2,656 matches
-
Se adaugă 10 - 25% (v/v) glicerol steril în cealaltă microfiolă. Se centrifughează. Se depozitează la - 18°C (săptămâni) sau la - 70°C (luni). 2. Testul IF Se folosește antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul unei suspensii de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia solanacearum cu o diluție corespunzătoare de antiser conjugat cu izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Antiserul brut ar trebui să aibă o valoare IF de minim 1
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
încălzire, trecere prin flacără sau cu 95% etanol. 2.3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
95% etanol. 2.3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T 2T => diluțiile duble ale antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T 2T => diluțiile duble ale antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct.
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
și apoi cinci minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă. Se acoperă ferestrele de test și fereastra FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se scutură picăturile de conjugat de pe lamelă. Se clătesc și
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
IF este considerat pozitiv, - pentru eșantioane cu N < 10³ celule pe ml de extract concentrat resuspendat testul IF poate fi considerat pozitiv, (iii) dacă se observă un număr mare (>105 celule pe ml) de celule incomplet sau slab fluorescente în titrul antiserului, trebuie efectuat un al doilea test: - un test bazat pe un principiu biologic diferit sau - o repetare a testului IF, cu un al doilea antiser sau cu o diluție de zece ori a extractului concentrat. 3. Testul ELISA În
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
testului IF, cu un al doilea antiser sau cu o diluție de zece ori a extractului concentrat. 3. Testul ELISA În baza Robinson - Smith et al., 1995 Se folosește antiser pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul suspensiei de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia solanacearum. Se recomandă folosirea plăcilor de microtritrare NUNC - Polysorb. Se include un extract de cartof de control negativ și un control salin tamponat fosfatic (PBS). Se folosește o suspensie
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
suplimentar al probei cu anticorp monoclonal poate permite o specificitate mai mare, dar, de asemenea, se poate dovedi mai puțin evident. Trebuie să se folosească anticorpii unei sușe de referință a C. m. ssp. sepedonicus. Se recomandă să se determine titrul pentru fiecare nou lot de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai înaltă diluție la care se obține o reacție optimă, atunci când se testează o suspensie care conține între 105 și 106 celule pe mililitru, a unei sușe omoloage
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
permite o specificitate mai mare, dar, de asemenea, se poate dovedi mai puțin evident. Trebuie să se folosească anticorpii unei sușe de referință a C. m. ssp. sepedonicus. Se recomandă să se determine titrul pentru fiecare nou lot de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai înaltă diluție la care se obține o reacție optimă, atunci când se testează o suspensie care conține între 105 și 106 celule pe mililitru, a unei sușe omoloage de C. m. ssp. sepedonicus folosind un
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
conține între 105 și 106 celule pe mililitru, a unei sușe omoloage de C. m. ssp. sepedonicus folosind un conjugat adecvat de izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Soluția brută de anticorpi policlonali sau monoclonali trebuie să prezinte un titru de imunofluorescență de cel puțin 1:2 000. În momentul efectuării testului, diluția/diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie să fie aproximativ egale cu jumătatea titrului. Se folosesc anticorpi validați (a se vedea site-ul web la adresa: http://forum.europa
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
în conformitate cu recomandările producătorului. Soluția brută de anticorpi policlonali sau monoclonali trebuie să prezinte un titru de imunofluorescență de cel puțin 1:2 000. În momentul efectuării testului, diluția/diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie să fie aproximativ egale cu jumătatea titrului. Se folosesc anticorpi validați (a se vedea site-ul web la adresa: http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Testul trebuie efectuat pe extracte de probă proaspăt preparate. După caz, acesta poate fi efectuat cu succes pe extracte
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de imunofluorescență: (i) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
punctul 4.1 (i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Diluția de lucru
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1. Prepararea lamei de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Figura 1. Prepararea lamei de test în conformitate cu punctele 4.1 (i) și 4.3 (i) Diluția de extract concentrat repus în suspensie 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluție de extract concentrat repus în suspensie (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluție pe jumătate a antiserului/anticorpului ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE FOLLOWING TEXT IN RO LANGUAGE]*** échantillon 1 = eșantion 1 double de l'échantillon 1 ou de l'échantillon 2 = dublul eșantionului
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
celule sau care prezintă doar un număr redus de celule se observă cel puțin 40 de câmpuri microscopice. Se începe prin a se controla lama martorului pozitiv. Celulele trebuie să prezinte o fluorescență vie și să fie complet colorate la titrul de anticorp sau de diluție de lucru determinat. În cazul unei colorări anormale, testul IF (secțiunea 4) trebuie repetat. 4.4.2. Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
atipice din punct de vedere morfologic și populații de bacterii saprofite care provoacă reacții încrucișate și au dimensiune și morfologie similare cu C. m. ssp. sepedonicus. 4.4.4. Numai celulele fluorescente care au o dimensiune și o morfologie caracteristice titrului sau diluției de lucru a anticorpilor menționați la punctul 4.3 trebuie să fie luate în considerare. 4.4.5. Interpretarea testului de imunofluorescență: (i) În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea 4). (d) Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul obținut cu cultura trebuie să fie echivalent cu cel obținut cu martorul pozitiv. 9.3. Test PCR (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru în apă ultrapură. (b) Într-un bloc de încălzire sau într-o
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
bolii Newcastle. Fluidele hemaglutinice ar trebui folosite într-un test de inhibare hemaglutinic descris în capitolele 5 și 6. Inhibarea pozitivă, adică 24 sau mai mult, cu antiser policlonal specific pentru subtipurile H5 sau H7 ale pestei A și un titru de cel puțin 29 se utilizează pentru identificarea preliminară permițând impunerea măsurilor provizorii de control. 2. Identificarea de confirmare Deoarece există 13 subtipuri hemaglutinice și 9 subtipuri neuramidice ale virusului pestei, iar în cadrul acestora apar variații, nu este practic sau
jrc1919as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87069_a_87856]
-
pentru testele H1. Se pare că ambele sunt valabile și alegerea este lăsată la latitudinea laboratoarelor naționale. Oricum, antigenul folosit va afecta nivelul la care serul este considerat pozitiv; pentru 4 HAU un ser pozitiv este unul care prezintă un titru de 2 sau mai mare, pentru 8 HAU un ser pozitiv este acela care prezintă un titru de 2 sau mai mare. CAPITOLUL 5 Testul de hemaglutinare (HA) Reactivi 1. Soluție salină izotonică tamponată cu fosfat (0,05M) la pH
jrc1919as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87069_a_87856]