20,996 matches
-
lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T 2T => diluțiile duble ale antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T 2T => diluțiile duble ale antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale ale extractului concentrat resuspendat
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale ale extractului concentrat resuspendat Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă Se acoperă ferestrele de test cu diluția sau diluțiile antiserului. În ferestrele FITC
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale ale extractului concentrat resuspendat Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă Se acoperă ferestrele de test cu diluția sau diluțiile antiserului. În ferestrele FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în ferestre
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale ale extractului concentrat resuspendat Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă Se acoperă ferestrele de test cu diluția sau diluțiile antiserului. În ferestrele FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
câmp microscopic și se calculează numărul de celule (N) pe ml de extract concentrat resuspendat (apendicele 4). O populație de aproximativ 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat este considerată a fi limita de sensibilitate pentru testul IF, - pentru eșantioane cu N > 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat, testul IF este considerat pozitiv, - pentru eșantioane cu N < 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat testul IF poate fi considerat pozitiv, (iii) dacă se observă un număr mare
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
O populație de aproximativ 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat este considerată a fi limita de sensibilitate pentru testul IF, - pentru eșantioane cu N > 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat, testul IF este considerat pozitiv, - pentru eșantioane cu N < 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat testul IF poate fi considerat pozitiv, (iii) dacă se observă un număr mare (>105 celule pe ml) de celule incomplet sau slab fluorescente în titrul antiserului, trebuie efectuat un al
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de cartof de control negativ și un control salin tamponat fosfatic (PBS). Se folosește o suspensie de > 106 celule pe ml dintr-o sușă corespunzătoare de rasă/biovar de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează în mod identic cu eșantionul sau eșantioanele, dar separat de eșantioanele de pe placa de microtitru. 3.1. Se pipetează 100 - 200 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. Se încălzește timp de 4 minute la 100 șC. Se pune microfiola la gheață. 3.2
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de control negativ și un control salin tamponat fosfatic (PBS). Se folosește o suspensie de > 106 celule pe ml dintr-o sușă corespunzătoare de rasă/biovar de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează în mod identic cu eșantionul sau eșantioanele, dar separat de eșantioanele de pe placa de microtitru. 3.1. Se pipetează 100 - 200 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. Se încălzește timp de 4 minute la 100 șC. Se pune microfiola la gheață. 3.2. Se adaugă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
un control salin tamponat fosfatic (PBS). Se folosește o suspensie de > 106 celule pe ml dintr-o sușă corespunzătoare de rasă/biovar de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează în mod identic cu eșantionul sau eșantioanele, dar separat de eșantioanele de pe placa de microtitru. 3.1. Se pipetează 100 - 200 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. Se încălzește timp de 4 minute la 100 șC. Se pune microfiola la gheață. 3.2. Se adaugă un volum egal de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
aplică 100 μl în puțuri. Se incubează timp de 30 de minute până la o oră în întuneric la temperatura camerei. 3.10. Se citește absorbanța la 409 nm. Interpretarea testului ELISA: Testul ELISA este negativ dacă densitatea optică (DO) a eșantionului este < 2 × DO a controlului negativ. Testul ELISA este pozitiv dacă densitatea optică (DO) a eșantionului este > 2 × DO a controlului negativ. 4. Testul PCR În baza Seal et al., 1993 Notă: În timpul tuturor etapelor de pregătire a eșantioanelor și
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
întuneric la temperatura camerei. 3.10. Se citește absorbanța la 409 nm. Interpretarea testului ELISA: Testul ELISA este negativ dacă densitatea optică (DO) a eșantionului este < 2 × DO a controlului negativ. Testul ELISA este pozitiv dacă densitatea optică (DO) a eșantionului este > 2 × DO a controlului negativ. 4. Testul PCR În baza Seal et al., 1993 Notă: În timpul tuturor etapelor de pregătire a eșantioanelor și a altor manipulări care implică PCR trebuie folosite conuri de pipetă cu filtru. Se prepară o
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
a eșantionului este < 2 × DO a controlului negativ. Testul ELISA este pozitiv dacă densitatea optică (DO) a eșantionului este > 2 × DO a controlului negativ. 4. Testul PCR În baza Seal et al., 1993 Notă: În timpul tuturor etapelor de pregătire a eșantioanelor și a altor manipulări care implică PCR trebuie folosite conuri de pipetă cu filtru. Se prepară o suspensie de 106 celule pe ml dintr-o sușă din rasa 3 / biovar 2 de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează într-
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
care implică PCR trebuie folosite conuri de pipetă cu filtru. Se prepară o suspensie de 106 celule pe ml dintr-o sușă din rasa 3 / biovar 2 de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează într-un mod identic cu eșantionul sau eșantioanele. 4.1. Se pipetează 100 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. În mod alternativ, se tranferă 90 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă conținând 10 μl de 0,5M de NaOH. Se amestecă întorcând
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
