KorAP: Find »[drukola/base=incubare & drukola/pos=noun]« with Poliqarp

<1 ...6 7 8 ...45 >

1,102 matches

Corola-publishinghouse/Science/422_a_768

care pot fi tratate cu polilizină sau alți agenți, pentru a favoriza atașarea. Secțiunile de țesut sunt apoi incubate (timp de 4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
3 amino-9-etilcarba-zol (AEC), 4-cloro-1-naftol, diclorhidrat de p-fenilendiamină (pirocate-chol sau reactivul Hanker-Yates). Soluția substrat DAB se prepară înaintea utilizării, prin dizolvarea unei tablete DAB în 10 ml tampon PBS, pH-7. 4 și activarea extemporanee cu 15 picături de apă oxigenată 3%. Incubarea se rea lizează la temperatura camerei, și durează între 5 și 15 minute. Urmează spălarea lamelor în apă distilată și contracolorarea cu hematoxilină. Controale Procedeele de control sunt necesare pentru a verifica: dacă protocoalele de colorare au fost respectate întocmai

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
la parafină, printr-o tehnică în trei timpi. Secțiunile au fost inițial deparafinate, tratate pentru demascarea situsurilor antigenice cu soluție de demascare (DAKO Target Retrieval Solution), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a tehnicii de incubarea probelor, la 4 0 C, cu un anticorp primar de iepure, anti-neu uman. Etapa a doua a constat în incubarea cu anticorpul secundar, antiiepure, biotinilat, 10 minute, la temperatura camerei. În a treia etapă secțiunile au fost incubate cu complexul

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
de demascare (DAKO Target Retrieval Solution), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a tehnicii de incubarea probelor, la 4 0 C, cu un anticorp primar de iepure, anti-neu uman. Etapa a doua a constat în incubarea cu anticorpul secundar, antiiepure, biotinilat, 10 minute, la temperatura camerei. În a treia etapă secțiunile au fost incubate cu complexul enzimatic streptavidină-peroxidază (LSAB - DAKO), 10 minute, la temperatura camerei. Evidențierea activității enzimatice s-a realizat cu DAB/H 2 O

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
hidratare, secțiunile au fost supuse unei etape pregătitoare, de demascare a situsurilor antigenice, prin tratare cu soluție de demascare (Retrieval Antigen Solution - DAKO), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a protocolului de lucru a fost incubarea secțiunilor, la 4 0 C, cu nu anticorp monoclonal murin, anti-p53 uman (clona DO-7 - DAKO), anticorp ce are specificitate pentru un epitop comun, ceea ce face posibilă interacțiunea sa cu forma normală cât și cu cele mutante. În a doua etapă

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
0 C, cu nu anticorp monoclonal murin, anti-p53 uman (clona DO-7 - DAKO), anticorp ce are specificitate pentru un epitop comun, ceea ce face posibilă interacțiunea sa cu forma normală cât și cu cele mutante. În a doua etapă s-a realizat incubarea secțiunilor cu anticorpul secundar, biotinilat, la temperatura camerei, 10 minute. A treia etapă a constat în incubarea cu conjugatul enzimatic streptavidină - peroxidază, la temperatura camerei, 10 minute (metoda LSAB - DAKO). Activitatea enzimatică a fost relevată cu DAB/H 2 O

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
un epitop comun, ceea ce face posibilă interacțiunea sa cu forma normală cât și cu cele mutante. În a doua etapă s-a realizat incubarea secțiunilor cu anticorpul secundar, biotinilat, la temperatura camerei, 10 minute. A treia etapă a constat în incubarea cu conjugatul enzimatic streptavidină - peroxidază, la temperatura camerei, 10 minute (metoda LSAB - DAKO). Activitatea enzimatică a fost relevată cu DAB/H 2 O 2 pentru 10-12 minute, urmată de o etapă de contracolorare cu hematoxilină. Secțiunile colorate conform protocolului de

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
Dextran coated chorcoal assay) sau metoda dozei unice saturate Studiile DCC se bazează pe capacitatea cărbunelui activ de absorbție selectivă a hormonului liber, dar nu și a complexului hormon-receptor [270]. Din punct de vedere principial, un studiu DCC constă în incubarea probelor de citosol cu hormoni marcați radioactiv 3H-E, respectiv 3H-P. În paralel, sunt incubate, în același mod, probe de control pentru specificitate, care conțin, în plus, competitori hormonali (dietilstilbestrol, respectiv progesteronă sintetică), în exces. Incubarea este terminată prin adăugarea soluției

