11,250 matches
-
antigenele și anticorpii aglutinează. Forțele care le leagă sunt în principal legaturile de hidrogen și interacțiunile hidrofobe. Presiunea hidrostatică exercitată de moleculele de apă care le înconjoară asigură coeziunea. Antigenele nu induc numai un răspuns imun ci reacționează și cu anticorpii existenți în organismul viu. Inducerea și reacția sunt două proprietăți diferite. Moleculele mici (pesticidele) nu sunt capabile să producă anticorpi. Ele pot să interacționeze numai cu anticorpii prezenți deja în organism. Sunt numite haptene. Pentru a fi generați anticorpii specifici
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
de moleculele de apă care le înconjoară asigură coeziunea. Antigenele nu induc numai un răspuns imun ci reacționează și cu anticorpii existenți în organismul viu. Inducerea și reacția sunt două proprietăți diferite. Moleculele mici (pesticidele) nu sunt capabile să producă anticorpi. Ele pot să interacționeze numai cu anticorpii prezenți deja în organism. Sunt numite haptene. Pentru a fi generați anticorpii specifici unei haptene, acestea trebuie să fie legate covalent de o proteină sau un polizaharid. De asemenea, haptena trebuie să aibă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
asigură coeziunea. Antigenele nu induc numai un răspuns imun ci reacționează și cu anticorpii existenți în organismul viu. Inducerea și reacția sunt două proprietăți diferite. Moleculele mici (pesticidele) nu sunt capabile să producă anticorpi. Ele pot să interacționeze numai cu anticorpii prezenți deja în organism. Sunt numite haptene. Pentru a fi generați anticorpii specifici unei haptene, acestea trebuie să fie legate covalent de o proteină sau un polizaharid. De asemenea, haptena trebuie să aibă situsuri reactive. Producerea de anticorpi specifici este
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
cu anticorpii existenți în organismul viu. Inducerea și reacția sunt două proprietăți diferite. Moleculele mici (pesticidele) nu sunt capabile să producă anticorpi. Ele pot să interacționeze numai cu anticorpii prezenți deja în organism. Sunt numite haptene. Pentru a fi generați anticorpii specifici unei haptene, acestea trebuie să fie legate covalent de o proteină sau un polizaharid. De asemenea, haptena trebuie să aibă situsuri reactive. Producerea de anticorpi specifici este o sarcină dificilă. De exemplu, dacă o singură moleculă dintr-o haptenă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
numai cu anticorpii prezenți deja în organism. Sunt numite haptene. Pentru a fi generați anticorpii specifici unei haptene, acestea trebuie să fie legate covalent de o proteină sau un polizaharid. De asemenea, haptena trebuie să aibă situsuri reactive. Producerea de anticorpi specifici este o sarcină dificilă. De exemplu, dacă o singură moleculă dintr-o haptenă este legată de o proteină specifică (66 kDa), anticorpul va fi direcționat spre situsurile unei proteine. Este astfel de dorit să existe mai multe molecule haptene
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
covalent de o proteină sau un polizaharid. De asemenea, haptena trebuie să aibă situsuri reactive. Producerea de anticorpi specifici este o sarcină dificilă. De exemplu, dacă o singură moleculă dintr-o haptenă este legată de o proteină specifică (66 kDa), anticorpul va fi direcționat spre situsurile unei proteine. Este astfel de dorit să existe mai multe molecule haptene legate de aceeași proteină (50 de haptene) localizate în situsuri diferite. În asemenea condiții, anticorpii produși vor fi specifici haptenei și nu unei
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
este legată de o proteină specifică (66 kDa), anticorpul va fi direcționat spre situsurile unei proteine. Este astfel de dorit să existe mai multe molecule haptene legate de aceeași proteină (50 de haptene) localizate în situsuri diferite. În asemenea condiții, anticorpii produși vor fi specifici haptenei și nu unei proteine. Anticorpii sunt produși prin injectarea subcutanată a haptenei legată de proteine la cinci sau șase șoareci, sobolani sau iepuri. Animalele nu reacționează toate în același fel, chiar dacă au același fond genetic
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
fi direcționat spre situsurile unei proteine. Este astfel de dorit să existe mai multe molecule haptene legate de aceeași proteină (50 de haptene) localizate în situsuri diferite. În asemenea condiții, anticorpii produși vor fi specifici haptenei și nu unei proteine. Anticorpii sunt produși prin injectarea subcutanată a haptenei legată de proteine la cinci sau șase șoareci, sobolani sau iepuri. Animalele nu reacționează toate în același fel, chiar dacă au același fond genetic. După două săptămâni, se repetă același procedeu cu de cinci
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
sobolani sau iepuri. Animalele nu reacționează toate în același fel, chiar dacă au același fond genetic. După două săptămâni, se repetă același procedeu cu de cinci ori mai puțină haptenă, se prelevă probe de sânge pentru a verifica dacă au apărut anticorpii. Animalele sunt reinjectate de două sau de trei ori pentru a crea o hiperimunizare. Serul de la aceste animale este acum sursa dorită de anticorpi. TESTAREA ELISA Unul din testele imunochimice este cunoscut sub denumire de ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
