4,519 matches
-
markeri epigenetici în definirea stărilor de risc în monitorizarea strategiilor de prevenire, de obținere de date relevante pentru un diagnostic precoce și de urmărire a prognozei maladiei canceroase. În atenția actuală a cercetătorilor se află elucidarea modului în care hipermetilarea promotorului determină silențierea genică și modul în care pierderea metilării modifică structura cromatinei. Există și un impact clinic, medical al acestor cercetări. Cel mai potrivit lucru este utilizarea evenimentelor de hipermetilare a insulelor CpG ca biomarkeri. Schimbările de la nivelul promotorului oferă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
hipermetilarea promotorului determină silențierea genică și modul în care pierderea metilării modifică structura cromatinei. Există și un impact clinic, medical al acestor cercetări. Cel mai potrivit lucru este utilizarea evenimentelor de hipermetilare a insulelor CpG ca biomarkeri. Schimbările de la nivelul promotorului oferă un semnal pozitiv celulei canceroase și acestea pot fi detectate prin aplicarea tehnicii PCR (modificata astfel încât să se deosebească de tehnica PCR utilizată în detecția mutațiilor) pe baza căreia se poate stabili riscul de a face cancer, diagnoza precoce
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
carcinomul mamar. Caracteristic pentru carcinomul mamar agresiv este reducerea drastică a expresiei genei brca1. Cercetările efectuate atât in vitro, cât și in vivo au demonstrat că inactivarea genei brca1 poate să fie pusă pe seama proteinei HMGA1b care se leagă la promotorul acestei gene, determinând inhibiția transcrierii genice (Baldassarre și colab., 2003). Genele Sox codifică pentru factori de transcriere ce aparțin suprafamiliei de proteine HMG. Aceste gene sunt înalt conservate, ele se întâlnesc la numeroase specii de animale și intervin in procesele
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
în anul 1984, în laboratorul lui Philip Leder. Aici a fost mimată activarea myc celulară prin generarea de constructe moleculare în care c-myc a fost exprimată sub influența elementului LTR al MMTV - virusul tumorii mamare de șoarece -, care este un promotor puternic, inductibil cu hormoni glucocorticoizi. Constructele au fost injectate în pronucleii ovulelor fecundate de șoarece, obținându-se descendenți transgenici care conțin constructul MMTV/myc, integrat în ADN din linia germinală. Doi dintre șoarecii transgenici rezultați, precum și descendenții lor au dezvoltat
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
apoptoza. Expresia acestei gene promovează translocarea mitocondrială și multimerizarea BAX, culminând cu inducerea apoptozei. BAX este astfel absolut necesar pentru apoptoza indusă de PUMA, fiind o țintă indirectă a P53, prin intermediul PUMA (Yu și colab., 2003). Gena Noxa conține în promotor un singur element de răspuns la P53. Noxa codifică pentru o proteină având numai domeniu BH3, structura acestei proteine sugerând că ea contribuie la calea apoptotica mediată de P53 într-o manieră asemănătoare cu BAX și PUMA. Expresia sa este
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
și colab., 2000). P53 promovează eliberarea cyt c din mitocondrie prin intermediul activării proteinelor purtătoare de domeniu BH3 și astfel este implicată în formarea apoptozomului. De asemenea, P53 induce și expresia APAF-1 prin intermediul unui element de răspuns la P53 situat în promotorul genei Apaf-1 (Kannan și colab., 2001; Moroni și colab., 2001; Robles și colab., 2001; Rozenfeld- Granot și colab., 2002). Proteína P53 intervine în reglarea apoptozei și prin acțiune directă la nivel mitocondrial. Localizarea P53 în membrana mitocondrială are loc ca
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
a celulelor tumorale; distrugerea unor celule inflamate. 30.2.3. DR5/3 ȘI TRAIL Receptorul morții DR5 este complexat cu ligandul TRAIL (APO2L). Situsurile principale de inițiere a transcripției, -122 și -137, sunt situate în amonte față de codonul inițiator ATG. Promotorul genei Dr5 este localizat între -198 și -116, nu are o cutie TATA, dar conține două situsuri SP1 care sunt responsabile de activitatea transcripțională bazală (Yoshida și colab., 2001). Structura de ansamblu a complexului TRAIL/DR5 este similară cu cea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
2000). În această zonă există două regiuni metilate diferențiat: DMD situată înaintea lui H19 și DMR1 situată înaintea lui IGF2, ambele fiind metilate în cromozomul patern și nemetilate în cel matern. Când DMD este metilat în cromozomul patern, enhancerii activează promotorul IGF2. Când DMD este nemetilat în cromozomul matern, acesta acționează ca element de graniță, prevenind activarea de către enhanceri a promotorului IGF2 (fig. 31.5). Studii recente efectuate de Drewell și colaboratorii (2000) au arătat că în această zonă există trei
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
