10,924 matches
-
densitate corespunzătoare și incubate la 37 C. Pentru culturile unistratificate, numărul de celule pe cultură trebuie ajustat astfel încât în momentul prelevării culturile să nu fie confluente în proporție mai mare de 50%. Ca alternativă, se pot folosi suspensiile de culturi celulare. Culturile de limfocite umane se pot obține din sânge heparinizat, prin tehnici adecvate și sunt incubate la 37 C. Tratament Celulele aflate în stadiul de creștere exponențială se tratează cu substanța de testare pe o perioadă de timp corespunzătoare, în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Tratament Celulele aflate în stadiul de creștere exponențială se tratează cu substanța de testare pe o perioadă de timp corespunzătoare, în majoritatea cazurilor fiind suficiente una sau două ore. Durata tratamentului poate fi extinsă în anumite cazuri până la două cicluri celulare complete. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă corespunzătoare se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele se spală abundent pentru îndepărtarea substanței de testare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
abundent pentru îndepărtarea substanței de testare și se cultivă timp de două cicluri de replicare în prezența BrdU. Ca tehnică alternativă, celulele pot fi tratate simultan cu substanța de testare și BrdU pentru întreaga perioadă de cultură de două cicluri celulare. Culturile de limfocite umane trebuie tratate când sunt într-o stare semisincronă. Celulele trebuie analizate în perioada celei de-a doua diviziuni post-tratament, asigurând astfel expunerea la substanța chimică în cele mai sensibile stadii ale ciclului celular. Cu toate culturile
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de două cicluri celulare. Culturile de limfocite umane trebuie tratate când sunt într-o stare semisincronă. Celulele trebuie analizate în perioada celei de-a doua diviziuni post-tratament, asigurând astfel expunerea la substanța chimică în cele mai sensibile stadii ale ciclului celular. Cu toate culturile la care s-a adăugat BrdU se va lucra la întuneric sau iluminare slabă de la o sursă incandescentă până în momentul prelevării celulelor, pentru reducerea la minim a fotolizei ADN-ului care conține BrdU. Prelevarea celulelor Culturile se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
a SCE la martori. De obicei, cel puțin 25 de metafaze bine exprimate pe cultură sunt analizate în termeni de SCE. Lamele trebuie etichetate înainte de analiză. La limfocitele umane se analizează numai celulele care conțin 46 de centromeri. Pe liniile celulare bine caracterizate se analizează numai metafazele care conțin 2 centromeri din numărul modal. Trebuie precizat dacă marcarea joncțiunii centromerice este sau nu inventariată ca SCE. Rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
metafază și numărul de SCE pe cromozom pentru fiecare metafază. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, metodele de întreținere a culturilor celulare, - condițiile de desfășurare a testului: compoziția mediului, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, durata tratamentului, inhibitorul fusului de diviziune celulară folosit, concentrația acestuia și timpul de tratament cu acesta, tipul de sistem folosit pentru activarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, metodele de întreținere a culturilor celulare, - condițiile de desfășurare a testului: compoziția mediului, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, durata tratamentului, inhibitorul fusului de diviziune celulară folosit, concentrația acestuia și timpul de tratament cu acesta, tipul de sistem folosit pentru activarea metabolică la mamifere, martorii pozitivi și negativi, - numărul de culturi la fiecare punct experimental, - detalii despre tehnica folosită pentru prepararea lamelor, - numărul de metafaze analizate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
vitro induse de substanțele chimice asociate cu transformări maligne in vivo, se folosesc sisteme de cultură de celule de mamifere. Cele mai des utilizate celule sunt C3H10T1/2, 3T3, SHE și celule de la șobolani Fisher. Testele urmăresc modificările în morfologia celulară, formarea de focare sau modificări în dependența de ancorare pe agar-agar semisolid. Există sisteme folosite mai rar care depistează alte modificări celulare morfologice sau fiziologice în urma expunerii la substanțe chimice cancerigene. Nici unul din mecanismele testate in vitro nu are o
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
des utilizate celule sunt C3H10T1/2, 3T3, SHE și celule de la șobolani Fisher. Testele urmăresc modificările în morfologia celulară, formarea de focare sau modificări în dependența de ancorare pe agar-agar semisolid. Există sisteme folosite mai rar care depistează alte modificări celulare morfologice sau fiziologice în urma expunerii la substanțe chimice cancerigene. Nici unul din mecanismele testate in vitro nu are o legătură definită și directă cu cancerul. Anumite sisteme de testare pot detecta promotori tumorali. Citotoxicitatea poate fi determinată prin măsurarea efectelor materialului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
