4,377 matches
-
atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
bine caracterizate (de exemplu, celule ovariene de hamster chinezesc). Liniile celulare trebuie verificate pentru a decela contaminarea cu Mycoplasma. * Trebuie folosite medii de cultură și condiții de incubare (de exemplu temperatură, vase de cultură, concentrația CO2 și umiditate) corespunzătoare. * Substanțele testate pot fi preparate în mediul de cultură sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat înainte de începerea tratamentului celulelor. Concentrația finală de excipient în mediul de cultură nu trebuie să afecteze în mod semnificativ viabilitatea celulară sau rata de creștere
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Alternativ, dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să fie corespunzătoare clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Numărul de culturi Pentru fiecare punct experimental se folosesec cel puțin două culturi. Folosirea martorilor pozitivi și negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce necesită
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pentru a depista absența masculilor din tulpinile sălbatice. Dacă o cultură provine dintr-o femelă F1 purtătoare de genă letală în cromozomul X parental (de exemplu, nu se observă masculi cu cromozomul tratat), fiicele acestei femele cu același genotip trebuie testate pentru a se constata dacă gena letală se repetă în generația următoare. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele în care se specifică numărul de cromozomi X testați, numărul de masculi nefertili și numărul de cromozomi letali la fiecare concentrație
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
observă masculi cu cromozomul tratat), fiicele acestei femele cu același genotip trebuie testate pentru a se constata dacă gena letală se repetă în generația următoare. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele în care se specifică numărul de cromozomi X testați, numărul de masculi nefertili și numărul de cromozomi letali la fiecare concentrație de expunere și pentru fiecare perioadă de împerechere, pentru fiecare mascul tratat. Trebuie raportat numărul de clustere de diferite dimensiuni per mascul. Aceste rezultate trebuie confirmate într-un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
detecta promotori tumorali. Citotoxicitatea poate fi determinată prin măsurarea efectelor materialului testat asupra capacităților de formare de colonii (eficiența de clonare) sau asupra ratei de creștere a culturilor. Măsurarea citotoxicității are rolul de a stabili dacă expunerea la substanța chimică testată are relevanță toxicologică, dar nu poate fi folosită pentru a calcula frecvența transformărilor în toate testele, deoarece unele dintre acestea pot necesita incubare prelungită și/sau recultivare. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
manifestă modificări fenotipice corespunzătoare după expunerea la un agent cancerigen cunoscut și că testul efectuat are o validitate și o fiabilitate demonstrate și documentate. Mediu Se utilizează medii și condiții experimentale corespunzătoare testului de transformare efectuat. Substanța de testare Substanțele testate pot fi preparată în mediile de cultură sau dizolvate ori suspensionate într-un excipient adecvat, înainte de tratarea celulelor. Concentrația finală a excipientului în sistem nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară, rata de creștere sau incidența transformărilor. Activarea metabolică Celulele trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Dacă tipul celular folosit are activitate metabolică intrinsecă, natura acestei activități trebuie să fie cunoscută și adecvată clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi În fiecare experiment trebuie folosiți martori pozitivi, atât un compus cu activitate directă cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (pentru excipient). Printre exemplele
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
ale substanței de testare. Acestea trebuie să prezinte efect toxic în funcție de concentrație, concentrația maximă determinând un nivel scăzut de supraviețuire, iar supraviețuirea la concentrația minimă fiind aproximativ aceeași cu cea de la martorul negativ. Pentru substanțele relativ insolubile în apă trebuie testată limita superioară a solubilității, folosind procedee corespunzătoare. Pentru substanțele netoxice, foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Celulele se tratează o perioadă corespunzătoare, în funcție de sistemul de testare utilizat, acest
