3,282 matches
-
cutie de uscare pe perioada necesară (cel mult trei luni) înainte de un nou test. 5.3. Procedura testului de imunofluorescență (i) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (i): Se prepară un set de diluții duble. Primul godeu ar trebui să fie de 1/2 din titru (T/2), celelalte fiind de 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu metoda
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
celelalte fiind de 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (ii): Se prepară diluția de lucru a anticorpilor în tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (ii): Se prepară diluția de lucru a anticorpilor în tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului concentrat
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
test indicată la punctul 5.1 (ii): Se prepară diluția de lucru a anticorpilor în tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului concentrat resuspendat (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluții duble ale antiserului/anticorpilor ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului concentrat resuspendat (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluții duble ale antiserului/anticorpilor ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului concentrat resuspendat (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluții duble ale antiserului/anticorpilor ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 Figura 2: Pregătirea lamei de test în conformitate cu
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 Figura 2: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (ii) și 5.3. (ii) Diluție de lucru a antiserului/anticorpilor 1/1 1/10 1/100 gol gol Diluție decimală a extractului concentrat resuspendat ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 Figura 2: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (ii) și 5.3. (ii) Diluție de lucru a antiserului/anticorpilor 1/1 1/10 1/100 gol gol Diluție decimală a extractului concentrat resuspendat ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 5.3.1. Se aranjează lamele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 5.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă umedă. Se acoperă complet fiecare fereastră de test cu diluția sau diluțiile de anticorpi. Cantitatea de antiser aplicat în fiecare fereastră trebuie să fie cel puțin echivalentă cu cantitatea de extract aplicată. Următoarea procedură ar trebui aplicată în absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi: 5.3.2. Se incubează
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 5.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă umedă. Se acoperă complet fiecare fereastră de test cu diluția sau diluțiile de anticorpi. Cantitatea de antiser aplicat în fiecare fereastră trebuie să fie cel puțin echivalentă cu cantitatea de extract aplicată. Următoarea procedură ar trebui aplicată în absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi: 5.3.2. Se incubează lamele pe
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
IF. Se evită orice vaporizare sau scurgere care ar putea conduce la o contaminare încrucișată. Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă cu o sugativă. 5.3.4. Se așază lamele pe hârtie umedă. Se acoperă ferestrele de test cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrării. Cantitatea conjugatului aplicată în ferestre trebuie să fie echivalentă cu cantitatea de anticorpi utilizată. 5.3.5. Se incubează lamele pe hârtie umedă, acoperite timp de treizeci de minute la temperatura ambiantă (18-25 °C
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
eșantioanele fără celule sau cu un număr redus de celule se examinează cel puțin 40 câmpuri microscopice. Se verifică mai întâi lama de control pozitiv. Celulele trebuie să fie intens fluorescente și colorate complet la titrul de anticorpi sau la diluția de lucru determinată. Testul IF (secțiunea VI.A.5) trebuie repetat în cazul în care apare o colorație anormală. 5.4.2. Se caută prezența celulelor intens fluorescente cu morfologia caracteristică a R. solanacearum în ferestrele de test ale lamelor
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
morfologia caracteristică a R. solanacearum în ferestrele de test ale lamelor (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei de control pozitiv la aceeași diluție de anticorpi. Celulele cu colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. În cazul în care se suspectează o contaminare, testul trebuie refăcut. Se poate întâmpla atunci când toate lamele unui lot indică celule pozitive din cauza unei contaminări
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
cu o mărime și morfologie asemănătoare cu R. solanacearum în extractele concentrate de taloane de cartof și în bucățile de tulpini. 5.4.4. Trebuie luate în considerare numai celulele fluorescente ale căror dimensiune și morfologie sunt caracteristice titrului sau diluției de lucru a anticorpilor menționați la punctul 5.3 5.4.5. Interpretarea testului IF: (i) În cazul în care sunt descoperite celule intens fluorescente cu morfologie caracteristică, se determină numărul mediu de celule tipice pe câmp microscopic și se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
din eșantioanele de control cu un conținut de 103-104 de celule patogene pe ml. 6.2. PCR 6.2.1. Se prepară, pentru PCR, matricele de testare și de control în conformitate cu protocoalele validate (secțiunea VI.A.6). Se prepară o diluție decimală din extractul de eșantion de ADN (1:10 în apă ultrapură). 6.2.2. Se prepară amestecul reactiv corespunzător pentru PCR într-un mediu neinfectat în conformitate cu protocoalele publicate (apendicele 6). În cazul în care este posibil, se recomandă utilizarea
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
a se vedea apendicele 7). 7.1.5. Se picură 16 μl din suspensiile fixate pe o lamă multitest curată, în conformitate cu figura 7.1. Pe fiecare lamă se aplică două eșantioane diferite, nediluate, și se folosesc 10 μl pentru o diluție de 1:100 (într-un tampon fosfat 0,01 M). Restul soluției de eșantion (49 μl) poate fi conservată la - 20 °C după ce i s-a adăugat un volum de etanol de 96 %. În cazul în care testul FISH trebuie
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Se recomandă să se stabilească titrul pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
oră la 37 °C sau peste noapte la 4 °C. (4) Se scot extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare cel puțin cinci minute în godeuri. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-R. solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare cel puțin cinci minute în godeuri. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-R. solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugați secundari de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație. Se adaugă 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (9) Se scoate conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. (b) DAS-ELISA (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-R. solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6 (apendicele 4). Se adaugă 200 μl în fiecare godeu. Se incubează timp de patru-cinci ore la 37 °C sau timp de 16 ore la 4 °C. (2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
De asemenea, se adaugă eșantioane de control pozitiv și negativ în două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de șaisprezece ore la 4 °C. (3) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4). (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici R. solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină bovină (BSA) și se adaugă 190 μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37 °C. (5) Se spală godeurile de trei
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină bovină (BSA) și se adaugă 190 μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37 °C. (5) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4). (6) Se prepară o diluție corespunzătoare de imunoglobuline antișoarece conjugate cu fosfatază alcalină în PBS. Se adaugă 190 μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37 °C. (7) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4). (8) Se prepară o soluție
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Activitatea dihidrolazei argininei - Lichefierea gelatinei - Hidroliza amidonului - Hidroliza esculinei - Producție de levan - 2. Testul IF 2.1. Se prepară o suspensie de circa 106 celule/ml într-un tampon de imunofluorescență (apendicele 4). 2.2. Se prepară o serie de diluții duble dintr-un antiser corespunzător (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). 2.3. Se aplică procedura testului IF (secțiunea VI.A.5). 2.4. Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]