17,853 matches
-
ori durata ciclului celular. Rezultatele negative obținute în prezența activării metabolice necesită o confirmare pentru fiecare caz. Pentru cazurile în care se consideră că nu este necesară confirmarea rezultatelor negative, trebuie să se prezinte o justificare. 1.4.3.4. Prepararea cromozomilor Culturile celulare se tratează cu Colcemid(r) sau colchicină, de obicei timp de 1-3 ore înainte de recoltare. Fiecare cultură celulară se recoltează și se prelucrează separat pentru prepararea cromozomilor. Prepararea cromozomilor include tratamentul hipotonic al celulelor, precum și fixarea și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
negative, trebuie să se prezinte o justificare. 1.4.3.4. Prepararea cromozomilor Culturile celulare se tratează cu Colcemid(r) sau colchicină, de obicei timp de 1-3 ore înainte de recoltare. Fiecare cultură celulară se recoltează și se prelucrează separat pentru prepararea cromozomilor. Prepararea cromozomilor include tratamentul hipotonic al celulelor, precum și fixarea și colorarea acestora. 1.4.3.5. Analiza Toate lamelele, inclusiv cele cu martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înaintea analizei microscopice. Deoarece procedurile de fixare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să se prezinte o justificare. 1.4.3.4. Prepararea cromozomilor Culturile celulare se tratează cu Colcemid(r) sau colchicină, de obicei timp de 1-3 ore înainte de recoltare. Fiecare cultură celulară se recoltează și se prelucrează separat pentru prepararea cromozomilor. Prepararea cromozomilor include tratamentul hipotonic al celulelor, precum și fixarea și colorarea acestora. 1.4.3.5. Analiza Toate lamelele, inclusiv cele cu martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înaintea analizei microscopice. Deoarece procedurile de fixare generează adesea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, de exemplu gradul de confluență, datele privind ciclul celular, numărătoarea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
tratament. Cuștile ar trebui să se aranjeze astfel încât posibilele efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
acestora să fie reduse la minim. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și corozive, care vor prezenta în mod normal efecte exacerbate la concentrații mai mari, variația volumului administrat ar trebui să fie redusă la minim prin ajustarea concentrației, astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Măduva osoasă se extrage imediat după sacrificare, se expune la o soluție hipotonică și se fixează. Apoi, celulele se întind pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Se procedează la determinarea indexului mitotic, care este o măsură
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de celule. Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent, înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
la începutul testului, inclusiv intervalul de greutate, greutatea medie și deviația standard pentru fiecare grupă. Condițiile de testare: - martorii pozitivi și negativi (solvent/vehicul), - datele din studiul pentru stabilirea dozelor, dacă s-a realizat, - justificarea alegerii dozelor utilizate, - detalii privind prepararea substanței de testat, - detalii privind administrarea substanței de testat, - justificarea căii de administrare selectate, - metodele de verificare pentru a constata dacă substanța de testat a ajuns în circulația generală sau în țesutul-țintă, dacă este cazul, - conversia concentrației substanței de testat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
zi), dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - tipul și numărul aberațiilor, consemnate separat pentru fiecare animal, - numărul total
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
tratament. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile. Cuștile ar trebui să se aranjeze astfel încât posibilele efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de laborator timp de minimum cinci zile. Cuștile ar trebui să se aranjeze astfel încât posibilele efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și corozive care vor prezenta în mod normal efecte exacerbate la concentrații mai mari, variația volumului testat ar trebui să fie redusă la minim prin ajustarea concentrației, astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea măduvei osoase/a sângelui Celule de măduvă osoasă se extrag în mod curent din femur sau tibie imediat după sacrificare. De obicei, celulele se extrag din femur sau tibie, se depun pe lamele și se colorează prin metodele stabilite. Sângele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
nespecific pentru ADN. Avantajul menționat nu exclude utilizarea coloranților convenționali (de ex. Giemsa). Se pot utiliza și alte sisteme [de ex. coloane de celuloză pentru eliminarea celulelor nucleate (16)], cu condiția ca sistemele respective să se fi dovedit eficiente pentru prepararea micronucleelor în laborator. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal se determină proporția de eritrocite imature în raport cu numărul total de eritrocite (imature + mature) prin examinarea a cel puțin 200 de eritrocite pentru măduva osoasă și 1 000 de eritrocite pentru
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
la începutul testului, inclusiv intervalul de greutate, greutatea medie și deviația standard pentru fiecare grupă. Condițiile de testare: - martorii pozitivi și negativi (solvent/vehicul), - datele din studiul pentru stabilirea dozelor, dacă s-a realizat, - justificarea alegerii dozelor utilizate, - detalii privind prepararea substanței de testat, - detalii privind administrarea substanței de testat, - justificarea căii de administrare selectate, - metodele de verificare pentru a constata dacă substanța de testat a ajuns în circulația generală sau în țesutul-țintă, dacă este cazul, - conversia concentrației substanței de testat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
substanței de testat (ppm) în hrană/apa de băut în doza reală (mg/kg greutate corp/zi), dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de preparare a lamelelor, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile pentru numărătoarea eritrocitelor imature micronucleate, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - proporția de eritrocite imature în raport cu numărul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
agenților mutageni de reticulare s-ar putea prefera includerea sușei TA102 sau adăugarea unei sușe de E. coli capabile de regenerarea ADN [de ex. E. coli WP2 sau E. coli WP2 (pKM101)]. Ar trebui să se utilizeze procedurile stabilite pentru prepararea culturilor de rezervă, verificarea markerilor și pentru păstrare. Pentru fiecare preparat de cultură de rezervă congelată, ar trebui să se demonstreze necesitatea prezenței unui aminoacid pentru dezvoltarea culturii (histidină pentru sușele S. typhimurium și triptofan pentru sușele E. coli). Ar
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ar putea să fie convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. Pentru coloranții azoici și diazoderivați, s-ar putea să fie mai potrivită utilizarea unui sistem de activare metabolică reducător (6) (13). 1.5.1.4. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se prepare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului bacteriilor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
celulelor utilizate în test. O importanță deosebită o prezintă alegerea condițiilor de cultură, astfel încât să asigure creșterea optimă a celulelor în perioada de manifestare și capacitatea celulelor, atât mutante, cât și nemutante, de a forma colonii. 1.4.1.3. Prepararea culturilor Celulele se obțin plecând de la culturile de rezervă, se însămânțează în mediul de cultură și se incubează la 37oC. Înainte de a fi utilizate în prezentul test, este necesară curățarea culturilor de celulele mutante preexistente. 1.4.1.4. Activarea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
enzime activatoare specifice, pot să furnizeze potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Prepararea substanței de testat Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Prepararea substanței de testat Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele de testare și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
trebui să se aranjeze astfel încât posibilele efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile înainte de începerea studiului. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
reduse la minim. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile înainte de începerea studiului. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și corozive care vor prezenta în mod normal efecte exacerbate la concentrații mai mari, variația volumului testat ar trebui să fie redusă la minim prin ajustarea concentrației, astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Imediat după sacrificare, suspensiile celulare obținute de la unul sau două testicule, se expun la o soluție hipotonică și se fixează. Celulele se întind apoi pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal ar trebui să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
fiecare grupă). Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]