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Efectele genei letale dominante determină moartea embrionului sau a fetusului. Inducerea genelor letale dominante prin expunere la o substanță chimică indică faptul că acea substanță a acționat la nivelul țesutului germinativ al speciei testate. Este cunoscut faptul că genele letale dominante se datorează unei anomalii cromozomiale (numerice și structurale). Moartea embrionului, în cazul în care femelele sunt tratate poate fi cauzată și de efecte toxice. În general, masculii se tratează cu substanța de testare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
fi dizolvate sau suspensionate în excipiente corespunzătoare. Excipientul folosit nu trebuie să interfereze chimic cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Pentru testarea chimică, se folosesc preparate proaspete. Condiții experimentale Calea de administrare De regulă, compusul testat trebuie administrat o singură dată. Pe baza informațiilor toxicologice se poate utiliza un test cu administrare repetată. Căile normale de administrare sunt: intubarea orală sau injectarea intraperitoneală. Se pot folosi și alte căi de administrare convenabile. Animale de experiență Se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Se utilizează un număr corespunzător de masculi tratați, luând în considerare variația spontană a caracterelor biologice evaluate. Numărul se stabilește în funcție de sensibilitatea predeterminată a detectării și de mărimea semnificației. De exemplu, în cadrul unui test tipic, numărul masculilor din fiecare lot testat trebuie să fie suficient pentru a asigura între 30 - 50 de femele gestante în fiecare perioadă de împerechere. Martori negativi și pozitivi În general, în fiecare experiment se utilizează substanțe martor pozitive și negative. Când experimente efectuate recent în același
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - specie, linie, vârsta și greutatea animalelor, numărul animalelor pe sexe folosite atât în lotul tratat cât și în lotul martor, - substanța de testare, excipientul, criterii de selecționare a dozelor testate, substanțe folosite ca martor negativ și pozitiv, date de toxicitate, - calea de administrare și schema de tratament, - schema de împerechere, - metoda folosită pentru confirmarea împerecherii, - momentul sacrificării animalelor, - criteriul de inventariere a genelor letale dominante, - relația doză/răspuns, - evaluarea statistică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
apoi colorate, care se examinează microscopic. Analiza spermatocitelor în stadiul diachineză-metafaza I permite obținerea unor informații suplimentare referitoare la translocarea multivalentă a spermatogoniei, în urma tratamentului. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Substanțele chimice testate se dizolvă în soluție izotonică salină. Dacă sunt insolubile, acestea se dizolvă sau se suspensionează în excipiente corespunzătoare. Se utilizează soluții proaspăt preparate. Excipientul folosit pentru realizarea soluției nu trebuie să interfereze cu substanța de testare și nu trebuie să
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
va fi comparată cu media petelor rezultată de la embrionii tratați doar cu solvent. Testul petei decelează apariția presupuselor mutații somatice ce survin în celulele fetale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei Pregătire Dacă este posibil, substanțele testate se dizolvă sau se suspensionează în soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă sunt dizolvate sau suspensionate în excipienți corespunzători. Excipientul nu trebuie să interfereze cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Se utilizează soluții
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
posibil, informațiile următoare: ― liniile folosite la împerechere, ― numărul femelelor gestante din loturile de experiment și loturile martor, ― media numărului de pui dintr-o serie, la loturile de experiment și loturile martor, la naștere și la înțărcare; ― nivelurile dozei de substanță testate, ― solventul utilizat; ― ziua de gestație în care s-a efectuat tratamentul; ― calea de administrare; ― numărul total de pui și numărul cu WMVS, MDS și RS la loturile de experiment și loturile martor, ― malformațiile macroscopice, ― relația doză-răspuns la RS dacă este
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
din punct de vedere sexual. Numărul animalelor Numărul de animale necesare depinde de frecvența apariției translocațiilor spontane și de rata minimă de inducție necesară pentru un rezultat pozitiv. De obicei, testul se efectuează pe masculi din prima generație (F1). Trebuie testați cel puțin 500 de masculi F1 pe lot. Dacă experimentul include și femele F1, sunt necesari 300 de masculi și 300 de femele. Martori negativi și pozitivi Ca martori se pot folosi rezultatele obținute de la lotul martor pregătit simultan sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
