena α−globinei rezultând 12 genotipuri posibile. În cazul absenței totale a sintezei catenei α-globinei, apare condiția patologică letală hydrops fetalis (vezi tabelul 16.6). Când există două mutații α-globinice, acestea pot apare în același cromozom și talasemia este numită thal-1, sau, o mutație este într -un cromozom 16, pe când cea de a doua
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
NIVEL DE ADN ÎN ANALIZA HEMOGLOBINOPATIILOR UMANE Dat fiind faptul că la om eritrocitele mature în care se sintetizează hemoglobina sunt lipsite de nucleu, transcrierea ARNm pentru globină are loc în precursorii nucleați ai acestora (eritroblaste). Dar, genele pentru diferite catene globinice ale hemoglobinei umane au putut fi izolate și examinate direct din numeroase celule, care în mod obișnuit nu sintetizează hemoglobina: leucocitele din sângele periferic, limfocitele în cultură, fibroblaste, placentă, splină etc. Metodologia constă în extragerea ADN total din celule
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
construi o sonda specifica de β-globină se utilizează ca matriță ARNm pentru globină, iar ca enzimă polimerazică reverstranscriptaza, într- un sistem acelular de sinteză a ADN prin revers transcriere. Dacă se utilizează ARNm purificat, purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β, se sintetizează o copie de ADNc adică o catenă polideoxiribonucleotidică complementară acestui ARNm și care, trecută în formă dublu catenară, reprezintă gena revers transcrisă pentru catena β. ARNm pentru β-globină a fost sintetizat în celulă pe matrița genei native
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
ARNm pentru globină, iar ca enzimă polimerazică reverstranscriptaza, într- un sistem acelular de sinteză a ADN prin revers transcriere. Dacă se utilizează ARNm purificat, purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β, se sintetizează o copie de ADNc adică o catenă polideoxiribonucleotidică complementară acestui ARNm și care, trecută în formă dublu catenară, reprezintă gena revers transcrisă pentru catena β. ARNm pentru β-globină a fost sintetizat în celulă pe matrița genei native pentru catena β. ADNc sintetizat in vitro prin revers transcriere
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
revers transcriere. Dacă se utilizează ARNm purificat, purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β, se sintetizează o copie de ADNc adică o catenă polideoxiribonucleotidică complementară acestui ARNm și care, trecută în formă dublu catenară, reprezintă gena revers transcrisă pentru catena β. ARNm pentru β-globină a fost sintetizat în celulă pe matrița genei native pentru catena β. ADNc sintetizat in vitro prin revers transcriere, fiind radioactiv, va deveni marker pentru localizarea genei pentru β-globina, pe filtrul de nitroceluloză, prin asociere complementară
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
se sintetizează o copie de ADNc adică o catenă polideoxiribonucleotidică complementară acestui ARNm și care, trecută în formă dublu catenară, reprezintă gena revers transcrisă pentru catena β. ARNm pentru β-globină a fost sintetizat în celulă pe matrița genei native pentru catena β. ADNc sintetizat in vitro prin revers transcriere, fiind radioactiv, va deveni marker pentru localizarea genei pentru β-globina, pe filtrul de nitroceluloză, prin asociere complementară pe baza omologiei de secvență cu ADN monocatenar. Autoradiografia permite vizualizarea unei singure benzi radioactive
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a dublului helix ADN, de la nivelul fiecărei cromatide. După denaturarea termică, se adaugă proba radioactivă, fie sub formă de ADNc monocatenar revers-transcris și marcat cu 3H-timidină, fie direct ca ARNm marcat cu 3H-uridină. Acest ARNm conține mesajul genetic pentru diferite catene globinice. Prin reasocierea complementară între monocatenele ADN, rămase separate la nivelul cromatidelor cromozomului metafazic („in situ”) și proba radioactivă, autoradiografierea va decela prezența radioactivității la nivelul cromozomului uman 11, corespunzător unei benzi Q sau G, aflată la o anumită distanță
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
nivelul cromatidelor cromozomului metafazic („in situ”) și proba radioactivă, autoradiografierea va decela prezența radioactivității la nivelul cromozomului uman 11, corespunzător unei benzi Q sau G, aflată la o anumită distanță față de centromer, acesta fiind locusul genic pentru gena umană a catenei β-globinice, sau la nivelul cromozomului 16, dacă se utilizează o probă radioactivă caracteristică genei pentru catena α (alfa), în acest cromozom fiind situat locusul genic pentru această catenă. Pentru detectarea mutațiilor din genele globinice se pot aplica metode indirecte în cadrul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
cromozomului uman 11, corespunzător unei benzi Q sau G, aflată la o anumită distanță față de centromer, acesta fiind locusul genic pentru gena umană a catenei β-globinice, sau la nivelul cromozomului 16, dacă se utilizează o probă radioactivă caracteristică genei pentru catena α (alfa), în acest cromozom fiind situat locusul genic pentru această catenă. Pentru detectarea mutațiilor din genele globinice se pot aplica metode indirecte în cadrul cărora se utilizează o probă specifică unei anumite gene globinice sau unei anumite regiuni genice cu
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
