51 matches
-
înmulțirea agenților infecțioși și reglează funcția imunitara. 3002.10 3. Trusa de diagnostic pentru detectarea «in vitro» a virusului HIV din sânge, ser sau plasma umane prin test de imunoabsorbtie a enzimei legate (ELISA). Principalii componenți ai trusei sunt: 1°) cupule acoperite cu antigene HIV-I și HIV-II purificate și 2°) anticorpi de capră anti IgG și anti IgM umani cuplați la o peroxidaza. Toți anticorpii HIV existenți în serul sau în plasma analizată plasați în cupule se leaga la antigenele
EUR-Lex () [Corola-website/Law/139121_a_140450]
-
ai trusei sunt: 1°) cupule acoperite cu antigene HIV-I și HIV-II purificate și 2°) anticorpi de capră anti IgG și anti IgM umani cuplați la o peroxidaza. Toți anticorpii HIV existenți în serul sau în plasma analizată plasați în cupule se leaga la antigenele HIV după o incubație de 30 minute la 40°C. După spălarea cupulelor cu ajutorul unei soluții speciale care permite eliminarea tuturor substanțelor care nu sunt legate, cuplatul este ad��ugat în cupule și incubat suplimentar timp
EUR-Lex () [Corola-website/Law/139121_a_140450]
-
capră anti IgG și anti IgM umani cuplați la o peroxidaza. Toți anticorpii HIV existenți în serul sau în plasma analizată plasați în cupule se leaga la antigenele HIV după o incubație de 30 minute la 40°C. După spălarea cupulelor cu ajutorul unei soluții speciale care permite eliminarea tuturor substanțelor care nu sunt legate, cuplatul este ad��ugat în cupule și incubat suplimentar timp de 30 minute. După o spălare și o uscare suplimentare destinate a elimina cuplatele care nu sunt
EUR-Lex () [Corola-website/Law/139121_a_140450]
-
plasma analizată plasați în cupule se leaga la antigenele HIV după o incubație de 30 minute la 40°C. După spălarea cupulelor cu ajutorul unei soluții speciale care permite eliminarea tuturor substanțelor care nu sunt legate, cuplatul este ad��ugat în cupule și incubat suplimentar timp de 30 minute. După o spălare și o uscare suplimentare destinate a elimina cuplatele care nu sunt legate, este adăugată o soluție cromogena. Este necesar să se aștepte 30 minute pentru ca să intervină o eventuală schimbare de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/139121_a_140450]
-
suplimentare destinate a elimina cuplatele care nu sunt legate, este adăugată o soluție cromogena. Este necesar să se aștepte 30 minute pentru ca să intervină o eventuală schimbare de culoare și apoi se adaugă o soluție de oprire. Densitatea optică a fiecărei cupule este determinată în interval de 30 minute de la oprirea reacției și permite a determina dacă anticorpii anti HIV sunt prezenți în proba și în ce cantitate. Aplicarea Regulii generale de interpretare nr. 3b). 3002.90 1. Produse pe bază de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/139121_a_140450]
-
celule TO, într-un mediu L-15, care conține 5 % ser de fetus bovin, 2 % (v/v) mM de L-glutamină și 0,08 % (v/v) de 2-mercaptoetanol la 50 mM pe lame de cultură cu douăsprezece sau douăzeci și patru de cupule. Se pot utiliza alte descendențe celulare cu o eficacitate și sensibilitate confirmate pentru izolarea virusului AIS, ținând seama de variabilitatea sușei și de capacitatea diverselor sușe de a se reproduce în descendențe celulare diferite. Se inoculează o suspensie de organe
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
în culturi celulare tinere, în fază de creștere activă, în scopul obținerii unei diluții finale a materialului tisular, într-un mediu de cultură de 1: 1 000. La fiecare suspensie de organe, se adaugă 40 μl de inocul la o cupulă care conține 2 ml de mediu de cultură. Pentru a reduce la minim riscul contaminării încrucișate, se recomandă utilizarea unor lame separate, cu douăsprezece sau douăzeci și patru de cupule, în cazul eșantioanelor care provin din situri de acvacultură diferite. III.2
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
fiecare suspensie de organe, se adaugă 40 μl de inocul la o cupulă care conține 2 ml de mediu de cultură. Pentru a reduce la minim riscul contaminării încrucișate, se recomandă utilizarea unor lame separate, cu douăsprezece sau douăzeci și patru de cupule, în cazul eșantioanelor care provin din situri de acvacultură diferite. III.2.2. Se păstrează o lamă neinoculată care va servi ca martor negativ. Se inoculează o altă lamă cu un izolat de referință al virusului AIS, care va servi
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