cinci ori mai puțină haptenă, se prelevă probe de sânge pentru a verifica dacă au apărut anticorpii. Animalele sunt reinjectate de două sau de trei ori pentru a crea o hiperimunizare. Serul de la aceste animale este acum sursa dorită de anticorpi. TESTAREA ELISA Unul din testele imunochimice este cunoscut sub denumire de ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). În desfășurarea unei faze eterogene prin testarea ELISA sunt implicate următoarele etape: - o soluție standard a compusului care trebuie măsurat sau proba este
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
În desfășurarea unei faze eterogene prin testarea ELISA sunt implicate următoarele etape: - o soluție standard a compusului care trebuie măsurat sau proba este introdusă într-un tub (vas de titrare) ai cărui pereți au fost sensibilizați prin îmbrăcarea lor cu anticorpi potriviți. Partea superioară a tubului este transparentă, pentru a favoriza detecția; - este adăugat un volum cunoscut de soluție care conține compusul covalent legat de o enzimă (exemplu: peroxidaza din hrean). În timpul perioadei de incubație, ambele forme ale compusului (al celui
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
cunoscut de soluție care conține compusul covalent legat de o enzimă (exemplu: peroxidaza din hrean). În timpul perioadei de incubație, ambele forme ale compusului (al celui care trebuie măsurat și a formei marcate) sunt în competiție pentru a se lega de anticorpii prezenți pe pereții containerului; - după perioada de incubație (de exemplu 30 min), tuburile sunt spălate de câteva ori cu apă. Numai moleculele legate vor rămâne în tub. Cantitatea de compus enzimatic conjugat legată de peretele tubului (anticorp) va crește conform
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
se lega de anticorpii prezenți pe pereții containerului; - după perioada de incubație (de exemplu 30 min), tuburile sunt spălate de câteva ori cu apă. Numai moleculele legate vor rămâne în tub. Cantitatea de compus enzimatic conjugat legată de peretele tubului (anticorp) va crește conform cu scăderea cantității de compus liber, nemarcat din probă; - este adăugat substratul S specific enzimei împreună cu o cromogenă C (tetrametilbenzidina) care este proiectată să reacționeze cu produsul reacției enzimatice a substratului S; - enzima fixată va transforma moleculele
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
formează oxigen ce acționează asupra cromogenului, tetrametilbenzidină (TMB). Această metodă tradițională folosită de biologi, este acum aplicată în sectoare ca protecția mediului înconjurător și analiza alimentelor (pesticide, aflatoxine, steroizi anabolici). Determinarea unui compus în aceste condiții este posibilă numai dacă anticorpii adaptați și enzimele conjugate sunt disponibile. Relația concentrație-absorbanță Numărul anticorpilor legați de situsurile pereților vasului este relativ mic comparativ cu numărul moleculelor din soluție. Moleculele marcate sau nemarcate vor reacționa cu anticorpii proporțional cu concentrația lor relativă. Cantitatea ambelor molecule
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
tradițională folosită de biologi, este acum aplicată în sectoare ca protecția mediului înconjurător și analiza alimentelor (pesticide, aflatoxine, steroizi anabolici). Determinarea unui compus în aceste condiții este posibilă numai dacă anticorpii adaptați și enzimele conjugate sunt disponibile. Relația concentrație-absorbanță Numărul anticorpilor legați de situsurile pereților vasului este relativ mic comparativ cu numărul moleculelor din soluție. Moleculele marcate sau nemarcate vor reacționa cu anticorpii proporțional cu concentrația lor relativă. Cantitatea ambelor molecule la nivelul peretelui vasului este aceeași ca în soluție (3
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
compus în aceste condiții este posibilă numai dacă anticorpii adaptați și enzimele conjugate sunt disponibile. Relația concentrație-absorbanță Numărul anticorpilor legați de situsurile pereților vasului este relativ mic comparativ cu numărul moleculelor din soluție. Moleculele marcate sau nemarcate vor reacționa cu anticorpii proporțional cu concentrația lor relativă. Cantitatea ambelor molecule la nivelul peretelui vasului este aceeași ca în soluție (3 în exemplul prezentat). Domeniul linear apare pentru o serie mică de concentrații. Dacă N este numărul total de situsuri ocupate de la nivelul
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
proporțional cu concentrația lor relativă. Cantitatea ambelor molecule la nivelul peretelui vasului este aceeași ca în soluție (3 în exemplul prezentat). Domeniul linear apare pentru o serie mică de concentrații. Dacă N este numărul total de situsuri ocupate de la nivelul anticorpilor situați pe perete vasului, n* numărul moleculelor marcate absorbite, C* concentrația speciilor marcate din soluție și C concentrația moleculelor care nu sunt marcate. O caracteristică tipică a graficului o reprezintă faptul că, această curbă în asemenea teste este neliniară. Ecuația
