942 matches
-
culturile celulare infectate și diluat în soluție tampon carbonată/bicarbonată, la un pH de 9,6. Plăcile de ELISA se incubează peste noapte la 4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de diluție dublă, de la 1/5 ia 1/640, de-a lungul coloanei 1 în soluția tampon de blocare (SFT care conține 0,05 % (v
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
tampon de blocare (SFT care conține 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) lapte praf smântânit (Cadbury's Marvel^TM)și 1,0 % (v/v) ser de la bovine adulte) pentru a reieși un volum total de 50 f2æl/godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
a reieși un volum total de 50 f2æl/godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă câte o diluție 1/5 din fiecare ser de testat în soluția tampon de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă câte o diluție 1/5 din fiecare ser de testat în soluția tampon de blocare, în godeurile corespunzătoare din coloanele de la 3 la 12 (10/f2æl ser + 40 æl de soluție tampon de blocare); sau 1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie dublă de diluție pentru fiecare probă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
de blocare); sau 1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie dublă de diluție pentru fiecare probă de testat (de la 1/5 la 1/640) în soluție tampon de blocare, în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
1/5 la 1/640) în soluție tampon de blocare, în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum un volum final de 100 f2æl). 1.1.5.1. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.2. Plăcile
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum un volum final de 100 f2æl). 1.1.5.1. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.2. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.5.3. Se adaugă 50 f2æl de ser de iepure anti-cobai conjugat cu peroxidază din hrean, diluat în prealabil în soluție tampon de blocare, în fiecare godeu. 1.1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05% (v/v) (1/2.000 dintr-o soluție de H(2)O(2) 30%). Se adaugă 50 f2æl de soluție OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe bancă timp de 10 minute la temperatura camerei. Se oprește reacția prin adăugarea de 50 f2æl/godeu de acid sulfuric [H(2)SO(4)] 1 M. --------- Pct. 1.1.6. al anexei 4 a fost
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
dintr-o soluție de H(2)O(2) 30%). Se adaugă 50 f2æl de soluție OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe bancă timp de 10 minute la temperatura camerei. Se oprește reacția prin adăugarea de 50 f2æl/godeu de acid sulfuric [H(2)SO(4)] 1 M. --------- Pct. 1.1.6. al anexei 4 a fost modificat de pct. 22 al art. II din ORDINUL nr. 43 din 22 februarie 2007 , publicat în MONITORUL OFICIAL nr. 155 din
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
492 nm. 1.2. Exprimarea rezultatelor 1.2.1. Utilizându-se un computer, se determină valorile densității optice (DO) și procentul de inhibiție (PI) pentru serul de testat și cel de control pe baza valorii medii înregistrate în cele 4 godeuri de control cu ser de cobai. Datele exprimate ca valori DO și PI sunt utilizate pentru a se determina dacă testul s-a efectuat în limite acceptabile. Limitele superioare de control (LSC) și limitele inferioare de control (LIC) pentru serul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
Orice placă ce nu se conformează criteriilor de mai sus trebuie respinsă. Totuși, dacă titrul serului pozitiv de control este mai mare de 1/480, iar probele de testat sunt tot negative, atunci probele de testat negative pot fi acceptate. Godeurile duplicat cu seruri negative de control și godeurile duplicat goale trebuie să înregistreze valori ale PI între +25% și -25% și, respectiv, între +95% și +105%. Neîncadrarea în aceste limite nu face placa să fie nevalidă, dar sugerează că se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
mai sus trebuie respinsă. Totuși, dacă titrul serului pozitiv de control este mai mare de 1/480, iar probele de testat sunt tot negative, atunci probele de testat negative pot fi acceptate. Godeurile duplicat cu seruri negative de control și godeurile duplicat goale trebuie să înregistreze valori ale PI între +25% și -25% și, respectiv, între +95% și +105%. Neîncadrarea în aceste limite nu face placa să fie nevalidă, dar sugerează că se dezvoltă culoarea de fond. --------- Pct. 1.2.1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
50 %). Probele care înregistrează valori ale PI mai mari de 50 % sunt înregistrate drept pozitive. Probele care înregistrează valori ale PI mai mici de 50 % sunt înregistrate ca negative. Probele care înregistrează valori ale PI peste și sub pragul pentru godeurile duplicat sunt considerate a fi neconcludente. Astfel de probe pot fi retestate prin testul punctual sau prin titrare. Probele pozitive pot de asemenea să fie titrate pentru a furniza o indicare a gradului de pozitivare. Gol Gol Testul descris mai
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
de spălare). Plăcile se tamponează ușor cu material absorbant pentru a îndepărta reziduurile de la spălare. 2.1.1.3. Plăcile se blochează cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT) + 5 % (w/v) lapte smântânit (lapte praf smântânit Nestle^TM), 200 f2æl/godeu, timp de o oră, la 37°C. 2.1.1.4. Se îndepărtează soluția de blocare și se tamponează ușor plăcile cu un material absorbant. 2.1.2. Probele de testat 2.1.2.1. Probele de ser ce urmează
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
2.1.2.1. Probele de ser ce urmează a fi testate și serul de control pozitiv și negativ, sunt diluate 1/25 în SSFT + 5 % (w/v) lapte smântânit + 0,05 % (v/v) Tween 20, câte 100 f2æl pe godeu. Se incubează timp de o oră la 37°C. 2.1.2.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.3. Conjugatul 2.1.3.1. Se dispersează câte 100 f2æl pe godeu
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
godeu. Se incubează timp de o oră la 37°C. 2.1.2.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.3. Conjugatul 2.1.3.1. Se dispersează câte 100 f2æl pe godeu de gamaglobuline anti-cal conjugate cu peroxidază din hrean, diluate în SFT + 5 % lapte + 0,05 % Tween 20, la un pH de 7,2. Se incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
de 7,2. Se incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
3.1.2. Probele de testat și controale 3.1.2.1. Pentru verificare: - se diluează 1/10 serurile de testat și cele de control în SFTT, direct pe placă, pentru a se obține un volum final de 100 f2æl/godeu. Se incubează o oră la 37°C. 3.1.2.2. Pentru titrare: se prepară o serie dublă de diluție din serurile de testat și testele de control pozitive (100 f2æl/godeu) de la 1/10 la 1/1.280 în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
se obține un volum final de 100 f2æl/godeu. Se incubează o oră la 37°C. 3.1.2.2. Pentru titrare: se prepară o serie dublă de diluție din serurile de testat și testele de control pozitive (100 f2æl/godeu) de la 1/10 la 1/1.280 în 8 godeuri. Probele de control negative sunt testate la o diluție de 1/10. ---------- Pct. 3.1.2.2. al anexei 4 a fost modificat de pct. 24 al art. II din
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
incubează o oră la 37°C. 3.1.2.2. Pentru titrare: se prepară o serie dublă de diluție din serurile de testat și testele de control pozitive (100 f2æl/godeu) de la 1/10 la 1/1.280 în 8 godeuri. Probele de control negative sunt testate la o diluție de 1/10. ---------- Pct. 3.1.2.2. al anexei 4 a fost modificat de pct. 24 al art. II din ORDINUL nr. 43 din 22 februarie 2007 , publicat în MONITORUL
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]