9,341 matches
-
Internațională de Biochimie) sunt enzime care participă la reacțiile de oxidoreducere biologică (G.H. Weill, 1994). Izoenzimele peroxidazice includ o grupă mare de enzime specifice ca: NAD peroxidază; NADP peroxidază; acid gras peroxidază; citocrom peroxidază; glutation peroxidază și o grupă de enzime nespecifice, izolate din diferite surse, cu nomenclatura sistemică “donor de hidrogen: H2O2-oxidoreductaza” și codul E.C.1.11.1.7. sau “donor: peroxid de hidrogen oxidoreductaza” (I.F. Dumitru și colab., 1981). Peroxidaza (donor: H2O2-oxidoreductaza, E.C.1.11.1.7.) se găsește
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
asemenea, cu puține excepții, catalizează dehidrogenarea unui număr mare de compuși organici. Peroxidaza este o glicoproteidă, deoarece este alcătuită din prohemina IX care conține Fe3+ și o componentă de natură glicoproteică. Din punct de vedere structural peroxidaza este considerată o enzimă heminică, fiind alcătuită dintr-o parte proteică numită apo-enzimă și o parte neproteică ce poartă denumirea de grupare prostetică. Ca și în cazul citocromilor și catalazei, gruparea prostetică este una porfirinică. Legătura dintre apo-enzima peroxidazei și gruparea porfirinică este o
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
Ca și în cazul citocromilor și catalazei, gruparea prostetică este una porfirinică. Legătura dintre apo-enzima peroxidazei și gruparea porfirinică este o legătură trainică, de tip covalent, asemănătoare legăturii dintre hem și globină din hemoglobină sau clorofilă. Gruparea prostetică a acestei enzime se deosebește de gruparea prostetică (hem) a hemoglobinei prin faptul că cele 4 nuclee pirolice nu se leagă coordinativ de un atom de fier, aflat în starea de oxidare bivalentă Fe2+, ci de un atom de fier aflat în stare
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
ci de un atom de fier aflat în stare de oxidare superioară Fe3+ (M. Șerban și colab., 1993). Peroxidaza prezintă importanță pentru istoricul biochimiei, în special al enzimologiei, deoarece pentru prima dată a fost observat mecanismul de alcătuire al unei enzime, mecanism care se referă la formarea intermediară a complexului enzimă-substrat (E-S). Importanța peroxidazei constă în faptul că degradează H2O2, deșeu metabolic cu acțiune puternic oxidantă, care ar acționa distructiv asupra diverșilor metaboliți celulari. Se poate concluziona că are rol
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
fericianură etc. NADPH: peroxid de hidrogen oxidoreductaza (E.C.1.11.1.2.) catalizează reacția. Palmitat: peroxid de hidrogen oxidoreductaza (E.C.1.11.1.3.) acționează asupra acizilor grași saturați cu catena lungă C10 (acidul lauric), pâna la C18 (acidul stearic). Enzima care pâna în anul 1972 avea codul E.C.1.11.1.4., denumită triptofan 2,3-dehidrogenaza, în urma aprofundăarii studiului a fost transferată în subclasa 1.13.11 și are codul E.C.1.13.11.11. ferocitocrom: peroxid de hidrogen oxidoreductaza
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
a aminoacizilor variază de la un an la altul. 3.2.1.2. Analiza acizilor nucleici (ADN și ARN). Bazele genetice și biochimice. Încă din anul 1941, geneticienii G.W. Beadle și E.L. Tatum formulează anumite ipoteze, conform cărora "gena = o enzimă". Genele reprezintă molecule complexe alcătuite din acizi nucleici ADN și ARN, constituind material genetic care conține informația ereditară. De asemenea, gena controlează sinteza, funcția și specificația unei enzime, și corespunde unui segment de acid nucleic, care la rândul său este
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
W. Beadle și E.L. Tatum formulează anumite ipoteze, conform cărora "gena = o enzimă". Genele reprezintă molecule complexe alcătuite din acizi nucleici ADN și ARN, constituind material genetic care conține informația ereditară. De asemenea, gena controlează sinteza, funcția și specificația unei enzime, și corespunde unui segment de acid nucleic, care la rândul său este format dintr-o secvență de nucleotizi care conțin informația genetică. De aici, rezultă că secvența nucleotizilor în ADN, determină secvența aminoacizilor în lanțul polipeptidic, iar între molecula de
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
de ADN și molecula proteică există o colinearitate. De aceea la orice schimbare (mutație) în secvența nucleotizilor din genă îi va corespunde automat și o schimbare a secvenței aminoacizilor din proteină. Ca urmare, schimbul produșilor chimici ai genelor, adică a enzimelor, reprezintă un mijloc de evidențiere a variabilității genetice dintre organismele aparinînd diferitelor specii de plante. Pornind de la aceste adevăruri, analiza izoenzimatică și-a găsit aplicabilitate în cercetările pornind de la originea soiurilor atât la plantele cultivate cât și la vița de
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