experimentale corespunzătoare testului de transformare efectuat. Substanța de testare Substanțele testate pot fi preparată în mediile de cultură sau dizolvate ori suspensionate într-un excipient adecvat, înainte de tratarea celulelor. Concentrația finală a excipientului în sistem nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară, rata de creștere sau incidența transformărilor. Activarea metabolică Celulele trebuie să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Dacă tipul celular folosit are activitate metabolică intrinsecă, natura acestei activități
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
excipientului în sistem nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară, rata de creștere sau incidența transformărilor. Activarea metabolică Celulele trebuie să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Dacă tipul celular folosit are activitate metabolică intrinsecă, natura acestei activități trebuie să fie cunoscută și adecvată clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi În fiecare experiment trebuie folosiți martori pozitivi, atât un compus cu activitate directă cât
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
între numărul de celule transformate și numărul de celule supraviețuitoare. Datele se evaluează prin metode statistice corespunzătoare. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - tipul de celule folosite, numărul de culturi celulare, metoda de menținere a culturilor, - condițiile experimentale: concentrația substanței de testare, excipientul folosit, timpul de incubare, durata și frecvența tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem exogen folosit pentru activarea metabolismului, martorii pozitivi și negativi, caracteristicile fenotipului monitorizat, tipul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - tipul de celule folosite, numărul de culturi celulare, metoda de menținere a culturilor, - condițiile experimentale: concentrația substanței de testare, excipientul folosit, timpul de incubare, durata și frecvența tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem exogen folosit pentru activarea metabolismului, martorii pozitivi și negativi, caracteristicile fenotipului monitorizat, tipul de sistem selectiv folosit (dacă este cazul), argumentarea alegerii dozelor, - metoda folosită pentru exprimarea numărului de celule viabile și transformate, - evaluarea statistică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
sarcinilor pre- și post-implantare. Estimarea efectului letal dominant total se bazează pe comparația dintre implanturile viabile la femelele din lotul tratat și la cele din lotul martor. Reducerea numărului de implanturi la anumite intervale de timp poate fi rezultatul morții celulare (a spermatocitului și/sau a spermatogoniei). 1.5. Criterii calitative Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Dacă este posibil, substanțele folosite se dizolvă sau se suspensionează într-o soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă pot fi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
În general, animalele sunt tratate cu o singură doză. După tratament, din lotul tratat cu doza maximă se recoltează trei probe la intervale diferite de timp, astfel încât a doua probă să fie prelevată după 24 de ore. Deoarece cinetica ciclului celular poate fi influențată de substanța de testare, se folosește un moment de prelevare precoce și unul tardiv, spațiate în mod convenabil în intervalul 6 - 48 de ore. Pentru alte niveluri suplimentare ale dozei de tratament, probele trebuie luate în intervalul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
o sută de metafaze cu număr complet de centromeri. Pentru a se evidenția un posibil efect citotoxic, se stabilește raportul dintre primele mitoze spermatogonice și a doua metafază meiotică, care poate fi determinat pe un număr total de 100 diviziuni celulare pe animal. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare animal tratat și martor întocmește o fișă individuală în care se consemnează tipul de aberație, numărul total de celule analizate și numărul total de celule cu aberații pentru fiecare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și patru săptămâni de la fătare, descendenții se codează și se examinează pentru observarea eventualelor pete apărute. Se disting trei categorii de pete: (a) pete albe de până la 5 mm pe linia medio-ventrală, despre care se presupune că apar prin moarte celulară (WMVS); (b) pete galbene, de tip agouti, dispuse în regiunile mamare, genitale, axilare și inghinale, pe gât, precum și în mijlocul frunții, despre care se presupune că apar ca urmare a procesului de nediferențiere (MDS); (c) pete pigmentare și pete albe distribuite