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
un studiu DCC constă în incubarea probelor de citosol cu hormoni marcați radioactiv 3H-E, respectiv 3H-P. În paralel, sunt incubate, în același mod, probe de control pentru specificitate, care conțin, în plus, competitori hormonali (dietilstilbestrol, respectiv progesteronă sintetică), în exces. Incubarea este terminată prin adăugarea soluției DCC. Cărbunele pe care este absorbit hormonul este sedimentat prin centrifugare. Radioactivitatea radiometric cu un spectrometru de radiații ( counter). Pentru o precizie cât mai ridicată a determinărilor, pentru fiecare persoană investigată, respectiv pentru fiecare probă

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
mai rapidă, ea tinde să capete o utilizare tot mai frecventă, mai ales în studii curente. Analiza SCATCHARD (metoda dozelor multiple de legare a ligandului) Metoda („analiza”) Scatchard de determinare a concentrației și ale caracteristicilor situsurilor de legare constă în incubarea probelor de citosol cu diferite concentrații de estradiol ce variază între două limite: a x 10-10 și respectiv, b x 10-8 M. Durata incubării și modul de prelucrare al probelor sunt identice cu cele utilizate pentru DCC; pentru fiecare concentrație

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
ligandului) Metoda („analiza”) Scatchard de determinare a concentrației și ale caracteristicilor situsurilor de legare constă în incubarea probelor de citosol cu diferite concentrații de estradiol ce variază între două limite: a x 10-10 și respectiv, b x 10-8 M. Durata incubării și modul de prelucrare al probelor sunt identice cu cele utilizate pentru DCC; pentru fiecare concentrație de E2 marcat se realizează triplicate, atât în cazul legării totale, B T , cât și în cazul legării nespecifice BN. Legarea specifică, B S

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
cele două loturi de paciente studiate. Analiza expresiei ER și PR s-a efectuat prin metoda imunohistochimică. Studiul a fost realizat pe secțiuni obținute din formațiunea tumorală inclusă la parafină. Din punct de vedere tehnic, se descriu trei timpi principali: incubarea cu anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit-ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
paciente studiate. Analiza expresiei ER și PR s-a efectuat prin metoda imunohistochimică. Studiul a fost realizat pe secțiuni obținute din formațiunea tumorală inclusă la parafină. Din punct de vedere tehnic, se descriu trei timpi principali: incubarea cu anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit-ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit-ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpii primari s-a efectuat la 4 0 C. Au fost folosiți 2 anticorpi monoclonali: un anticorp monoclonal murin, cu specificitate pentru receptorul estrogenic uman (clona 1 D5 - DAKO) și un anticorp monoclonal murin cu specificitate pentru receptorul

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
C. Au fost folosiți 2 anticorpi monoclonali: un anticorp monoclonal murin, cu specificitate pentru receptorul estrogenic uman (clona 1 D5 - DAKO) și un anticorp monoclonal murin cu specificitate pentru receptorul progesteronic uman (clona PgR 636 - DAKO). A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpii murini primari. Etapa a treia a constat în tratarea secțiunilor cu streptavidină-peroxidază (kit-ul de vizualizare LSAB - DAKO

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
alte paciente, preoperator s-au aplicat chimiosau radioterapia. Analiza expresiei pS2 s-a efectuat prin metoda imuno-histochimică. Studiul a fost realizat pe secțiuni obținute din formațiunea tumorală inclusă la parafină. Din punct de vedere tehnic, se descriu trei timpi principali: incubarea cu anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
au aplicat chimiosau radioterapia. Analiza expresiei pS2 s-a efectuat prin metoda imuno-histochimică. Studiul a fost realizat pe secțiuni obținute din formațiunea tumorală inclusă la parafină. Din punct de vedere tehnic, se descriu trei timpi principali: incubarea cu anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
anticorpi primari, incubarea cu anticorp secundar, tratarea secțiunilor cu kit ul de vizualizare. Secțiunile au fost deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpul primari s-a efectuat la 4 0 C. A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s-a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpul primar. Etapa

