261 matches
-
experimental și modificările de pH sau osmolalitate. Citotoxicitatea ar trebui să se determine cu și fără activare metabolică în experimentarea principală, utilizând un indicator corespunzător al integrității și dezvoltării celulare, ca gradul de confluență, numărul de celule viabile sau indexul mitotic. Ar putea fi utilă determinarea citotoxicității și solubilității într-un test preliminar. Ar trebui să se utilizeze cel puțin trei concentrații analizabile. Dacă o substanță este citototoxică, concentrațiile respective ar trebui să acopere un domeniu de toxicități de la maximă la
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
obicei, concentrații care ar trebui să fie separate printr-un factor cuprins între 2 și √10 maximum. În momentul recoltării, concentrația maximă ar trebui să determine o reducere importantă a gradului de confluență, a numărului de celule sau a indexului mitotic (pentru toate mai mare de 50%). Indexul mitotic variază în timp după tratament și reprezintă doar o măsură indirectă a efectelor citotoxice/citostatice. Cu toate acestea, indexul mitotic este acceptabil pentru culturile în suspensie în care alte determinări de toxicitate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
printr-un factor cuprins între 2 și √10 maximum. În momentul recoltării, concentrația maximă ar trebui să determine o reducere importantă a gradului de confluență, a numărului de celule sau a indexului mitotic (pentru toate mai mare de 50%). Indexul mitotic variază în timp după tratament și reprezintă doar o măsură indirectă a efectelor citotoxice/citostatice. Cu toate acestea, indexul mitotic este acceptabil pentru culturile în suspensie în care alte determinări de toxicitate pot să fie dificile și nepractice. Datele de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
importantă a gradului de confluență, a numărului de celule sau a indexului mitotic (pentru toate mai mare de 50%). Indexul mitotic variază în timp după tratament și reprezintă doar o măsură indirectă a efectelor citotoxice/citostatice. Cu toate acestea, indexul mitotic este acceptabil pentru culturile în suspensie în care alte determinări de toxicitate pot să fie dificile și nepractice. Datele de cinetică a ciclului celular, cum ar fi timpul de generare medie (TGM), ar putea să reprezinte informații suplimentare. TGM este
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
statistice (3) (13). Semnificația statistică nu ar trebui să fie singurul factor determinant pentru a decide cu privire la un răspuns pozitiv. O creștere a numărului de celule poliploide poate să indice faptul că substanța de testat este capabilă să inhibe procesele mitotice și să producă aberații ale numărului de cromozomi. O creștere a numărului de celule cu cromozomi endoreduplicați poate să indice faptul că substanța de testat poate inhiba avansarea ciclului celular (17) (18). Dacă rezultatele obținute pentru o substanță de testat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, de exemplu gradul de confluență, datele privind ciclul celular, numărătoarea celulelor, indexul mitotic, - semnele de precipitare, - datele privind valoarea pH-ului și osmolalitatea mediului de tratare, dacă s-au determinat, - definirea aberațiilor, inclusiv a lacunelor, - numărul de celule cu aberații cromozomiale și tipul aberațiilor cromozomiale, prezentate separat pentru fiecare cultură tratată și cultură
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
stabilire a dozelor și să fie stabilite pentru fiecare caz în parte. Doza maximă se mai poate defini ca doza care produce anumite semne de toxicitate în măduva osoasă (de ex. o reducere cu mai mult de 50% a indexului mitotic). 1.5.4. Test limită Dacă un test realizat cu o doză de minimum 2 000 mg/kg greutate corp, administrată într-o singură repriză sau în două reprize în aceeași zi, nu produce efecte toxice detectabile și dacă o
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Măduva osoasă se extrage imediat după sacrificare, se expune la o soluție hipotonică și se fixează. Apoi, celulele se întind pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Se procedează la determinarea indexului mitotic, care este o măsură a citotoxicității, pe cel puțin 1 000 de celule pentru fiecare animal tratat (inclusiv martorii pozitivi) și pentru fiecare animal martor negativ netratat. Pentru fiecare animal se analizează minimum 100 de celule. Dacă se observă un
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - tipul și numărul aberațiilor, consemnate separat pentru fiecare animal, - numărul total de aberații pentru fiecare grupă împreună cu numărul mediu și deviațiile standard, - numărul de celule cu aberații pentru fiecare grupă împreună cu numărul mediu al acestora și deviațiile standard, - variațiile ploidiei
