2,196 matches
-
dintre ele: a) centrifugarea ADN purificat în gradient de clorură de cesiu și b) procedeul cinetic care pune în evidență viteza de reasociere a celor două catene separate experimental printr-o ridicare de temperatură, superioară celei „firești“ de asociere a catenelor. A. Prin ultracentrifugarea în gradient de clorură de cesiu, se poate reliefa (pe baza diferenței de densitate) cele trei tipuri de ADN satelit care se adaugă „vârfului“ de densitate mai mare (fig. 3-9). B. Viteza de reasociere a secvențelor de
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
de clorură de cesiu, se poate reliefa (pe baza diferenței de densitate) cele trei tipuri de ADN satelit care se adaugă „vârfului“ de densitate mai mare (fig. 3-9). B. Viteza de reasociere a secvențelor de nucleotide complementare de pe cele două catene separate expe rimental prin procedee termice. Din acest punct de vedere există o diferență netă între ADN-ul procariotelor și cel al mamiferelor. În timp ce la primele, cinetica reasocierii este o curbă sigmoidă cvasiperfectă, la mamifere, viteza de reasociere apare sub
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
de ADN se pot prezenta sub trei forme (fig. 3-10): a) linearizată; b) relaxată în care molecula este circulară. Trecerea de la forma „superînfă șurată“ (engl., supercoiled) la cea relaxată se poate obține în laborator prin tăierea uneia sau a ambelor catene; c) superînfășurată, forma topologică nativă. În 1958, biochimiștii americani M. Meselson și F. W. Stahl demonstrau prin tehnica izotopilor radioactivi și folosind drept cobai colibacilul, că, la un moment dat, firul bicatenar al moleculei de ADN se desrăsucește la unul
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
rămân perfect față în față, ci se depărtează. Într-o fază consecutivă, bazele azotate rămase „stinghere“ pe fiecare dintre porțiunile desrăsucite, „cheamă“ din pool-ul nuclear exact pe acelea cu care sunt complementare. Igrecul va avea astfel două brațe formate din catene duble. Acestea vor intra ulterior, fiecare, întruna din celulele fiice. De la această constatare relativ simplă, publicată în 1958 de M. Maselson și F. W. Stahl a pornit o avalanșă de cercetări, care au elucidat, pas cu pas, întregul proces al
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
și F. W. Stahl a pornit o avalanșă de cercetări, care au elucidat, pas cu pas, întregul proces al replicării semiconservative a ADN. PRIMUL PAS întreprins în celulele eucariote, este reprezentat de desfacerea legăturilor de hidrogen între bazele celor două catene antiparalele. Derularea (desfășurarea) celor două catene este punctul de start. Despicarea se produce la locul unde catena este bogată în A=T. Aceasta se datorează faptului că între Adenină și Timină legătura e mai slabă, deoarece la acel nivel nu
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
o avalanșă de cercetări, care au elucidat, pas cu pas, întregul proces al replicării semiconservative a ADN. PRIMUL PAS întreprins în celulele eucariote, este reprezentat de desfacerea legăturilor de hidrogen între bazele celor două catene antiparalele. Derularea (desfășurarea) celor două catene este punctul de start. Despicarea se produce la locul unde catena este bogată în A=T. Aceasta se datorează faptului că între Adenină și Timină legătura e mai slabă, deoarece la acel nivel nu există decât două punți de hidrogen
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
proces al replicării semiconservative a ADN. PRIMUL PAS întreprins în celulele eucariote, este reprezentat de desfacerea legăturilor de hidrogen între bazele celor două catene antiparalele. Derularea (desfășurarea) celor două catene este punctul de start. Despicarea se produce la locul unde catena este bogată în A=T. Aceasta se datorează faptului că între Adenină și Timină legătura e mai slabă, deoarece la acel nivel nu există decât două punți de hidrogen, în timp ce Citozina și Guanina sunt legate prin trei punți de hidrogen
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
și Timină legătura e mai slabă, deoarece la acel nivel nu există decât două punți de hidrogen, în timp ce Citozina și Guanina sunt legate prin trei punți de hidrogen (CI G sau GI C). Enzimele care acționează pentru separarea celor două catene au putut fi identificate biochimic. Ele aparțin la două familii: topoizomeraze și helicaze. Topoizomerazele intervin în procesul de derulare al helixului ADN, proces premergător separării celor două catene în dinamica replicării (pentru acest motiv topoizomerazele mai sunt numite și derulaze
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