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
deparafinate, rehidratate și tratate termic (98 0 C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpul primari s-a efectuat la 4 0 C. A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s-a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpul primar. Etapa a treia a constat în tratarea secțiunilor cu streptavidină-peroxidază (kit-ul de vizualizare LSAB - DAKO). Activitatea

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
determinat concentrațiile proteice prin metoda spectrofotometrică a diferenței de absorbanța între 280 și 310 nm, descrisă în paragraful 6. 5. Pentru fiecare probă de citosol s-au realizat duplicate, concentrația fiind calculată ca medie a celor două determinări. A urmat incubarea citosolului cu hormon marcat pentru determinarea legării "totale" BT , cu hormon marcat și competitor neradioactiv (DES = dietilstilbestrol; ORG = progesteron sintetică: 16-etil-hidroxi-19-nor-(6,8 3H)pregn-4-en-2,3-dionă); HCO = hidrocortizon), pentru calculul legării „nespecifice" B N volumele luate în lucru pentru fiecare

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
parte sunt prezentate în tabelele 4. Volumul final a fost de 200 l, iar concentrația de proteină a fost de 3 mg/ml. . Pentru reducerea erorilor, pentru fiecare caz în parte s-au realizat triplicate, rezultatele finale fiind media determinărilor. Incubarea s-a făcut peste noapte, în frigider, la o temperatură de aproximativ 4C. În paralel, în prima zi, s-au determinat "fondurile", respectiv radioactivitatea fiolelor în care se fac determinările de proteină; "fondul" a fost ulterior scăzut din valorile radioactivităților

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
temperatură de aproximativ 4C. În paralel, în prima zi, s-au determinat "fondurile", respectiv radioactivitatea fiolelor în care se fac determinările de proteină; "fondul" a fost ulterior scăzut din valorile radioactivităților "totalelor" sau "nespecificelor". A doua zi s-a continuat incubarea, timp de 2 ore, la temperatura camerei (25C). S-au adăugat apoi 250 mg de cărbune activ cu excepția "totalelor". Probele au fost omogenizate puternic, la un agitator de tip "vortex", după care s-a sedimentat cărbunele prin centrifugarea timp de

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
utilizat probe provenind din tumori mamare umane și din uter de șobolan-femelă (Rattus norveticus) imature. Un experiment care durează două zile cuprinde mai multe etape: 1. Extracția citosolului; 2. Determinarea concentrației proteice a citosolului; 3. Formarea complexelor proteice - [3H]estrogen (incubare peste noapte la 4 C, urmată de stopare cu cărbune DCC); 4. Pregătirea gelului de poliacrilamidă; 5. Separarea electroforetică (condiții: 20mA/100V); probe evidențiate cu albastru de bromfenol 0,02% (2 mg/ml apă bidistilată); 6. Porționarea gelului și măsurarea

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
eprubetele; se adaugă câte 200 l de „standard”, „control” și „probe” (diluate) în eprubetele corespunzătoare; se omogenizează ușor conținutul eprubetelor, cu ajutorul unui agitator de tip „Vortex”; se incubează conținutul eprubetelor timp de o oră, sub agitare, la temperatura camerei. după incubare se spală conținutul eprubetelor, de trei ori, cu apă distilată; de fiecare dată se îndepărtează apa de spălare. Îndepărtarea apei trebuie să fie cât mai accentuată, pentru a nu influența citirile. se determină radioactivitatea (exprimată în „cpm” = counts per minute

CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID (2009) [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
Corola-publishinghouse/Science/756_a_1051

de dorință persistentă de a găsi soluția. Pe plan artistic, această mișcare de date și energii între conștient și inconștient, poate deveni o obsesie a imaginilor, ideilor artistice, obsesie constructivă care duce la conturarea ideilor operei de artă. Faza de incubare este asemenea unei magazii de reprezentări vizuale estetice mintale (exemplu: cunoștințe privind expresia unor elemente de limbaj plastic, diferite semne simbol , semnificații, etc.Ă. Urmează mai multe încercări de combinare pe baza unor relații și a găsirii unor configurații originale

CREATIVITATEA ÎN CONTEXTUL EDUCAŢIEI ESTETICE / Metode și tehnici de dezvoltare by Marieana Lucianu/Adriana Munteanu (2009) [Corola-publishinghouse/Science/756_a_1051]