2,881 matches
-
Se mai poate utiliza ca fixativ etanol la 96 %. În acest caz, extractul concentrat menționat la punctul 5.1.2 se dizolvă într-un amestec format din 50 μl de tampon fosfatat la 0,01 M și din 50 μl etanol la 96 %. Se amestecă la vortex și se lasă la incubat la 4 °C timp de 30-60 minute. 5.1.4. Se pune la centrifugat timp de 8 minute la 7 000 g, se elimină lichidul supernatant și se repune
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
probe diferite, nediluate, și din acestea se diluează 10 μl la 1:100 (într-un tampon fosfatat de 0,01 M). Restul soluției de probă (49 μl) poate fi conservată la -20 °C, după ce s-a adăugat o cantitate de etanol la 96 %. În cazul în care este necesară repetarea testului FISH, se elimină etanolul prin centrifugare și se înlocuiește cu o cantitate echivalentă de tampon fosfatat la 0,01 M (se omogenizează prin agitare). Figura 3. Dispunerea unei lame pentru
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
un tampon fosfatat de 0,01 M). Restul soluției de probă (49 μl) poate fi conservată la -20 °C, după ce s-a adăugat o cantitate de etanol la 96 %. În cazul în care este necesară repetarea testului FISH, se elimină etanolul prin centrifugare și se înlocuiește cu o cantitate echivalentă de tampon fosfatat la 0,01 M (se omogenizează prin agitare). Figura 3. Dispunerea unei lame pentru testul FISH ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE FOLLOWING TEXT IN RO LANGUAGE]*** échantillon 1
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
tamponul (2mM Tri-HCl, 2mM Cacl2, pH 7,4) 50 μl de proteinază K la 40-400 μg/ml, apoi se lasă la incubat la 37 °C timp de 30 de minute. 5.2.2. Se deshidratează celulele prin băi succesive de etanol la 50 %, 80 % și 96 % de un minut fiecare. Se așază lamele pe un suport și se lasă să se usuce în aer liber. 5.2.3. Se prepară o cameră de incubație umedă tapițând fundul unei cutii ermetice de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
omogen. 8. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute, la 4 °C, pentru a separa fazele și a forma interfaza. 9. Se varsă faza superioară într-un alt tub Eppendorf. 10. Se adaugă 1 mililitru de etanol la 100 % (-20 °C), se omogenizează rapid prin agitare și se lasă la incubat pe gheață timp de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se elimină etanolul din
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de etanol la 100 % (-20 °C), se omogenizează rapid prin agitare și se lasă la incubat pe gheață timp de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se elimină etanolul din extractul concentrat. 12. Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (-20 ° C) și se amestecă, răsturnând tubul. 13. Se centrifughează la 15 000 g timp de 10 minute la 4 °C, se conservă extractul concentrat și se elimină
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
agitare și se lasă la incubat pe gheață timp de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se elimină etanolul din extractul concentrat. 12. Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (-20 ° C) și se amestecă, răsturnând tubul. 13. Se centrifughează la 15 000 g timp de 10 minute la 4 °C, se conservă extractul concentrat și se elimină etanolul. 14. Se lasă să se usuce extractul în aer
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
din extractul concentrat. 12. Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (-20 ° C) și se amestecă, răsturnând tubul. 13. Se centrifughează la 15 000 g timp de 10 minute la 4 °C, se conservă extractul concentrat și se elimină etanolul. 14. Se lasă să se usuce extractul în aer liber sau într-un Speed Vac de ADN. 15. Se repune în suspensie extractul în concentrat în 100 μl de apă ultrapură sterilă și se lasă la temperatura mediului înconjurător timp
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de izolare, pe baza segmentelor de țesut care provin de la frunzele veștejite sau pe baza tulpinii plantei (pentru macerarea țesuturilor, a se vedea punctul 3.1.3). Se dezinfectează suprafața frunzelor și a tulpinilor de pătlăgea vânătă, frecându-le cu etanol la 70 %. Se efectuează un test IF sau PCR pe seva de pătlăgea vânătă și se trece la izolarea pe mediu adecvat (selectiv) (a se vedea secțiunea 8). De asemenea, este posibil să se prepare o colorare Gram (a se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