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 474, Testul in vivo de micronucleu pe eritrocite de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vivo de micronucleu pe celule de mamifere se utilizează pentru detectarea leziunilor cromozomilor sau ale aparatului mitotic al eritroblaștilor produse de substanța de testat; detectarea se realizează prin analiza eritrocitelor prelevate din măduva osoasă și/sau din celulele sângelui periferic ale animalelor, de obicei, rozătoare. Scopul testului de micronucleu este identificarea substanțelor care produc leziuni citogenetice ce
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
un metabolit reactiv nu atinge țesutul-țintă utilizarea prezentului test nu este potrivită. A se vedea și introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Centromer (kinetocor): porțiune sau porțiuni dintr-un cromozom care în timpul diviziunii celulare este legată cu fibrele fusului mitotic, ceea ce permite deplasarea ordonată a cromozomilor fiice către polii celulelor fiice. Micronuclee: nuclee mici, separate de nucleele principale ale celulelor și prezente în plus față de acestea, produse în timpul telofazei mitozei (meioză) de către fragmentele de cromozomi sau de cromozomii întregi întârziați
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile, independent de numărul de experimente. Rezultatele pozitive ale testului de micronucleu indică faptul că substanța induce formarea de micronuclee ca urmare a leziunilor cromozomiale sau leziunilor aparatului mitotic din eritroblaștii speciei testate. Rezultatele negative indică faptul că, în condițiile experimentale, substanța de testat nu produce micronuclee în eritrocitele imature ale speciei testate. Ar trebui să fie discutată probabilitatea ca substanța de testat sau metaboliții acesteia să ajungă în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în general, rozătoare. Prezentul test citogenetic in vivo permite detectarea aberațiilor cromozomiale din mitozele spermatogoniale. Alte celule țintă nu fac obiectul prezentului test. Pentru detectarea aberațiilor de tip cromatidic din celulele spermatogoniale, ar trebui să se examineze prima diviziune celulară mitotică după tratament, înainte ca leziunile respective să se piardă în diviziunile celulare ulterioare. Prin analiza cromozomilor meiotici pentru detectarea aberațiilor de tip cromozomial în diakineză-metafaza I când celulele tratate se transformă în spermatocite, se pot obține informații suplimentare referitoare la
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
se realizeze pentru toate animalele tratate și cele martori negativi, pe un eșantion total de 100 celule în diviziune pentru fiecare animal pentru a stabili un posibil efect citotoxic. Dacă se constată doar mitoză, ar trebui să se determine indexul mitotic în mimimum 1 000 de celule pentru fiecare animal. 2.2. EVALUAREA ȘI INTERPRETAREA REZULTATELOR Există câteva criterii pentru determinarea unui rezultat pozitiv, ca o creștere în funcție de doză a numărului relativ de celule cu aberații cromozomiale sau o creștere netă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - procentul de celule spermatogoniale în mitoză în raport cu cele din prima și a doua metafază meiotică, - tipul și numărul aberațiilor, consemnate separat pentru fiecare animal, - numărul total de aberații pentru fiecare grupă, - numărul de celule cu aberații pentru fiecare grupă, - relația
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de patogenitate intravenoasă (IVPI) în pui de găină de 6 săptămâni, mai mare decât la 1. 2; sau 2. Viruși H5 de tip A sau subtipul H7, a căror secvență nucleotidă a prezentat multipli acizi amino-bazici la locul de diviziune mitotică a hemaglutinei; 3. Virusul Bluetongue; 4. Virusul afecțiunilor de picior și de gură (stomatite); 5. Virusul variolei caprine; 6. Virusul herpesului porcin (maladia lui Aujeszky); 7. Virusul pestei porcine (virusul holerei porcine); 8. Virusul Lyssa/turbării; 9. Virusul maladiei Newcastle
jrc4712as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89878_a_90665]
-
fiind separate. Dacă ulterior scăderea temperaturii are loc treptat, dublul helix va fi refăcut, însă, în cazul unei răciri bruște, lanțurile rămân separate. Sinteză ADN-ului se numește replicare. Replicarea are loc în faza S a ciclului celular, înainte de diviziunea mitotica sau meiotica a celulei. Procesul de replicare este semiconservativ, dintr-o moleculă de ADN formându-se două molecule identice, fiecare conținând o catena „veche” și o catena nou sintetizată. ARN-ul este format dintr-un singur lanț de nucleotide (monocatenar
Genetică () [Corola-website/Science/299680_a_301009]
-
