10,615 matches
-
compușilor organici insolubili în apă, trebuie să se utilizeze soluții de cel mult 2% v/v solvenți organici precum etanolul, acetona sau dimetilsulfoxidul (DMSO). Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze semnificativ viabilitatea celulară și caracteristicile de creștere. Activare metabolică Celulele trebuie expuse la substanțele de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen de activare metabolică. Cel mai utilizat sistem este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de rozătoare tratate cu inductori
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
acetona sau dimetilsulfoxidul (DMSO). Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze semnificativ viabilitatea celulară și caracteristicile de creștere. Activare metabolică Celulele trebuie expuse la substanțele de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen de activare metabolică. Cel mai utilizat sistem este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. Pentru activarea metabolică, pot fi folosite și alte specii, țesuturi, fracțiuni postmitocondriale sau alte metode. Condiții experimentate Sușe testate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
la substanțele de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen de activare metabolică. Cel mai utilizat sistem este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. Pentru activarea metabolică, pot fi folosite și alte specii, țesuturi, fracțiuni postmitocondriale sau alte metode. Condiții experimentate Sușe testate Sușele cel mai des utilizate în studiile de potențial mutagen sunt sușa haploidă XV185-14C și sușa diploidă D7. Se pot utiliza și alte sușe
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
5 x 107 celule/ml sunt expuse la substanța chimică testată pe o perioadă de 18 ore, la o temperatură de 28 - 37˚C, cu agitare; dacă este necesar; pe parcursul expunerii, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului, celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate pe un mediu de cultură potrivit. După incubație, cutiile sunt inventariate în vederea stabilirii ratei de supraviețuire și a mutațiilor genice produse. Dacă primul experiment este negativ, trebuie realizat un al doilea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: ― sușele folosite, ― condițiile experimentale: celule în faza staționară sau celule în creștere, compoziția mediilor de cultură, temperatura de incubație și durata acesteia, sistemul de activare metabolică, ― condițiile de tratament: niveluri de expunere, metoda și durata tratamentului, temperatura la care se realizează tratamentul, martori pozitivi și negativi, ― numărul coloniilor, numărul mutantelor, frecvența coloniilor supraviețuitoare și a mutantelor, relația doză/răspuns (dacă este cazul), evaluarea statistică a datelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cazul compușilor organici insolubili în apă, trebuie utilizate soluții de cel mult 2% v/v de solvenți organici precum etanolul, acetona sau dimetilsulfoxidul (DMSO). Concentrația finală a excipientului trebuie să nu afecteze semnificativ viabilitatea celulară și caracteristicile de creștere. Activare metabolică Celulele trebuie să fie expuse la substanțele de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică. Sistemul folosit cel mai des este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
DMSO). Concentrația finală a excipientului trebuie să nu afecteze semnificativ viabilitatea celulară și caracteristicile de creștere. Activare metabolică Celulele trebuie să fie expuse la substanțele de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică. Sistemul folosit cel mai des este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. Pentru activarea metabolică pot fi utilizate și alte specii, țesuturi, fracțiuni postmitocondriale sau alte metode. Condițiile de desfășurare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică. Sistemul folosit cel mai des este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. Pentru activarea metabolică pot fi utilizate și alte specii, țesuturi, fracțiuni postmitocondriale sau alte metode. Condițiile de desfășurare a testului Sușe celulare testate Sușele utilizate cel mai frecvent folosite sunt cele diploide D4, D5, D7 și JD1. Pot fi utilizate și alte sușe
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
5 x 107 celule/ml sunt expuse la substanța chimică testată pe o perioadă de 18 ore, la o temperatură de 28 - 37˚C, cu agitare; dacă este cazul, pe parcursul tratamentului, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate pe un mediu de cultură potrivit. După incubație, cutiile se inventariază în vederea stabilirii ratei de supraviețuire și a mutațiilor genice produse. Dacă primul experiment este negativ, trebuie realizat un al doilea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: ― sușele folosite, ― condițiile experimentale: celule în faza staționară sau în faza de creștere, compoziția mediilor de cultură, temperatura de incubație și durata acesteia, sistemul de activare metabolică, ― condițiile de tratament: concentrațiile de expunere, procedura și durata tratamentului, temperatura la care se realizează tratamentul, martorii pozitivi și negativi, ― numărul coloniilor, numărul recombinantelor, supraviețuirea și frecvența recombinării, relația doză/răspuns (dacă este cazul), evaluarea statistică a datelor, ― discutarea rezultatelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanța de testare fie poate fi preparată în mediul de cultură, fie poate fi dizolvată sau suspensionate într-un excipient corespunzător. Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul, - hicantona. - compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
spontane; regula generală constă în utilizarea unui număr de celule viabile care să fie de 10 ori inversul frecvenței mutațiilor spontane. Celulele trebuie expuse o perioadă corespunzătoare, în cele mai multe cazuri fiind suficiente două până la cinci ore. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele sunt spălate în vederea îndepărtării substanței de testare și cultivate pentru determinarea viabilității și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Celulele trebuie expuse o perioadă corespunzătoare, în cele mai multe cazuri fiind suficiente două până la cinci ore. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele sunt spălate în vederea îndepărtării substanței de testare și cultivate pentru determinarea viabilității și pentru a permite expresia fenotipului mutant. La sfârșitul perioadei de expresie, care trebuie să fie suficientă pentru a permite expresia fenotipică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și subculturile și schemele de alimentare), durata tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem de activare metabolică la mamifere folosit, martorii pozitivi și negativi, tipul de agent selectiv folosit, - argumentarea alegerii dozelor, - metoda folosită pentru exprimarea numărului de celule viabile și mutante, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
determina prin autoradiografiere sau prin LSC (liquid scintillation counting) ADN-ului din celulele tratate. Cu excepția cazului când se folosesc hepatocite de șobolan, culturile de celule de mamifere se tratează cu agentul testat cu și fără un sistem exogen de activare metabolică. USD poate fi măsurată prin tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică. Concentrații de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare, alese într-un interval adecvat pentru definirea răspunsului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică. Concentrații de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare, alese într-un interval adecvat pentru definirea răspunsului. Concentrația maximă trebuie să producă unele efecte citotoxice. Compușii relativ insolubili în apă trebuie testați până la limita superioară a solubilității
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Celule Mediile de creștere, concentrația CO2, temperatura și umiditatea adecvate sunt necesare pentru menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Mediile de creștere, concentrația CO2, temperatura și umiditatea adecvate sunt necesare pentru menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu o densitate corespunzătoare în vase de cultură și incubate la 37 C. Culturile pe termen scurt de hepatocite de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]