CI G sau GI C). Enzimele care acționează pentru separarea celor două catene au putut fi identificate biochimic. Ele aparțin la două familii: topoizomeraze și helicaze. Topoizomerazele intervin în procesul de derulare al helixului ADN, proces premergător separării celor două catene în dinamica replicării (pentru acest motiv topoizomerazele mai sunt numite și derulaze sau relaxaze. Din această familie de enzime se cunosc până în prezent topoizomerazele de tip I și II. Diferența de acțiune este netă: în timp ce topoizomeraza de tip I nu
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
acest motiv topoizomerazele mai sunt numite și derulaze sau relaxaze. Din această familie de enzime se cunosc până în prezent topoizomerazele de tip I și II. Diferența de acțiune este netă: în timp ce topoizomeraza de tip I nu taie decât una din catenele ADN, topoizomeraza de tip II le secționează pe amândouă. Mecanismul de acțiune al topoizomerazei de tip I este următorul: respectiva enzimă se atașează cu una dintre tirozine la ADN-ul tăiat: această „agățare“ se face fie la fosfatul de la 5
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
cum s-a precizat anterior, desrăsucirea helixului. Procesul este capabil să-și asigure prin sine însuși energia, fără să fie necesar de a apela la reacția de trecere a ATP în ADP. Topoizomerazele de tip II (cele care taie ambele catene ale ADN) sunt capabile ca la procariote (E. coli de pildă) să creeze sau, dimpotrivă să retragă anumite bucle ale moleculei de ADN. Giraza de la colibacil, de exemplu, vitală și necesară în crearea unor supertururi, este inhibată de unele antibiotice
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
că induc apoptoza celulelor neoplazice. Helicazele sunt și ele o clasă de enzime vitale pentru organismele vii. Acestea sunt adevărate proteine-motor (engl. Motor proteins), care se mișcă direcțional de-a lungul unui schelet fosfodiesteric de acid nucleic, ele separând două catene de acizi nucleici înfășurați (de ex. ADN, ARN, zonele bicatenare sau ARN-ADN hibrid) utilizând energia derivată din hidroliza ATP. Helicazele intervin așadar în procesul replicării, al reparării ADN, al re combinării, al transcripției, al construirii ARN-urilor etc. Nu se
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
replicării, al reparării ADN, al re combinării, al transcripției, al construirii ARN-urilor etc. Nu se cunoaște încă numărul de helicaze de la specia umană (fiecare helicază este specifică tipului de acid nucleic asupra căruia acționează, desrăsucind și separând cele două catene). La E. coli au fost descoperite (până în 2009) 14 asemenea enzime iar la drojdia de bere 130. Mutațiile survenite în structura genelor care codifică helicazele umane duc la boli ereditare cu nete predispoziții către neoplazii apărute timpuriu, precum sindroamele Bloom
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
precum sindroamele Bloom, Werner, Rothmund-Thompson ș.a. Punctul de inițiere de unde începe despicarea helixului, a fost numit originea replicării (origin of replication). Structura care se crează consecutiv este cunoscută ca bifurcație replicativă (replication fork). (Fig. 3-13). Intervenția helicazei la desfacerea dublei catene în două monocatene parentale. Monocatenele sunt sensibile la atacul nucleazelor, astfel încât ele sunt protejate de proteine (Single Strand Binding Proteins, respectiv SSB proteins). 3. ADN și ARN, țintele predilecte ale factorilor carcinogeni (intrinseci sau extrinseci) ADN-primaza este o „enzimă-cheie“ implicată
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
segment de ARN scurt, numit primer, complementar la matricea ss ADN (descoperit de soții Okazaki). Calificativul de „enzimă cheie“ i-a fost acordat pe drept, deoarece nici o altă polimerază ADN cunoscută până în prezent nu este capabilă să inițieze sinteza unei catene de ADN fără un primer inițial ARN sau ADN (pentru elongarea temporară a ADN ). Primerul este o catenă de acid ribonucleic care servește ca punct de start pentru replicarea ADN. Existența sa permite ADN polimerazelor (enzime ce catalizează replicarea ADN
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
cheie“ i-a fost acordat pe drept, deoarece nici o altă polimerază ADN cunoscută până în prezent nu este capabilă să inițieze sinteza unei catene de ADN fără un primer inițial ARN sau ADN (pentru elongarea temporară a ADN ). Primerul este o catenă de acid ribonucleic care servește ca punct de start pentru replicarea ADN. Existența sa permite ADN polimerazelor (enzime ce catalizează replicarea ADN), să adauge noi și noi nucleotide la o catenă ADN deja existentă. Polimerazele au startul replicării începând de la
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
ADN (pentru elongarea temporară a ADN ). Primerul este o catenă de acid ribonucleic care servește ca punct de start pentru replicarea ADN. Existența sa permite ADN polimerazelor (enzime ce catalizează replicarea ADN), să adauge noi și noi nucleotide la o catenă ADN deja existentă. Polimerazele au startul replicării începând de la capătul 3' al primerului și copiază catena opusă. În majoritatea cazurilor de replicare naturală a ADN, primer-ul pentru sinteza ADN și replicarea este o catenă scurtă de ARN (care poate fi