ambele fiind metilate în cromozomul patern și nemetilate în cel matern. Când DMD este metilat în cromozomul patern, enhancerii activează promotorul IGF2. Când DMD este nemetilat în cromozomul matern, acesta acționează ca element de graniță, prevenind activarea de către enhanceri a promotorului IGF2 (fig. 31.5). Studii recente efectuate de Drewell și colaboratorii (2000) au arătat că în această zonă există trei regiuni care acționează ca silențiatori specifici de țesut (reprezentați sub formă de „pătrățele negre”, în figura 31.5). Una dintre
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
este adesea asociată cu represia transcripției, există cel puțin două cazuri de locusuri amprentate în care metilarea determină activarea transcripțională. La nivelul locilor H19/IGF2 și Rasgrf 1 metilarea diferențiată a domeniilor cromatinice determină blocarea enhancer-ului care împiedică interacția dintre promotor și enhancer, și astfel se previne activarea promotorului. În mod normal, metilarea situsurilor de legare a factorului CTCF determină interacția dintre enhancer și promotor și expresia IGF2 sau Rasgrf 1. Expresia bialelică a IGF2 identificată în cancere este legată de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
puțin două cazuri de locusuri amprentate în care metilarea determină activarea transcripțională. La nivelul locilor H19/IGF2 și Rasgrf 1 metilarea diferențiată a domeniilor cromatinice determină blocarea enhancer-ului care împiedică interacția dintre promotor și enhancer, și astfel se previne activarea promotorului. În mod normal, metilarea situsurilor de legare a factorului CTCF determină interacția dintre enhancer și promotor și expresia IGF2 sau Rasgrf 1. Expresia bialelică a IGF2 identificată în cancere este legată de interferarea acestui mecanism (fig. 31.8). Centrul de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
IGF2 și Rasgrf 1 metilarea diferențiată a domeniilor cromatinice determină blocarea enhancer-ului care împiedică interacția dintre promotor și enhancer, și astfel se previne activarea promotorului. În mod normal, metilarea situsurilor de legare a factorului CTCF determină interacția dintre enhancer și promotor și expresia IGF2 sau Rasgrf 1. Expresia bialelică a IGF2 identificată în cancere este legată de interferarea acestui mecanism (fig. 31.8). Centrul de control al imprintării prezintă un locus de legare pentru CTCF, la care acesta se leagă doar
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
2005) și de colon (Brueckner și colab., 2007). Studiile ulterioare au identificat hipermetilarea genelor supresoare tumorale (Herman și colab., 1995) și mai recent s-a raportat inactivarea genelor miARN prin metilarea ADN (Lujambio și colab., 2007). Hipermetilarea insulelor CpG din promotorii genelor supresoare tumorale este un eveniment important în inițierea tumorală care determină inactivarea acestor gene, de exemplu genele Rb (Sakai și colab., 1991), hMLH1(Herman și Baylin, 2003) sau BRCA (Esteller și colab., 2000). Hipermetilarea apare în diverse stadii de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
administrarea agenților toxici provoacă leziuni ale mușchilor scheletici și evenimente consecutive de reparare, ceea ce facilitează și transferul genic în sistemul dual de introducere a genelor. Tipul de plasmid influențează eficiența expresiei genice și inducerea răspunsului imun. Cele mai multe cercetări au utilizat promotorul imediat timpuriu al citomegalovirusului uman (HCMV) în realizarea unor constructe plasmidiale, pentru a intensifica expresia genică la nivelul situsului de injecție (Foecking și Hofstetter, 1996). În vederea ameliorării eficienței expresiei genice, consecutive transferului ADN in vivo, au fost însă utilizați și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
timpuriu al citomegalovirusului uman (HCMV) în realizarea unor constructe plasmidiale, pentru a intensifica expresia genică la nivelul situsului de injecție (Foecking și Hofstetter, 1996). În vederea ameliorării eficienței expresiei genice, consecutive transferului ADN in vivo, au fost însă utilizați și alți promotori. Cele mai multe cercetări asupra vaccinării genetice au fost realizate în cazul injectării vaccinurilor ADN pe cale subcutanată, intradermică sau intramusculară. Eficiența injectării depinde de capacitatea celulelor adiacente locului de injectare de a prelua ADN injectat, pentru a fi ulterior transcris și tradus
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
intensificare a antigenicității celulelor tumorale și demonstrează că în anumite cazuri, vaccinarea ADN poate oferi protecție terapeutică antitumorală. O altă cale de a ținti direct situsul tumoral cu vaccinuri ADN este aceea a plasării genei de interes sub controlul unui promotor cu specificitate de țesut, astfel că expresia genică se va desfășura numai la situsul tumoral. Această tehnică a fost utilizată într-un sistem model în care regiunea ce flanchează capătul 5’ al genei tirozinazei sau proteinei 1 tirozinaza (TRP-1) este
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