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de translocații și femelele XO prezintă o fertilitate scăzută, care este folosită la selecția descendenților F1 pentru efectuarea analizelor citogenetice. Sterilitatea completă este determinată de numeroase tipuri de translocații (X-autozom și tipul c-t). Translocarea se observă citogenetic în timpul meiozei celulare în diachineză-metafaza I la masculi, fie la masculi F1, fie la descendenți masculi ai unei femele F1. Femelele XO sunt identificate citogenetic prin prezența a doar 39 de cromozomi în mitozele celulare din măduva osoasă. 1.5. Criterii de calitate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
c-t). Translocarea se observă citogenetic în timpul meiozei celulare în diachineză-metafaza I la masculi, fie la masculi F1, fie la descendenți masculi ai unei femele F1. Femelele XO sunt identificate citogenetic prin prezența a doar 39 de cromozomi în mitozele celulare din măduva osoasă. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea testului Pregătire Substanțele de testare se dizolvă în soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă se dizolvă sau se suspensionează într-un excipient corespunzător. Se utilizează soluții
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
formula structurală, * puritatea substanței, * stabilitatea chimică în apă și lumină, * metode de analiză pentru cuantificarea substanței în apă, * valoarea pKa, * coeficientul de distribuție n-octanol/apă, * rezultatele unui test de biodegradabilitate efectuat anterior. 1.2. Definiții și unități de măsură Concentrația celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea concentrației celulare în perioada de testare; Rata de creștere: creșterea concentrației celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, reprezintă acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și lumină, * metode de analiză pentru cuantificarea substanței în apă, * valoarea pKa, * coeficientul de distribuție n-octanol/apă, * rezultatele unui test de biodegradabilitate efectuat anterior. 1.2. Definiții și unități de măsură Concentrația celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea concentrației celulare în perioada de testare; Rata de creștere: creșterea concentrației celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, reprezintă acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie a creșterii, fie a vitezei de creștere în comparație cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
valoarea pKa, * coeficientul de distribuție n-octanol/apă, * rezultatele unui test de biodegradabilitate efectuat anterior. 1.2. Definiții și unități de măsură Concentrația celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea concentrației celulare în perioada de testare; Rata de creștere: creșterea concentrației celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, reprezintă acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie a creșterii, fie a vitezei de creștere în comparație cu martorul. NOEC: (concentrația pentru care nu se observă nici un efect
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
la acțiunea diferitelor concentrații de substanță testată, pe câteva generații, în condiții definite. Se determină inhibarea creșterii prin comparație cu o cultură martor într-o perioadă dată. 1.5. Criterii de calitate 1.5.1. Condiții pentru validitatea testului Concentrația celulară din culturile martor trebuie să crească cu un factor de cel puțin 16 în decurs de trei zile. Dispariția substanței de testare din apă în biomasă nu invalidează în mod necesar testul. 1.6. Descrierea metodei de testare 1.6
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
egal ce 120 μE/m-2 și se poate obține cu lămpi fluorescente de 30 W de tip universal alb (temperatura luminii de aproximativ 4200 K), emițând aproximativ 8000 de lucși măsurați cu un colector sferic, * aparate pentru determinarea concentrației celulare, de ex. contoare de particule electronice, microscoape cu incinte de numărare, fluorimetru, spectrofotometru, colorimetru (Notă: Pentru a obține măsurători utile la concentrații celulare mici prin utilizarea unui spectrofotometru, ar putea fi necesară utilizarea cuvetelor cu fanta de cel puțin 4
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cultură și testare. Se preferă următoarele specii: - Selenastrum capricornutum, de exemplu, ATCC 22662, - Scenedesmus subspicatus, de exemplu, 86.81 SAG, - Chlorella vulgaris, CCAP 211/11b Dacă se folosesc alte specii, trebuie raportată sușa. 1.6.1.4. Planul testului Concentrația celulară inițială Concentrația celulară inițială recomandabilă pentru culturile testate este de circa 104 celule/ml pentru Selenastrum capricornutum și Scenedesmus subspicatus. Dacă se folosesc alte specii, biomasa trebuie să fie comparabilă. Concentrațiile substanței de testare Intervalul de concentrații în cadrul căruia este
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]