Celula sușă (denumită și celulă stem) este definită ca o celulă care, prin diviziune mitotică, produce două celule ce au capacitatea de a rămâne în stadiul de celulă sușă (păstrând astfel caracterul nediferențiat) sau de a se diferenția în urma unor diviziuni succesive. În acest fel, celula sușă se poate divide fie simetric, caz în care
Celulă sușă () [Corola-website/Science/307064_a_308393]
-
celule se numește diferențiere. Celulele sușă pot fi clasificate în funcție de plasticitatea sau de capacitatea lor de dezvoltare în celule stem totipotente, pluripotente și unipotente. Celulele totipotente sunt cele mai versatile. Zigotului rezultat în urma fertilizării și blastocitele rezultate din primele diviziunii mitotice ale oului sunt considerate celule totipotente, ele având potențialul de a genera toate celulele și țesuturile care vor da naștere la embrion. Celulele pluripotente sunt asemănătoare celor totipotente în sensul că pot da naștere mai multor categorii de țesuturi dar
Celulă sușă () [Corola-website/Science/307064_a_308393]
-
și potențial cancerigen .............................. 37 Test de toxicitate privind reproducerea la o generație .................................... 43 Test de toxicitate privind reproducerea la două generații ................................. 47 Toxicocinetica .................................................................................. 51 Teste de potențial mutagen și de depistare a potențialului cancerigen .................. 55 - Mutageneza - Saccharomyces cerevisiae ................................................ 55 - Recombinare mitotică - Saccharomyces cerevisiae ...................................... 58 - Test in vitro de mutație genică pe celule de mamifere .................................. 61 - Alterarea și repararea adn-ului - sinteza neprogramată a adn (uds - unscheduled dna synthesis) - test in vitro pe celule de mamifere 64 - Test in vitro de schimbare a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
informații complementare celor obținute în urma studiilor de potențial mutagen și care pot fi utile la interpretarea acestor studii. Dacă aceste investigații sunt necesare, poate fi adecvată una din metodele următoare care folosesc microorganisme eucariote sau celule de mamifere: (a) recombinație mitotică la Saccharomyces cerevisiae; (b) alterarea și repararea ADN - sinteză neprogramată ADN - celule de mamifere (in vitro) (c) schimbul de cromatide surori la celule de mamifere (in vitro) Alte teste indicatoare ale potențialului cancerigen Sunt disponibile probe de transformare a celulelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
numărul mutantelor, frecvența coloniilor supraviețuitoare și a mutantelor, relația doză/răspuns (dacă este cazul), evaluarea statistică a datelor, ― discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală: partea B. RECOMBINARE MITOTICĂ - SACCHAROMYCES CEREVISIAE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Recombinarea mitotică la Saccharomyces cerevisiae se poate produce
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Vezi introducerea generală: partea B. RECOMBINARE MITOTICĂ - SACCHAROMYCES CEREVISIAE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Recombinarea mitotică la Saccharomyces cerevisiae se poate produce între gene (sau, mai general, între o genă și centromerul său) și în interiorul genelor. Primul eveniment se numește încrucișare mitotică și dă naștere la produse reciproce, în timp ce al doilea eveniment este cel mai adesea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Recombinarea mitotică la Saccharomyces cerevisiae se poate produce între gene (sau, mai general, între o genă și centromerul său) și în interiorul genelor. Primul eveniment se numește încrucișare mitotică și dă naștere la produse reciproce, în timp ce al doilea eveniment este cel mai adesea nereciproc, și este denumit conversie genică. Încrucișarea mitotică se analizează, în general, prin producerea de colonii homozigote recesive sau sectoare produse în sușele heterozigote. Conversia genică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
gene (sau, mai general, între o genă și centromerul său) și în interiorul genelor. Primul eveniment se numește încrucișare mitotică și dă naștere la produse reciproce, în timp ce al doilea eveniment este cel mai adesea nereciproc, și este denumit conversie genică. Încrucișarea mitotică se analizează, în general, prin producerea de colonii homozigote recesive sau sectoare produse în sușele heterozigote. Conversia genică se analizează prin producerea de revertanți prototrofici într-o sușă auxotrofică heteroalelică, purtătoare a două alele defective diferite ale aceleiași gene. Tulpinile
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]