lamă cu un izolat de referință al virusului AIS, care va servi ca martor pozitiv și se procedează în felul următor: se inoculează 100 μl dintr-un preparat mamă al virusului AIS (concentrație minimă: 107 TCID50 pe ml) în prima cupulă și se amestecă bine. Se transferă un volum din această materie din prima în a doua cupulă pentru a se obține o diluție de 1:10 și se amestecă bine. Se repetă operațiunea pe întreaga lamă pentru a se obține
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
procedează în felul următor: se inoculează 100 μl dintr-un preparat mamă al virusului AIS (concentrație minimă: 107 TCID50 pe ml) în prima cupulă și se amestecă bine. Se transferă un volum din această materie din prima în a doua cupulă pentru a se obține o diluție de 1:10 și se amestecă bine. Se repetă operațiunea pe întreaga lamă pentru a se obține șase diluții de 1:10. Preparatul mamă al virusului AIS poate fi stocat la - 80 șC timp
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
III.6). Dacă în a patrusprezecea zi nu se observă nici un ECP, se efectuează un test de hemadsorbție (III.4). III.4. Hemadsorbție Reproducerea virusului AIS în culturile celulare nu are întotdeauna drept rezultat apariția unui ECP. În consecință, fiecare cupulă este supusă unui test de hemadsorbție precum cel descris anterior sau unui test IF (vezi partea III.6.1). III.4.1. Din mijlocul culturii celulare din fiecare cupulă, inclusiv din cupulele martorilor pozitivi și negativi, se efectuează o prelevare
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
nu are întotdeauna drept rezultat apariția unui ECP. În consecință, fiecare cupulă este supusă unui test de hemadsorbție precum cel descris anterior sau unui test IF (vezi partea III.6.1). III.4.1. Din mijlocul culturii celulare din fiecare cupulă, inclusiv din cupulele martorilor pozitivi și negativi, se efectuează o prelevare și fiecare prelevare se introduce într-un tub steril etichetat. La fiecare cupulă se adaugă 500 μl de suspensie 0,2 % (v/v) de globule roșii de iepure sau
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
drept rezultat apariția unui ECP. În consecință, fiecare cupulă este supusă unui test de hemadsorbție precum cel descris anterior sau unui test IF (vezi partea III.6.1). III.4.1. Din mijlocul culturii celulare din fiecare cupulă, inclusiv din cupulele martorilor pozitivi și negativi, se efectuează o prelevare și fiecare prelevare se introduce într-un tub steril etichetat. La fiecare cupulă se adaugă 500 μl de suspensie 0,2 % (v/v) de globule roșii de iepure sau de cal spălate
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
test IF (vezi partea III.6.1). III.4.1. Din mijlocul culturii celulare din fiecare cupulă, inclusiv din cupulele martorilor pozitivi și negativi, se efectuează o prelevare și fiecare prelevare se introduce într-un tub steril etichetat. La fiecare cupulă se adaugă 500 μl de suspensie 0,2 % (v/v) de globule roșii de iepure sau de cal spălate sau de suspensie de 0,005 % de globule roșii de păstrăv curcubeu sau de somon de Atlantic spălate și se lasă
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
de cal spălate sau de suspensie de 0,005 % de globule roșii de păstrăv curcubeu sau de somon de Atlantic spălate și se lasă să incubeze la temperatura ambiantă timp de 45 de minute. Se îndepărtează globulele roșii și fiecare cupulă este spălată de două ori într-un mediu L-15. Fiecare cupulă este examinată la microscop. III.4.2. Prezența grupelor de globule roșii aderente pe suprafața celulelor SHK-1 sau TO indică infecția presupusă cu un ortomixovirus. Dacă testul de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
de păstrăv curcubeu sau de somon de Atlantic spălate și se lasă să incubeze la temperatura ambiantă timp de 45 de minute. Se îndepărtează globulele roșii și fiecare cupulă este spălată de două ori într-un mediu L-15. Fiecare cupulă este examinată la microscop. III.4.2. Prezența grupelor de globule roșii aderente pe suprafața celulelor SHK-1 sau TO indică infecția presupusă cu un ortomixovirus. Dacă testul de hemadsorbție este pozitiv, se efectuează imediat un test de identificare a virusului
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