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
caz, enzima conjugată aleasă este o fosfatază alcalină care convertește substratul specific într-un compus fluorescent. Alte tehnici imunoenzimatice Există mai multe modalitați de a efectua o testare competitivă ELISA într-un mediu eterogen. Ohmicron a dezvoltat o abordare unde anticorpii sunt legați covalent de particule magnetice cu diametrul de 1 μm, înlocuind astfel vasul ai cărui pereți sunt acoperiți cu anticorpi. Această abordare are două avantaje distincte: - cantitatea de anticorpi care poate fi folosită este nelimitată, în comparație cu pereții
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
multe modalitați de a efectua o testare competitivă ELISA într-un mediu eterogen. Ohmicron a dezvoltat o abordare unde anticorpii sunt legați covalent de particule magnetice cu diametrul de 1 μm, înlocuind astfel vasul ai cărui pereți sunt acoperiți cu anticorpi. Această abordare are două avantaje distincte: - cantitatea de anticorpi care poate fi folosită este nelimitată, în comparație cu pereții acoperiți cu anticorpi; - reacția antigen-anticorp este favorizată deoarece ambele elemente pot fi bine amestecate. Testarea folosind particule magnetice este condusă în
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
într-un mediu eterogen. Ohmicron a dezvoltat o abordare unde anticorpii sunt legați covalent de particule magnetice cu diametrul de 1 μm, înlocuind astfel vasul ai cărui pereți sunt acoperiți cu anticorpi. Această abordare are două avantaje distincte: - cantitatea de anticorpi care poate fi folosită este nelimitată, în comparație cu pereții acoperiți cu anticorpi; - reacția antigen-anticorp este favorizată deoarece ambele elemente pot fi bine amestecate. Testarea folosind particule magnetice este condusă în mod similar cu testarea ELISA. După incubare, este aplicat
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
covalent de particule magnetice cu diametrul de 1 μm, înlocuind astfel vasul ai cărui pereți sunt acoperiți cu anticorpi. Această abordare are două avantaje distincte: - cantitatea de anticorpi care poate fi folosită este nelimitată, în comparație cu pereții acoperiți cu anticorpi; - reacția antigen-anticorp este favorizată deoarece ambele elemente pot fi bine amestecate. Testarea folosind particule magnetice este condusă în mod similar cu testarea ELISA. După incubare, este aplicat un câmp magnetic pentru a ține anticorpii fixați de pereții containerului. Tehnica cunoscută
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
în comparație cu pereții acoperiți cu anticorpi; - reacția antigen-anticorp este favorizată deoarece ambele elemente pot fi bine amestecate. Testarea folosind particule magnetice este condusă în mod similar cu testarea ELISA. După incubare, este aplicat un câmp magnetic pentru a ține anticorpii fixați de pereții containerului. Tehnica cunoscută ca și testul de imunotestare cu enzime multiplicate (TIEM) în fază omogenă este folosită în determinarea drogurilor și a hormonilor. În TIEM, anticorpii liberi sunt plasați într-un tub în care sunt adăugate proba
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
ELISA. După incubare, este aplicat un câmp magnetic pentru a ține anticorpii fixați de pereții containerului. Tehnica cunoscută ca și testul de imunotestare cu enzime multiplicate (TIEM) în fază omogenă este folosită în determinarea drogurilor și a hormonilor. În TIEM, anticorpii liberi sunt plasați într-un tub în care sunt adăugate proba și o cantitate cunoscută de antigen care este enzima asociată (enzima conjugată). Competiția apare în soluție. Substratul poate fi adăugat direct. Intensitatea culorii în acestă testare va fi datorată
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
se pot depista reacțiile încrucișate false. - spectrul de determinări este relativ îngust. Când concentrația crește, determinarea este mai puțin precisă.Trebuie să se găsească un factor de diluție potrivit; - proba din recipientul de titrare trebuie să aibă aceeași cantitate de anticorpi cu aceeași reactivitate, ceea ce este dificil din punct de vedere tehnic. Imunizarea unui animal de laborator este dificilă și uneori nu se realizează în totalitate, ceea ce explică rezultatele diferite de la un set la altul; - seturile trebuie să fie ținute într-
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
din ser, este numită radio-imunologie. Este transpunerea în imunochimie a aceluiași principiu ca acela folosit în determinarea ionului de sulfat. Testele radio-imunologice sunt similare cu testele ELISA. O cantitate cunoscută de evidențiator este adăugată unei probe care conține analitul. Dacă anticorpii sunt fixați pe peretele vasului în care se efectuează testele, măsurătorile de radioactivitate vor fi efectuate după spălarea vasului. Totuși, dacă anticorpii specifici sunt adăugați în cantitate sub- stoichiometrică, materialul nelegat trebuie separat de materialul legat de anticorpi prin mijloace
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]