C, se adaugă următoarele antibiotice: sulfat de polimixină B (Sigma) 0,003 g, acid nalidixic (Sigma) 0,008 g, cicloheximidă (Sigma) 0,2 g. Antibioticele se dizolvă în soluții mamă: acidul nalidixic în NaOH la 0,01 M; cicloheximida în etanol la 50 %, sulfatul de polimixină B în apă distilată. Soluțiile depozitate sunt sterilizate prin filtrare. Nota bene: Mediul bazal se conservă timp de trei luni. După adăugarea antibioticelor, mediul se conservă o lună în atmosferă refrigerată. Apendicele 6 Protocol și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
NU SE UTILIZEAZĂ PH-METRU ÎN SOLUȚII CARE CONȚIN PARAFORMALDEHIDĂ]. (iii) Soluția se filtrează printr-un filtru cu membrană de 0,22 μm și se protejează de praf la 4 °C până la utilizare. (iv) Nota bene: Soluție de fixare de înlocuire: etanol la 96 %. 3. Hibmix 3X NaCl 2,7 M Tri-HCl 60 mM (pH 7,4) EDTA (filtru sterilizat și trecut prin autoclavă) 15 mM Se diluează până la 1 x, după caz. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1X Dodecilsulfat de sodiu
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
-ul web la adresa http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main. Apendicele 9 Procedura pentru reacția Gram (modificarea lui Hucker) (Doetsch, 1981)32 Soluție de violet cristalizat Se dizolvă 2 g de violet cristalizat în 20 ml de etanol la 95 %. Se dizolvă 0,8 g de oxalat de amoniu în 80 ml de apă distilată. Se amestecă cele două soluții. Soluția iodo-iodurată a lui Lugol Iod 1 g Iodură de potasiu 2 g Apă distilată 300 ml Substanțele
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
distilată 300 ml Substanțele solide se zdrobesc împreună cu ajutorul unui pistil și al unui mojar. Se adaugă apa și se amestecă într-un recipient închis pentru a se dizolva. Soluție colorantă de safranină Soluție mamă: Safranină O 2,5 g Etanol la 95 % 100 ml Se amestecă și se depozitează. Se diluează în raport 1:10 pentru a obține o soluție de lucru. Procedura de colorare 1. Se prepară frotiurile, se usucă la aer și se fixează la căldură. 2. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
3. Se spală rapid cu apă curentă. 4. Se scufundă în soluția iodo-iodurată a lui Lugol timp de un minut. 5. Se spală cu apă de robinet și se usucă cu hârtia sugativă. 6. Se decolorează adăugând picătură cu picătură etanol la 95 %, până când nu își mai modifică culoarea sau scufundând în etanol timp de 30 de secunde și agitând ușor. 7. Se spală cu apă de robinet și se usucă cu hârtia sugativă. 8. Se scufundă în soluția de safranină
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
iodo-iodurată a lui Lugol timp de un minut. 5. Se spală cu apă de robinet și se usucă cu hârtia sugativă. 6. Se decolorează adăugând picătură cu picătură etanol la 95 %, până când nu își mai modifică culoarea sau scufundând în etanol timp de 30 de secunde și agitând ușor. 7. Se spală cu apă de robinet și se usucă cu hârtia sugativă. 8. Se scufundă în soluția de safranină timp de 10 secunde. 9. Se spală cu apă de robinet și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
examinarea vizuală a simptomelor interne (colorație vasculară sau exsudat bacterian). Se separă orice bucată de tulpină cu simptome și se testează în mod separat (a se vedea secțiunea II). 2.1.2. Se efectuează o dezinfectare scurtă a bucăților cu etanol de 70 % și se usucă de îndată cu ajutorul hârtiei absorbante. Apoi, se prelucrează bucățile de tulpină în conformitate cu una dintre următoarele proceduri: (a) se acoperă cu un volum suficient (circa 40 ml) de tampon de extracție (apendicele 4) și se introduc
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
normală pentru a avea certitudinea că granulele sunt intracelulare și că morfologia celulei este tipică pentru R. solanacearum. Testul cu negru de Sudan (a) Fiecare lamelă se scufundă într-o soluție de 0,3 % negru de Sudan B în 70 % etanol și se incubează zece minute la temperatura ambiantă. (b) Se scurge soluția colorantă și se spală rapid cu apă curgătoare. Se îndepărtează excesul de apă cu hârtie absorbantă. (c) Lamelele se trec rapid prin xilen brut și se usucă cu