anumită distanță față de centromer, acesta fiind locusul genic pentru gena umană a catenei β-globinice, sau la nivelul cromozomului 16, dacă se utilizează o probă radioactivă caracteristică genei pentru catena α (alfa), în acest cromozom fiind situat locusul genic pentru această catenă. Pentru detectarea mutațiilor din genele globinice se pot aplica metode indirecte în cadrul cărora se utilizează o probă specifică unei anumite gene globinice sau unei anumite regiuni genice cu folosirea tehnicii Southern blot asupra restrictelor obținute în urma acțiunii unor enzime de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
persoanele afectate de o hemoglobinopatie nu diferă de acela evidențiat la persoanele neafectate, înseamnă că această metodă de analiză nu este relevantă pentru cazurile investigate și alta este cauza condiției patologice. Utilizarea acestor tehnici a permis depistarea delețiilor genei pentru catena α a hemoglobinei, în talasemia α și a genelor pentru catenele globinice β și δ, în cazurile de persistență ereditară a hemoglobinei fetale și în talasemia δβ, în celulele în care, în mod normal nu are loc sinteza celulară de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
persoanele neafectate, înseamnă că această metodă de analiză nu este relevantă pentru cazurile investigate și alta este cauza condiției patologice. Utilizarea acestor tehnici a permis depistarea delețiilor genei pentru catena α a hemoglobinei, în talasemia α și a genelor pentru catenele globinice β și δ, în cazurile de persistență ereditară a hemoglobinei fetale și în talasemia δβ, în celulele în care, în mod normal nu are loc sinteza celulară de hemoglobină, deoarece genele hemoglobinice sunt active doar în eritroblaste. Astfel de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
se aplică în cazul oricăror alte gene umane transcrise într-un ARNm specific, care poate fi extras, purificat, marcat radioactiv și utilizat ca probă moleculară. Utilizarea endonucleazelor de restricție a permis evidențierea unui polimorfism de secvență în apropierea genei pentru catena β-globinei umane. Un fragment de ADN de diferite lungimi ce conține gena pentru această catenă a fost izolat de la anumite persoane din rasa neagră. S-a constatat că această variantă de lungime a ADN segregă ca o trăsătură mendeliană, fiind
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
fi extras, purificat, marcat radioactiv și utilizat ca probă moleculară. Utilizarea endonucleazelor de restricție a permis evidențierea unui polimorfism de secvență în apropierea genei pentru catena β-globinei umane. Un fragment de ADN de diferite lungimi ce conține gena pentru această catenă a fost izolat de la anumite persoane din rasa neagră. S-a constatat că această variantă de lungime a ADN segregă ca o trăsătură mendeliană, fiind asociată cu mutația HbS, mult mai frecvent la această rasă, decât s-ar putea datora
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
la GTGGAG. Enzima de restricție Dde I, care are ca situs specific de clivare secvența GAGG, oferă posibilitatea detecției mutației HbS în ADN din orice celulă a organismului uman. Corespunzând pozițiilor 6 și 7 din β-globină, ocupate de acidul glutamic, catena transcrisă din ADN are secvența CTCCTC, în gena normală și secvența CACCTC, în alela mutantă HbS. Consecințele unei asemenea substituții singulare de nucleotid sunt de-a dreptul dramatice, în cazul anemiei falciforme. O singură transversie A → T induce modificarea codonului
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a dreptul dramatice, în cazul anemiei falciforme. O singură transversie A → T induce modificarea codonului GAG, în codonul GTG, la nivelul ADN, și, în virtutea complementarității, a codonului CUC, în codon CAC, la nivelul ARNm purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β a globinei, ceea ce determină substituirea acidului glutamic cu valina în poziția a 6-a a catenei globinice β, iar hemoglobina normală (HbA) devine o hemoglobină anormală (HbS). Diagnoza prenatală reușită pentru α-talasemie, β-talasemie și anemia falciformă s-a realizat
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
codonul GTG, la nivelul ADN, și, în virtutea complementarității, a codonului CUC, în codon CAC, la nivelul ARNm purtător al mesajului genetic pentru sinteza catenei β a globinei, ceea ce determină substituirea acidului glutamic cu valina în poziția a 6-a a catenei globinice β, iar hemoglobina normală (HbA) devine o hemoglobină anormală (HbS). Diagnoza prenatală reușită pentru α-talasemie, β-talasemie și anemia falciformă s-a realizat prin prelevarea materialului biologic prin puncție placentară sau aspirație de sânge total controlată fetoscopic. Analiza lichidului amniotic
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
Genetică moleculară în medicina umană, în investigațiile clinice. Ameliorarea metodelor electroforetice a permis identificarea a peste 300 de variante hemoglobinice umane în anii ’60 ai secolului XX. În anul 1961, Braunitzer și colaboratorii au stabilit întreaga secvență de aminoacizi a catenelor hemoglobinice, putându-se astfel evidenția multe modificări apărute în secvența de aminoacizi a acestora, ca o consecință a mutațiilor frameshift (de schimbare a cadrului de citire). Se poate face și demonstrarea existenței unei mutații punctiforme care modifică un situs de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]