stabilită prin observații asupra numărului puilor și/sau prin analizarea conținutului uterin la femelele gestante. Criteriile de determinare a fertilități normale sau reduse trebuie stabilite pentru rasa de șoareci folosită. Observații asupra numărului de pui dintr-o serie: Masculii F1 testați sunt puși în cuști individuale cu femele fie din același experiment, fie din colonie. Cuștile se verifică zilnic începând cu a 18-a zi de la împerechere. La fătare, se înregistrează numărul și sexul descendenților F2, care apoi sunt eliminați. Dacă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
sau sunt supuse direct analizelor citogenetice. Examinarea conținutului uterin: Reducerea numărului de pui la o fătare în cazul purtătorilor de translocații se datorează morții embrionilor, astfel încât un număr mare de implanturi moarte este un indiciul al prezenței translocațiilor la animalele testate. Masculii F1 testați sunt împerecheați cu două-trei femele fiecare. Momentul concepției se stabilește prin examinarea zilnică, dimineața, în vederea decelării prezenței dopului vaginal. Femelele se sacrifică în a 14 - 16-a zi de gestație, înregistrându-se apoi implanturile vii sau moarte
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
direct analizelor citogenetice. Examinarea conținutului uterin: Reducerea numărului de pui la o fătare în cazul purtătorilor de translocații se datorează morții embrionilor, astfel încât un număr mare de implanturi moarte este un indiciul al prezenței translocațiilor la animalele testate. Masculii F1 testați sunt împerecheați cu două-trei femele fiecare. Momentul concepției se stabilește prin examinarea zilnică, dimineața, în vederea decelării prezenței dopului vaginal. Femelele se sacrifică în a 14 - 16-a zi de gestație, înregistrându-se apoi implanturile vii sau moarte din uterul fiecăreia
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Preparatele testiculare se obțin prin tehnica de uscării la aer. Purtătorii de translocații se identifică prin prezența configurațiilor multivalente la diachineză-metafaza I la nivelul spermatociților primari. Prezența a cel puțin două celule cu asociații multivalente constituie dovada necesară că animalul testat este purtătorul unei translocații. Dacă nu s-a produs nici o selecție prin reproducere, toți masculii F1 se examinează citogenetic. Se analizează microscopic minim 25 de celule în faza de diachineză-metafaza I pentru fiecare mascul. Examinarea metafazei mitotice în spermatogonii sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
referință, rezultatele se indică în protocolul de test. Dicromatul de potasiu poate fi utilizat ca substanță de referință. 1.4. Principiul metodei de testare Culturi cu creștere exponențială de alge verzi selecționate se expun la acțiunea diferitelor concentrații de substanță testată, pe câteva generații, în condiții definite. Se determină inhibarea creșterii prin comparație cu o cultură martor într-o perioadă dată. 1.5. Criterii de calitate 1.5.1. Condiții pentru validitatea testului Concentrația celulară din culturile martor trebuie să crească
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
capricornutum, de exemplu, ATCC 22662, - Scenedesmus subspicatus, de exemplu, 86.81 SAG, - Chlorella vulgaris, CCAP 211/11b Dacă se folosesc alte specii, trebuie raportată sușa. 1.6.1.4. Planul testului Concentrația celulară inițială Concentrația celulară inițială recomandabilă pentru culturile testate este de circa 104 celule/ml pentru Selenastrum capricornutum și Scenedesmus subspicatus. Dacă se folosesc alte specii, biomasa trebuie să fie comparabilă. Concentrațiile substanței de testare Intervalul de concentrații în cadrul căruia este probabilă apariția efectelor se stabilește pe baza rezultatelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
comparabilă. Concentrațiile substanței de testare Intervalul de concentrații în cadrul căruia este probabilă apariția efectelor se stabilește pe baza rezultatelor din testele de stabilire a intervalelor. Pentru testare, se aleg cel puțin cinci concentrații dispuse în progresie geometrică. La concentrațiile minime testate trebuie să nu se observe nici un efect asupra creșterii algelor. Cele mai ridicate concentrații testate trebuie să inhibeze creșterea cu cel puțin 50 % față de martor și, de preferință, să o oprească total. Culturi replici și martori Planul testului include trei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
stabilește pe baza rezultatelor din testele de stabilire a intervalelor. Pentru testare, se aleg cel puțin cinci concentrații dispuse în progresie geometrică. La concentrațiile minime testate trebuie să nu se observe nici un efect asupra creșterii algelor. Cele mai ridicate concentrații testate trebuie să inhibeze creșterea cu cel puțin 50 % față de martor și, de preferință, să o oprească total. Culturi replici și martori Planul testului include trei replici la fiecare concentrație testată și, în mod ideal, un număr dublu de martori. Dacă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]