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
figura 2. 5.2. Se lasă picăturile să se usuce la temperatura ambiantă sau prin încălzire la o temperatură de 40-45 °C. Celulele bacteriene se fixează pe lamă prin încălzire (cincisprezece minute la 60 °C), trecere prin flacără, cu 95 % etanol sau în conformitate cu instrucțiunile specifice ale furnizorilor de anticorpi. În cazul în care este necesar, lamele fixate pot fi refrigerate sau depozitate într-o cutie de uscare pe perioada necesară (cel mult trei luni) înainte de un nou test. 5.3. Procedura
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
omogen. (8) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C pentru a separa fazele și a forma interfaza. (9) Faza superioară se transferă într-un nou tub Eppendorf. (10) Se adaugă 1 ml de etanol la 100 % (- 20 °C), se omogenizează scurt în agitator și se incubează pe gheață timp de zece minute. (11) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se îndepărtează etanolul din extractul concentrat
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1 ml de etanol la 100 % (- 20 °C), se omogenizează scurt în agitator și se incubează pe gheață timp de zece minute. (11) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se îndepărtează etanolul din extractul concentrat. (12) Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (- 20 °C) și se amestecă rotind tubul. (13) Se centrifughează la 15 000 g timp de zece minute la 4 °C, se păstrează extractul concentrat și se îndepărtează
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
scurt în agitator și se incubează pe gheață timp de zece minute. (11) Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se îndepărtează etanolul din extractul concentrat. (12) Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (- 20 °C) și se amestecă rotind tubul. (13) Se centrifughează la 15 000 g timp de zece minute la 4 °C, se păstrează extractul concentrat și se îndepărtează etanolul. (14) Extractul concentrat se lasă să se usuce în
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
din extractul concentrat. (12) Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (- 20 °C) și se amestecă rotind tubul. (13) Se centrifughează la 15 000 g timp de zece minute la 4 °C, se păstrează extractul concentrat și se îndepărtează etanolul. (14) Extractul concentrat se lasă să se usuce în aer liber sau într-un SpeedVac ADN. (15) Se face o nouă suspensie de extract concentrat în 100 μl de apă ultrapură sterilă și se lasă la temperatura ambiantă timp de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
diferite, nediluate, și se folosesc 10 μl pentru o diluție de 1:100 (într-un tampon fosfat 0,01 M). Restul soluției de eșantion (49 μl) poate fi conservată la - 20 °C după ce i s-a adăugat un volum de etanol de 96 %. În cazul în care testul FISH trebuie repetat, se elimină etanolul prin centrifugare și se adaugă un volum echivalent de tampon fosfat 0,01 M (se amestecă în agitator). Figura 7.1. Configurația unei lame pentru testul FISH
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
într-un tampon fosfat 0,01 M). Restul soluției de eșantion (49 μl) poate fi conservată la - 20 °C după ce i s-a adăugat un volum de etanol de 96 %. În cazul în care testul FISH trebuie repetat, se elimină etanolul prin centrifugare și se adaugă un volum echivalent de tampon fosfat 0,01 M (se amestecă în agitator). Figura 7.1. Configurația unei lame pentru testul FISH ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échant. 1 = eșant
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
poate fi întreruptă în acest stadiu și întreprinsă hibridizarea a doua zi. Lamele trebuie păstrate la adăpost de praf, într-un loc uscat și la temperatura ambiantă. 7.2. Hibridizare 7.2.1. Se deshidratează celulele prin băi succesive de etanol de 50 %, 80 % și 96 % cu o durată de un minut fiecare. Se aranjează lamele pe un suport și se lasă la uscat în aer liber. 7.2.2. Se pregătește o cameră de incubare umedă căptușind fundul unei cutii
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]