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
punct de start pentru replicarea ADN. Existența sa permite ADN polimerazelor (enzime ce catalizează replicarea ADN), să adauge noi și noi nucleotide la o catenă ADN deja existentă. Polimerazele au startul replicării începând de la capătul 3' al primerului și copiază catena opusă. În majoritatea cazurilor de replicare naturală a ADN, primer-ul pentru sinteza ADN și replicarea este o catenă scurtă de ARN (care poate fi făcut de novo). Așa cum s-a precizat mai înainte, primerul ARN este produs de primază. Într-
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
noi și noi nucleotide la o catenă ADN deja existentă. Polimerazele au startul replicării începând de la capătul 3' al primerului și copiază catena opusă. În majoritatea cazurilor de replicare naturală a ADN, primer-ul pentru sinteza ADN și replicarea este o catenă scurtă de ARN (care poate fi făcut de novo). Așa cum s-a precizat mai înainte, primerul ARN este produs de primază. Într-o fază mai avansată a replicării, primerul ARN este îndepărtat de pe catenă (ca nefolositor) și înlocuit cu material
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
sinteza ADN și replicarea este o catenă scurtă de ARN (care poate fi făcut de novo). Așa cum s-a precizat mai înainte, primerul ARN este produs de primază. Într-o fază mai avansată a replicării, primerul ARN este îndepărtat de pe catenă (ca nefolositor) și înlocuit cu material ADN produs de o polimerază de reparație. În prezent există multe tehnici de laborator de biochimie și biologie moleculară care implică ADN polimeraza. De exemplu, secvențializarea ADN și polymerase chain reaction“ (PCR), necesită primeri
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
de polimerizare a nucleotidelor pentru formarea noului ADN, sunt schematizate în fig. 3-14. În acest proces intervin următoarele elemente: a) ADN-polimeraza delta (δ); b) ADN-polimeraza alfa (α). Rolul polimerazelor este acela de a insera succesiv nucleotidele care sunt comple mentare catenei parentale (motrice). Până la data elaborării acestui material, se cunoșteau șapte familii de ADN polimeraze, dintre care ADN polimerazele α, δ și ε sunt absolut indispensabile în replicarea celulelor de la eucariote. c) ssADN binding proteins sunt molecule mici de proteină. Aceste
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
influența helicazei (a se vedea „Primul pas al replicării ADN“), formează un fel de „manșon“ de protecție, care ferește ADN-ul monocatenar de acțiunea distructivă a nucleazelor prezente la acest nivel. Elongația prin sinteză de ADN se face diferit, în funcție de catenă (3'-5' sau 5'-3'). Primer ARN Într-adevăr, în acest caz ADN polimeraza δ, care citește matricea și adaugă nucleo tidele complementare pe direcția 3'-5', o face continuu, adică fără ca procesul să se întrerupă, ceea ce crează senzația falsă
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
ADN polimeraza δ, care citește matricea și adaugă nucleo tidele complementare pe direcția 3'-5', o face continuu, adică fără ca procesul să se întrerupă, ceea ce crează senzația falsă, desigur, că ar exista o întrecere „de tip sportiv“ între cele două catene nou născute, mai exact, care dintre ele se lungește mai rapid prin adaos de nucleotide. Judecată în acest fel, „leading strand“ apare ca înaintată față de catena opusă (lagging strand = catena întârziată) care „are probleme“ și „complicații“ în procesul de elongație
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
senzația falsă, desigur, că ar exista o întrecere „de tip sportiv“ între cele două catene nou născute, mai exact, care dintre ele se lungește mai rapid prin adaos de nucleotide. Judecată în acest fel, „leading strand“ apare ca înaintată față de catena opusă (lagging strand = catena întârziată) care „are probleme“ și „complicații“ în procesul de elongație (a se vedea mai departe, procesul adaosului de nucleotide în fragmente Okazaki). Matricea 5'-3' nu poate fi citită de ADN polimeraza δ în această direcție
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
ar exista o întrecere „de tip sportiv“ între cele două catene nou născute, mai exact, care dintre ele se lungește mai rapid prin adaos de nucleotide. Judecată în acest fel, „leading strand“ apare ca înaintată față de catena opusă (lagging strand = catena întârziată) care „are probleme“ și „complicații“ în procesul de elongație (a se vedea mai departe, procesul adaosului de nucleotide în fragmente Okazaki). Matricea 5'-3' nu poate fi citită de ADN polimeraza δ în această direcție, astfel că respectiva polimerază
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]