este marker genetic, caracterizat prin variabilitate de la un individ la altul și transmitere mendeliană. Principul tehnicii moleculare RFLP de realizare a amprentei genetice are la bază următoarele etape de lucru: izolarea ADN genomic de la organismele de interes; digestia ADN folosind enzime de restricție; separarea fragmentelor de restricție prin electroforeză în gel de agaroză; denaturarea, neutralizarea și fixarea gelurilor obținute pe o membrană unde are loc hibridarea fragmentelor de ADN cu sonde speciale, marcate radioactiv, iar fragmentele complementare sunt vizualizate fie prin
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
restricție prin electroforeză în gel de agaroză; denaturarea, neutralizarea și fixarea gelurilor obținute pe o membrană unde are loc hibridarea fragmentelor de ADN cu sonde speciale, marcate radioactiv, iar fragmentele complementare sunt vizualizate fie prin autoradiografie, fie prin tehnici neradioactive. Enzimele de restricție pot detecta secvențele specifice de ADN, iar orice variație în lungimea unui fragment de restricție dintr-un locus cromozomal poate fi detectat ca RFLP. Pentru a putea fi utilizat ca markei genetici, RFLP-ul trebuie să îndeplinească anumite
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
în geluri de poliacrilamidă și evidențiere prin autoradiografiere. În ultimul timp se utilizează secvențiatoarele automate. Prin metoda AFLP, se realizează amplificarea predominantă a acelor fragmente de restricție care au la unul din capete o secvență rezultată în urma fragmentării cu o enzimă "frequent cutter" și la celălalt cu o enzimă " rare cutter". Fragmentele de interes, ca și în cazul markerilor RAPD, pot fi extirpate din gel, purificate, clonate, secvențiate și transformate în markeri SCAR, cu ajutorul unor primeri specifici. Această metodă prezintă un
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
În ultimul timp se utilizează secvențiatoarele automate. Prin metoda AFLP, se realizează amplificarea predominantă a acelor fragmente de restricție care au la unul din capete o secvență rezultată în urma fragmentării cu o enzimă "frequent cutter" și la celălalt cu o enzimă " rare cutter". Fragmentele de interes, ca și în cazul markerilor RAPD, pot fi extirpate din gel, purificate, clonate, secvențiate și transformate în markeri SCAR, cu ajutorul unor primeri specifici. Această metodă prezintă un grad mai mare de reproductibilitate comparativ cu tehnica
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
1.3.b redă instalația cu o membrană lichidă foarte subțire și cu un timp de răspuns foarte scurt. Soluția probă se separă de electrodul intern printr-un disc de filtru poros saturat cu faza lichidă schimbătoare de ioni. Electrozi enzimă Un asemenea electrod este constituit dintr-un electrod normal de pH acoperit cu un gel ce conține urează. Ureea pătrunde prin gel și este descompusă de enzimă rezultând amoniac. Are loc o schimbare de pH care poate fi măsurat. APLICAȚIILE
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
un disc de filtru poros saturat cu faza lichidă schimbătoare de ioni. Electrozi enzimă Un asemenea electrod este constituit dintr-un electrod normal de pH acoperit cu un gel ce conține urează. Ureea pătrunde prin gel și este descompusă de enzimă rezultând amoniac. Are loc o schimbare de pH care poate fi măsurat. APLICAȚIILE POTENȚIOMETRIEI 1. Determinarea pH-ului Se folosesc șapte soluții etalon principale pentru acoperirea domeniului de pH cuprins între 3,5 și 10,0; etaloane secundare pentru pH
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
sau mediu poros: - hârtie de filtru specială pentru electroforeză; - acetat de celuloză sub formă de folii pentru separarea de insulină, fibrinogen, proteine, lipoproteine, glicoproteine, hemoglobine ; - geluri de agaroză (proteine), agar (proteine, vitamine, carbohidrați), poliacrilamidă, silice, rășini schimbătoare de ioni, amidon (enzime) etc. Acestea din urmă se caracterizează printr-o mare putere de rezoluție și o mare putere de selecție moleculară. Metoda de analiză pe hârtie care constă în: proba de analizat se aplică pe banda de hârtie îmbibată cu soluție tampon
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
Sistemul luminol-catalizator în care catalizatorul este porfirina sau un cation metalic, se folosește la dozarea H2O2 și a O2. Reacția peroxioxalatului are aplicabilitate practică în determinarea H2O2 în flux continuu (conc. minimă detectabilă = 6.10-9 M) și permite dozarea substratului enzimei. Această metodă combină specificitatea reacției enzimatice cu puterea de detecție luminometrică. A fost aplicată la determinarea glucozei prin intermediul glucozoxidazei, a formolului prin aldehidoxidază, a aminoacizilor prin L-aminoacidoxidaza cu o limită de detecție în jurul a 0,1 ng. Ozonul provoacă chemiluminiscența
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
analit nemarcată. Frecvent sunt utilizate două tipuri de marcări. Prima constă în folosirea unui izotop (stabil sau radioactiv), urmată de recuperarea unei părți care să poată fi analizată folosind procese fizico-chimice (recristalizare, cromatografie). A doua modalitate constă în folosirea unei enzime care permite determinarea unor cantități extrem de mici de compuși. Mai târziu, compusul poate fi izolat, folosind o reacție imunochimică. Acest tip de abordare a condus la dezvoltarea testărilor radio-imunologice (TRI) și imunoenzimologice ca ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Activarea