PCR trebuie folosite conuri de pipetă cu filtru. Se prepară o suspensie de 106 celule pe ml dintr-o sușă din rasa 3 / biovar 2 de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. Se testează într-un mod identic cu eșantionul sau eșantioanele. 4.1. Se pipetează 100 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. În mod alternativ, se tranferă 90 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă conținând 10 μl de 0,5M de NaOH. Se amestecă întorcând în mod
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
din amestec în fiole PCR sterile. Fiolele cu amestecul de reacție PCR se păstrează la gheață. Pentru volume de reacție de 25 μl: Se diminuează corespunzător componenții. 4.5. Amplificarea PCR 4.5.1. Opțional: se centrifughează pulsatoriu fiolele cu eșantionul fiert și cu controlul pozitiv. Se adaugă în fiolele cu amestecul de reacție PCR, în ordinea specificată, 2-5 μl din eșantion sau eșantioane, apă și controlul pozitiv. Se pun fiolele în blocul de încălzire al ciclorului termic de ADN. 4
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
25 μl: Se diminuează corespunzător componenții. 4.5. Amplificarea PCR 4.5.1. Opțional: se centrifughează pulsatoriu fiolele cu eșantionul fiert și cu controlul pozitiv. Se adaugă în fiolele cu amestecul de reacție PCR, în ordinea specificată, 2-5 μl din eșantion sau eșantioane, apă și controlul pozitiv. Se pun fiolele în blocul de încălzire al ciclorului termic de ADN. 4.5.2. Se rulează următorul program: 1 ciclu de: (i) 2 minute la 96 °C: denaturarea modelului 50 cicluri de: (ii
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Se diminuează corespunzător componenții. 4.5. Amplificarea PCR 4.5.1. Opțional: se centrifughează pulsatoriu fiolele cu eșantionul fiert și cu controlul pozitiv. Se adaugă în fiolele cu amestecul de reacție PCR, în ordinea specificată, 2-5 μl din eșantion sau eșantioane, apă și controlul pozitiv. Se pun fiolele în blocul de încălzire al ciclorului termic de ADN. 4.5.2. Se rulează următorul program: 1 ciclu de: (i) 2 minute la 96 °C: denaturarea modelului 50 cicluri de: (ii) 20 de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Se îndepărtează pieptenul. Gelul se introduce în ETA astfel încât să fie acoperit 2 - 3 mm de tampon. 4.6.4 Se pun 3 μl de picături de tampon de încărcare pe parafilm. Se adaugă 12 μl din produsul PCR din eșantion, din controlul pozitiv sau din controlul de apă și de amestecă prin aspirarea ușoară în conul pipetei înainte de încărcare. Volumele date pot fi modificate pentru a corespunde capacității puțurilor din mediul agarizat. 4.6.5 Puțurile se încarcă atent cu
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
izolate colonii caracteristice de Ralstonia solanacearum. 6. Testul de probă biologică În baza Janse, 1988. 6.1 Se utilizează până la 10 plante test de răsad de tomată sau de vinete în stadiul celei de a treia frunze adevărate pentru fiecare eșantion. Plantele de test nu se udă cu 24 de ore înaintea inoculării. 6.2 Se distribuie 100 μl de extract concentrat resuspendat între plantele de test. Se inoculează în tulpină între cotiledoane și în unul sau mai multe alte locuri
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
timp de 15 minute. Se răcește la 50 °C. Se adaugă o soluție apoasă sterilizată prin filtrare de clorurăr de trifeniltetrazoliu (Sigma) pentru obținerea concentrației finale de 50 mg la litru. Se toarnă pe plăci. Apendicele 2 Materiale pentru pregătirea eșantioanelor Tampon de macerare: 50 mM tampon fosfat, pH 7,0 Acest tampon este utilizat la macerarea țesuturilor. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1 litru Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul. Se divizează în
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cazuri, orice altă metodă aprobată oficial, și pentru care este așteptată confirmarea sau infirmarea prin finalizarea respectivei metode, ar trebui să se păstreze și să conserve în mod corespunzător: - lotul sau o parte din acesta (din care au fost luate eșantioanele) în ambalajul original etichetat, de câte ori este posibil, - partea rămasă din eșantioane, de câte ori este posibil, - orice rest de extras și material preparat suplimentar pentru testul sau testele de triere, de exemplu lamele de imunofluorescență, și - toată documentația relevantă, până la finalizarea respectivei
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
confirmarea sau infirmarea prin finalizarea respectivei metode, ar trebui să se păstreze și să conserve în mod corespunzător: - lotul sau o parte din acesta (din care au fost luate eșantioanele) în ambalajul original etichetat, de câte ori este posibil, - partea rămasă din eșantioane, de câte ori este posibil, - orice rest de extras și material preparat suplimentar pentru testul sau testele de triere, de exemplu lamele de imunofluorescență, și - toată documentația relevantă, până la finalizarea respectivei metode. 2. În cazul confirmării organismului, ar trebui să se păstreze
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
sau testele de triere, de exemplu lamele de imunofluorescență, și - toată documentația relevantă, până la finalizarea respectivei metode. 2. În cazul confirmării organismului, ar trebui să se păstreze să și conserve în condiții corespunzătoare: - materialul prevăzut în alin. (1), și - un eșantion din tomata sau vânăta infectată inoculată cu extractul de plantă sau tubercul, dacă este cazul, și - cultura izolată a organismului, până cel puțin o lună după procedura de notificare prevăzută în art. 5 alin. (2). ANEXA IV Elementele din investigația
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ambalajele trebuie să poarte o etichetă oficială care cuprinde cel puțin următoarele indicații: - serviciul de certificare și statul membru sau sigla lor distinctă, - numărul de referință al lotului, - luna și anul sigilării sau - luna și anul ultimei prelevări oficiale de eșantioane în vederea certificării, - specia, indicată cel puțin cu denumirea botanică, care poate figura sub forma abreviată și fără numele autorilor, cu caractere romane, - varietatea, indicată cel puțin cu caractere romane, - mențiunea "semințe prebază", - număr de generații anterioare semințelor din categoria "semințe
jrc3708as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88869_a_89656]