genei β-galactozidazei în liniile celulare de melanoame și în melanocitele umane și murine (Vile și Hart, 1993). De notat că expresia genică a fost detectată într-un număr mic de tipuri celulare, ceea ce denotă restricția expresiei genice. Dacă se cunosc promotori cu specificitate tumorală, este posibilă țintirea directă a tumorii cu gene corespunzătoare. Introducerea ADN mediată de receptori este o a treia metodă posibilă prin care genele pot fi direcționate precis spre tumori. Această metodă a fost testată inițial în modele
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
mediat celular, specific față de celulele tumorale care exprimă antigenul. Au fost realizate tratamente antitumorale cu vaccinuri ADN care țintesc în mod specific celulele melanomului, prin injecții directe intratumorale cu constructe ADN care au gena β-galactozidazei sub controlul direct al unui promotor cu specificitate melanocitară (Vile și Hart, 1993). Vaccinul a stimulat expresia β-galactozidazei în melanoamele B16 la șoarecii singenici, nu însă și în tumorile Colo 26. Aceste experiențe au evidențiat capacitatea de stimulare directă și specifică a expresiei genelor la situsul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
de carcinom de colon murin exprimă CEA uman și a fost utilizată pentru dezvoltarea unui vaccin ADN anti-CEA. S-a construit un plasmid ADN cu cADN care codifică întreaga catenă a CEA. Acest plasmid a fost pus sub controlul unui promotor/amplificator timpuriu de citomegalovirus (CMV)(Conry și colab., 1994). Injectarea intramusculară a vaccinului ADN la șoarecii C57/BL/6 a indus imunitatea umorală și/sau celulară pentru CEA uman, la toate animalele supuse experimentului. Pentru că CEA este produs într-o
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
a construit vectori de expresie care conțin diferite părți ale genei proteinei anvelopei care pot produce una sau mai multe forme ale proteinei anvelopei, deoarece inițierea internă poate avea loc la oricare dintre codonii ATG incluși. Trei constructe au utilizat promotorul citomegalovirusului (CMV) spre a dirija expresia genei S (pCMV-S care exprimă proteina S), gena pre-S2 + S (pCMV - S2S care exprimă proteina M+S) sau gena pre- S1 + pre- S2 + S (pCMV - S1S2S care exprimă proteina L+M+S). Un
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
sau gena pre- S1 + pre- S2 + S (pCMV - S1S2S care exprimă proteina L+M+S). Un al patrulea construct conține gena pentru întreaga anvelopă, dar exprimă doar regiunile pre S2 + S (proteinele M+S), deoarece acest construct este dirijat de promotorul endogen HBV, situat în cadrul domeniului pre-S1 (pHBV - S2S) (Davis, 1998). După infecția naturală pot fi detectați atât anticorpi anti-HBs, cât și anticorpi anti-HBc. Anticorpii anti-HBs oferă imunitate protectoare și toate vaccinurile utilizate până în prezent au fost proiectate să stimuleze imunitatea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
pus problema aplicării acestei metodologii pentru profilaxia hepatitei B. Davis (1993) a descris un model de imunizare anti-HBV, bazat pe ADN, prin injectarea intramusculară a unui plasmid recombinant ADN care exprimă HBs. S-au folosit vectori de expresie eucariotă și promotorul imediat timpuriu al citomegalovirusului (CMV), pentru a controla expresia genelor S (pCMV-S), preS2 + S (pCMV-S2.S) sau S1 + preS2 + S (pCMV - S1.S2.S) ale învelișului HBV. Proteinele conținând HBs, exprimate de vectori sunt S, S+M și S
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
controla expresia genelor S (pCMV-S), preS2 + S (pCMV-S2.S) sau S1 + preS2 + S (pCMV - S1.S2.S) ale învelișului HBV. Proteinele conținând HBs, exprimate de vectori sunt S, S+M și S+M+L. Un al patrulea vector utilizează promotorul HBV din domeniul pre-S1, pentru a controla expresia promotorilor S+M (pHBV - S2S) (vezi fig. 32.1). Injectarea intramusculară a șoarecilor cu astfel de vectori, reprezentând vaccinuri ADN antiHBV, a indus răspuns imun intens și susținut, atât umoral, cât și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
S) sau S1 + preS2 + S (pCMV - S1.S2.S) ale învelișului HBV. Proteinele conținând HBs, exprimate de vectori sunt S, S+M și S+M+L. Un al patrulea vector utilizează promotorul HBV din domeniul pre-S1, pentru a controla expresia promotorilor S+M (pHBV - S2S) (vezi fig. 32.1). Injectarea intramusculară a șoarecilor cu astfel de vectori, reprezentând vaccinuri ADN antiHBV, a indus răspuns imun intens și susținut, atât umoral, cât și celular. Rezultatele obținute de către Davis și colaboratorii (1998) au
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
om: HSV-1, HSV-2, citomegalovirusul uman (CMV), virusul varicela-zoster, virusul Epstein-Barr, virusul herpes uman-6 și virusul herpes uman-7. Infecțiile cu asemenea virusuri sunt litice și latente. Rouse și colaboratorii (1998) au utilizat un construct ADN pe baza plasmidului pcDNA I, utilizând promotorul imediat timpuriu al CMV, pentru a controla expresia genelor ICP27 și gB ale HSV-1. Vaccinul ADN a fost administrat șoarecilor BALB/c, de șase săptămâni, prin injecție intramusculară, repetată la o săptămână mai târziu cu 90 µg ADN, după care
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]