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
folosind fie un izotop stabil, fie un radioizotop a cărui activitate este măsurată în becqureli. Pentru a măsura radiațiile izotopilor stabili poate fi folosită spectrometria de masă. Aceasta este numită analiză izotopică. - poate fi folosit ca reactiv de marcare o enzimă sau un derivat fluorescent. Acestea sunt principiile folosite în analizele imunoenzimatice sau imunochimice. Diluția izotopică cu marcare radioactivă În aceste tipuri de analiză izotopică, este folosit un compus identic cu cel care trebuie măsurat (element sau moleculă), unde unul dintre
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
tub (vas de titrare) ai cărui pereți au fost sensibilizați prin îmbrăcarea lor cu anticorpi potriviți. Partea superioară a tubului este transparentă, pentru a favoriza detecția; - este adăugat un volum cunoscut de soluție care conține compusul covalent legat de o enzimă (exemplu: peroxidaza din hrean). În timpul perioadei de incubație, ambele forme ale compusului (al celui care trebuie măsurat și a formei marcate) sunt în competiție pentru a se lega de anticorpii prezenți pe pereții containerului; - după perioada de incubație (de exemplu
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
spălate de câteva ori cu apă. Numai moleculele legate vor rămâne în tub. Cantitatea de compus enzimatic conjugat legată de peretele tubului (anticorp) va crește conform cu scăderea cantității de compus liber, nemarcat din probă; - este adăugat substratul S specific enzimei împreună cu o cromogenă C (tetrametilbenzidina) care este proiectată să reacționeze cu produsul reacției enzimatice a substratului S; - enzima fixată va transforma moleculele S în molecule P specifice, care vor reacționa cu C pentru a da un produs colorat. Factorul de
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
legată de peretele tubului (anticorp) va crește conform cu scăderea cantității de compus liber, nemarcat din probă; - este adăugat substratul S specific enzimei împreună cu o cromogenă C (tetrametilbenzidina) care este proiectată să reacționeze cu produsul reacției enzimatice a substratului S; - enzima fixată va transforma moleculele S în molecule P specifice, care vor reacționa cu C pentru a da un produs colorat. Factorul de amplificare datorat enzimei este responsabil de sensibilitate înaltă a testării. Odata cu descreșterea cantității de compus din probă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
cromogenă C (tetrametilbenzidina) care este proiectată să reacționeze cu produsul reacției enzimatice a substratului S; - enzima fixată va transforma moleculele S în molecule P specifice, care vor reacționa cu C pentru a da un produs colorat. Factorul de amplificare datorat enzimei este responsabil de sensibilitate înaltă a testării. Odata cu descreșterea cantității de compus din probă, cantitatea de enzimă fixată crește și astfel și intensitatea culorii. În final, reacția se întrerupe, după o scurtă perioadă de timp, prin adăugarea unui acid
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
transforma moleculele S în molecule P specifice, care vor reacționa cu C pentru a da un produs colorat. Factorul de amplificare datorat enzimei este responsabil de sensibilitate înaltă a testării. Odata cu descreșterea cantității de compus din probă, cantitatea de enzimă fixată crește și astfel și intensitatea culorii. În final, reacția se întrerupe, după o scurtă perioadă de timp, prin adăugarea unui acid tare, care distruge enzima. Se determină spectrofotometric compusul colorat rezultat. Peroxidaza din hrean (M=44 kDa) este o
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
sensibilitate înaltă a testării. Odata cu descreșterea cantității de compus din probă, cantitatea de enzimă fixată crește și astfel și intensitatea culorii. În final, reacția se întrerupe, după o scurtă perioadă de timp, prin adăugarea unui acid tare, care distruge enzima. Se determină spectrofotometric compusul colorat rezultat. Peroxidaza din hrean (M=44 kDa) este o enzimă stabilă și reactivă. Aceasta posedă patru resturi de lizină care nu sunt implicate în activitatea sa, dar sunt folosite ca legături chimice. În concordanță cu
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
fixată crește și astfel și intensitatea culorii. În final, reacția se întrerupe, după o scurtă perioadă de timp, prin adăugarea unui acid tare, care distruge enzima. Se determină spectrofotometric compusul colorat rezultat. Peroxidaza din hrean (M=44 kDa) este o enzimă stabilă și reactivă. Aceasta posedă patru resturi de lizină care nu sunt implicate în activitatea sa, dar sunt folosite ca legături chimice. În concordanță cu numele, hidrogen peroxidaza este un substrat pentru enzimă. Hidrogen peroxidaza formează oxigen ce acționează asupra
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]