pozitiv, se efectuează imediat un test de identificare a virusului (III.6). III.5. Subcultura sau trecerea III.5.1. Între a treisprezecea și a cincisprezecea zi se realizează o subcultură. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură în cupulele care conțin celule SHK-1 în fază activă de creștere pe lame cu douăsprezece cupule, apoi se lasă să incubeze la 14 ± 2 șC timp de cel mult optsprezece zile. Celulele de cultură se examinează de două ori la microscop pentru
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
Subcultura sau trecerea III.5.1. Între a treisprezecea și a cincisprezecea zi se realizează o subcultură. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură în cupulele care conțin celule SHK-1 în fază activă de creștere pe lame cu douăsprezece cupule, apoi se lasă să incubeze la 14 ± 2 șC timp de cel mult optsprezece zile. Celulele de cultură se examinează de două ori la microscop pentru căutarea unui ECP, mai întâi între a cincea și a șaptea zi, apoi între
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
într-un mediu L-15 care conține 5 % ser de fetus bovin, 2 % (v/v) de L-glutamină la 200 mM și 0,08 % (v/v) de 2-mercaptoetanol la 50 mM pe lame cu douăzeci și patru sau nouăzeci și șase de cupule, cu o densitate care creează o confluență mai mare de 50 %. Se pot utiliza și alte descendențe celulare sau un mediu de cultură cu o eficacitate confirmată. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură presupusă a fi infectată de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
confluență mai mare de 50 %. Se pot utiliza și alte descendențe celulare sau un mediu de cultură cu o eficacitate confirmată. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură presupusă a fi infectată de virus, la fiecare din cele două cupule, se amestecă și se transferă 225 μl în alte două cupule, la o diluție de 1:5. Alte două cupule neinoculate servesc drept martori. Eșantioanele diferitelor exploatații se tratează pe lame separate, la fel ca și martorii. Virusul este controlat
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
celulare sau un mediu de cultură cu o eficacitate confirmată. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură presupusă a fi infectată de virus, la fiecare din cele două cupule, se amestecă și se transferă 225 μl în alte două cupule, la o diluție de 1:5. Alte două cupule neinoculate servesc drept martori. Eșantioanele diferitelor exploatații se tratează pe lame separate, la fel ca și martorii. Virusul este controlat pe un izolat de referință al virusului AIS. III.6.1
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
confirmată. Se adaugă 225 μl de suspensie de cultură presupusă a fi infectată de virus, la fiecare din cele două cupule, se amestecă și se transferă 225 μl în alte două cupule, la o diluție de 1:5. Alte două cupule neinoculate servesc drept martori. Eșantioanele diferitelor exploatații se tratează pe lame separate, la fel ca și martorii. Virusul este controlat pe un izolat de referință al virusului AIS. III.6.1.2. Lamele se incubează la 14 ± 2 șC și
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
la 14 ± 2 șC și sunt examinate la microscop timp de cel mult șapte zile. Dacă se observă un ECP precoce sau dacă nu se observă nici un ECP în termen de șapte zile, etapa următoare este fixarea. În acest scop, cupulele se spală cu PBS și se fixează prin incubare cu 80 % acetonă, timp de 20 de minute, la temperatura ambiantă. Lamele sunt lăsate să se usuce în aer și apoi sunt colorate imediat sau sunt stocate la o temperatură de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
ambiantă. Lamele sunt lăsate să se usuce în aer și apoi sunt colorate imediat sau sunt stocate la o temperatură de 0-6 șC timp de cel mult 24 de ore înainte de colorare. III.6.1.3. Se marchează dubluri de cupule cu anticorpul monoclonal antivirus AIS 3H6F8 sau cu un alt anticorp monoclonal cu o eficacitate și specificitate confirmate, se diluează în PBS și se lasă la incubat, la o temperatură de 37 ± 4 șC, timp de 30 de minute. Se
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
37 ± 4 șC, timp de 30 de minute. Se îndepărtează anticorpul monoclonal și se spală lamele de trei ori cu 0,05 % Tween 20 în PBS. Se adaugă un conjugat anti-IgG de șoarece marcat FITC, diluat în PBS în fiecare cupulă și se incubează la 37 ± 4 șC, timp de 30 de minute. De notat: diluțiile diferitelor loturi de anticorp monoclonal și conjugat FITC se optimizează în fiecare laborator. Se îndepărtează anticorpul și se spală lamele de trei ori cu 0
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]